微小RNA-92b在儿童急性横贯性脊髓炎发生机制中的作用

目的筛选调控儿童急性横贯性脊髓炎的关键微小RNA(miRNA),并验证其调控的相关通路。方法本研究纳入12例急性横贯性脊髓炎患者作为ATM组,纳入3例正常脑脊液儿童作为对照组,使用microarray4.0芯片检测儿童急性横贯性脊髓炎患者脑脊液中发生改变的miRNA。运用生物信息学方法论证发挥关键调控作用的miRNA并进行靶基因预测。实时荧光定量PCR(qPCR)技术进行生物学与技术重复。用酶联免疫吸附法(ELISA)与Westernblot技术检测关键miRNA靶蛋白表达量。在背根神经节神经元中抑制/过表达关键候选miRNA,进行体外功能验证。应用夫拉平度(Flavopiridol)抑制CDKs的活性来验证miR-92b是通过p57-CDKs-GAP-43通路发挥作用的。结果急性横贯性脊髓炎患者脑脊液样本中miR-92b特征性上调明显。生物信息分析结果显示p57可为miR-92b的靶基因。miR-92b与p57蛋白样本间表达趋势相反。体外细胞实验显示miR-92b过表达组的神经元轴突生长明显弱于对照组;miR-92b抑制组的神经元轴突明显延长;在miR-92b过表达+Flavopiridol组,背根神经节神经元轴突与对照组相比依旧显著延长。Westernblot实验结果显示miR-92b过表达组的p57和GAP-43蛋白表达低于对照组;与对照组相比,miR-92b抑制组的p57和GAP-43蛋白表达显著上调;而在miR-92b过表达+Flavopiridol组,p57表达低于对照组,GAP-43蛋白的表达量高于对照组。结论儿童急性横贯性脊髓炎患者miR-92b的上调导致了p57的下调,使CDKs的活性增强,进而抑制GAP-43蛋白的表达和脊髓损伤区域轴突的再生。miR-92b是儿童急性横贯性脊髓炎治疗的关键靶点之一。