大肠癌相关基因表达的早期诊断意义

为了提高大肠癌的早期诊断率,我们对结肠癌、结肠息肉、溃疡性结肠炎及结肠炎患者结肠镜检查并进行病理诊断,然后对 p53,DCC,APC,C-myc,K-ras 及 p73基因进行检测,并设正常对照组,探讨多个基因与大肠癌的关系和早期诊断意义.1 材料和方法1.1 材料 1999-03/1999-10我院进行肠镜检查取结肠癌组织40例,结肠息肉组织49例,溃疡性结肠炎组织12例,结肠炎6例及正常对照组13例.年龄5岁～81岁,平均49岁.男87例,女33例.酚、氯仿、无水乙醇、蛋白酶 K、异丙醇等化学试剂购自原平试剂公司;mRNA 提取采用 Promeg 公司

大肠癌及癌旁组织中p73基因的表达

大肠癌是常见的消化道肿瘤,是多因素、多阶段、多基因共同作用的结果.目前已证实关系密切的有K-ras,C-myc,p53,PC,DCC等.p73是新近发现的基因,与大肠癌关系尚不明确[1-9],我们通过检测大肠癌及癌旁组织中的p73表达,以期探讨p73基因在大肠癌发生发展中的作用. 1 材料和法 1.1 材料大肠癌组织40例及相应远离癌灶5的非癌组织由264医院消化内镜中心提供,标本取得后立即用液氮冷却或放至-20℃冰箱保存.

定量检测Hp cagA基因内参标模板的构建及测序

目的 构建竞争性定量PCR检测幽门螺杆菌(Hp)cagA基因的内参标模板并做序列测定。 方法 根据cagA基因及Lac Ⅰ蛋白的特异性结合部位的序列,设计二对PCR引物(cagAp1,cagAp2,cagAp3,cagAp4)。其中cagAp1及cagAp3用于扩增cagA基因2593～2788位碱基间196bp的片段,cagAp2及cagAp4用于扩增2789～2993位碱基之间204bp的核酸片段;在cagAp1的5′-端引入了BamHⅠ的限制性酶切位点,在cagAp2的5′-端结合了Sal Ⅰ的限制性酶切点。在cagAp3的5′-端引入Lac Ⅰ蛋白的特异性结合序列(21bp),在cagAp4的5′-端结合了cagAp3之5′-端21个碱基的反义DNA序列。利用重组PCR,将乳糖操纵子中Lac Ⅰ蛋白的特异性结合序列重组入cagA基因400Lp的片段中,得到cagA基因片段的重组体(rfcagA)。将重组rfcagA定向克隆入pUC19进行序列测定。 结果 用DNA序列分析仪双向测定rfcagA的序列,其含400bp的cagA片段及Lac Ⅰ蛋白特异性结合部位的序列(21bp),一级结构完全正确。 结论 内参标模板rfcagA构建,对竞争性定量PCR检测Hp cagA基因的方法的建立具有重要价值。

胶体金免疫斑点法检测人巨细胞病毒pp150抗体

目的 建立一种简便、快速的检测血清中人巨细胞病毒 (HCMV)抗 pp15 0抗体的胶体金免疫斑点法。 方法 采用Frens法制备胶体金颗粒 ,标记葡萄球菌A蛋白 (SPA) ,将本所利用基因工程技术生产的 pp15 0抗原固定于 0 45 μm孔径的硝酸纤维素膜上 ,制成免疫斑点检测装置。血清中抗pp15 0IgG与硝酸纤维素膜上的抗原结合 ,然后滴加胶体金标记的SPA ,在膜上可形成肉眼可见的红色斑点。结果 胶体金免疫斑点法与ELISA试剂盒对比检测了 2 0 0份临床确诊血清标本中抗 pp15 0IgG抗体 ,胶体金法的特异性和敏感性分别为 92 %和 90 %。 结论 胶体金免疫斑点法检测血清中的抗 pp15 0抗体特异性、灵敏度较高 ,简便快速 。

TDI-FP法分析肝细胞癌组织中HBV核心启动子双突变

目的:通过TDI-FP法检测肝细胞癌组织中HBV DNA核心启动子区A1762 T和G1764A双突变并分析二者之间的相关性,同时建立一种新的突变检测方法.方法:以20例肝细胞癌组织为研究标本,通过PCR扩增含有HBV DNA核心启动子区的DNA片段,然后用TDI-FP法检测R110或TAMRA标记ddNTP的FP值,鉴定nt1762和nt1764的基因型.结果:20例肝细胞癌组织中经HBV检测试剂盒鉴定后,18例为HBV感染阳性,阳性率为90%.经TDI-FP检测,其中有13例为T1762和A1764双突变型,1例为T1762-A1764/A1762-G1764突变杂合型,4例检测结果为阴性.经测序,阳性结果及突变杂合型与TDI-FP结果完全吻合,阴性结果中2例在nt1762前有8个核苷酸缺失突变,导致突变检测引物无法与模板结合,故产生TDI-FP检测出现假阴性结果.在肝细胞癌组织HBV DNA中,Ti762-A1764突变阳性率为75%,突变杂合型为5%,野生型为10%.结论:在肝细胞癌组织中,HBV感染率非常高,而且其核心启动子区出现nt1762和nt1764双突变率较高,提示双突变与肝细胞癌关系密切;同时本实验所建立的TDI-FP法操作快速简便,可以进行高通量自动化操作,具有进一步推广应用的前景.