LPS诱发急性肺损伤中miR-16的表达及功能研究

目的观察脂多糖(LPS)诱发的急性肺损伤中microRNA-16(miR-16)的表达变化及其对炎症因子TNF-α等表达的调节。方法通过生物信息学分析不同物种间miR-16基因序列的保守性。通过小鼠气道向其肺内注入LPS(10 mg.kg-1),构建小鼠急性肺损伤模型,采用实时荧光定量PCR分析miR-16、IL-6、TNF-α的表达水平;在培养的肺上皮细胞A549中采用miR-16 mi mic对miR-16进行过表达研究。结果 miR-16基因序列在斑马鱼、大鼠、小鼠和人中序列高度保守;miR-16在急性肺损伤病理过程中表达明显降低(P<0.05);A549细胞中miR-16的表达水平显著升高(P<0.01),相反,LPS诱导的炎症因子IL-6、TNF-α的表达水平显著降低(P<0.05)。结论 miR-16在LPS诱发的急性肺损伤病理过程中的表达降低,miR-16过表达能够显著抑制LPS对炎症的诱发作用,表明miR-16在急性肺损伤的炎症发生过程中发挥着重要功能。

微小核糖核酸荧光定量聚合酶链反应检测方法的建立及其在急性肺损伤中的表达分析

目的探讨微小核糖核酸(miRNA)荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测方法的建立条件,并运用这一方法对急性肺损伤中miRNAs的表达进行分析。方法设计miRNA特异的颈环结构反转录引物,对miRNA进行反转录,得到miRNA的环状脱氧核糖核酸(cDNA)。分析miRNA cDNA定量PCR过程中的标准曲线和熔解曲线,确定该检测方法的检测灵敏性和特异性。应用miRNA的荧光定量PCR检测方法分析脂多糖(LPS)诱发的急性肺损伤小鼠中miRNA的表达。结果 miRNA特异的颈环结构反转录引物实现了miRNA长度的延长。通过对心肌特异表达的miRNA-1进行实时荧光定量PCR检测,表明miRNA-1是心肌组织特异表达的miRNA。通过该方法对LPS诱发的急性肺损伤小鼠(急性肺损伤组)进行分析,发现与对照组比较,急性肺损伤组的miRNA-23a的相对表达量显著降低(P<0.05),miRNA-155、miRNA-451的相对表达量显著升高(P值均<0.01),miRNA-21的相对表达量未发生改变(P>0.05)。结论本实验建立的miRNA实时荧光定量PCR具有较高的精确性和特异性,通过该方法发现多种miRNA在LPS诱发的急性肺损伤中异常表达。

microRNAs在脂多糖诱导的结肠癌细胞炎性反应模型中的表达

目的:研究microRNAs(miRNAs)在脂多糖(LPS)诱导的结肠癌细胞HT-29炎性反应模型中的表达。方法:用400 ng/mL的LPS处理HT-29细胞48 h,构建HT-29细胞炎性反应模型(LPS组),将未经LPS处理的HT-29细胞作为对照组;抽提细胞总RNA,检测HT-29细胞中白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)的表达水平;用颈环结构引物反转录miRNAs,应用实时荧光定量PCR测定其表达水平。结果:LPS组中IL-6和CRP的表达较对照组显著升高(P<0.01),表明建模成功。LPS组miR-22、miR-26、miR-214的表达水平较对照组低,而miR-23的表达水平较对照组高(P<0.05);两组miR-24、miR-30、miR-181的表达水平差异无统计学意义。结论:miRNAs可能参与LPS诱导的HT-29结肠癌细胞的炎性反应过程。