基因工程菌生产rhG-CSF发酵培养基的研究

在摇瓶中对工程菌DH5α pBV2 2 0生产rhG CSF的发酵培养基进行了研究 ,从几种常用的细菌培养基中筛选适合工程菌表达rhG CSF的M9培养基。利用正交试验优化出生产重组人rhG CSF的优化培养基配方 ,其中优化碳源含量为 2 %的葡萄糖 ,氮源为 2 5 %的酵母粉、3%的蛋白胨和 0 1 %的 (NH4) 2 SO4以及少量的无机盐。使用优化培养基可使rhG CSF的表达量达到33 8% ,比优化前提高了 48 9%。

胆固醇对兔胆管成纤维细胞增生的影响

目的:研究胆固醇(CL)对兔胆管成纤维细胞增生的影响,并对其机制进行探讨。 方法:分离、纯化、培养兔胆管成纤维细胞,完全随机分为两组:对照组、中等浓度胆固醇组(0.6g/L)和高浓度胆固醇组(1.2g/L)。以MTT法测定各组细胞的增生情况、并以流式细胞仪(FCM)测定细胞周期。进而采用免疫组化法定量分析各组细胞内增生细胞核抗原(PCNA)的表达情况。 结果:中等浓度CL(0.4～0.8g/L)可以使培养的兔胆管成纤维细胞MTT A_(490nm)值显著升高,CL(0.4g/L)A_(490nm值为0.422±0.015,较对照组增加51.4％(P<0.05);CL(0.6g/L)A_(490nm)值达到最大为0.486±0.019,较对照组增加95.2％(P<0.01);0.8g/L CL组A_(490nm)值为0.472±0.017较对照组增加89.6％(P<0.01);高浓度CL(1.2g/L)明显抑制细胞生长,A_(490nm)值为0.163±0.018,较对照组下降34.5％(P<0.05)。流式细胞仪分析显示,与正常组相比,中等浓度CL(0.6g/L)显著增加G_2/M期细胞比例,从9.8％上升为13.0％,S期细胞比例从11.7％上升为33.4％,而显著减少进入G_0/G_1期的细胞比例,从78.5％下降为53.6％。高浓度CL(1.2g/L)显著减少G_2/M期细胞比例,从9.8％降低为6.7％,S期细胞比例从11.7％下降为5.9％,而显著增加进入G_0/G_1期的细胞比例,从78.5％上升为87.4％。

氟尿嘧啶大粒径明胶微球的制备与性质

目的 制备大粒径明胶微球 ,研究其体外和颈动脉栓塞化疗的药物释放特性。方法 用改良的双相乳化冷凝法制备大粒径氟尿嘧啶明胶微球 ,紫外分光光度法测定药物含量、药物包裹率、载药量和体内外药物释放特性。用显微照像仪测定了大粒径微球的平均粒径。在X射线监控下 ,将大粒径氟尿嘧啶明胶微球栓塞在兔颈外动脉 ,以氟尿嘧啶溶液为对照 ,不同时间点取血样测试血药浓度进行统计分析。结果 大粒径氟尿嘧啶明胶微球粒径均匀 ,平均粒径 (2 32± 32 ) μm ,药物包裹率85 % ,载药量 12 .2 % ,体外 4 8h缓释 95 %。颈动脉栓塞后 ,可使较小用药剂量在局部较长时间内维持较高的药物浓度。

氟尿嘧啶纳米乳剂的制备与性质

目的研究氟尿嘧啶大豆油纳米乳剂的相图、稳定性、载药量及药物的体外释放特点。方法在三元相图的基础上优选出制备纳米乳剂的最佳处方,用透射电子显微镜观测纳米乳剂粒径的大小,HPLC法测定纳米乳剂中氟尿嘧啶的含量及体外释放性能。结果纳米乳剂颗粒为圆形或椭圆形,粒径范围20±10nm,药物包裹率85.06%,体外11h药物释放50%,50h缓释95%。结论本实验制备的纳米乳剂性质稳定,与游离的药物相比有明显的缓释性能。

分光光度法测定阿霉素脂质体中的磷脂含量

目的：测定阿霉素脂质体中的磷脂含量。方法：用乙醇破坏阿霉素脂质体，再用氯仿萃取，在４８８ｎｍ 处用硫氰铁铵分光光度法测定。结果：在５．０～５０ ．０ｍｇ·Ｌ－１ 浓度范围内，吸光度与磷脂浓度呈良好的线性关系，平均回收率为９９．３ ％ 。线性方程为Ａ＝３ ．８４６Ｃ－０ ．００５７，ｒ ＝０．９９９ ８。结论：用硫氰铁铵分光光度法测定阿霉素脂质体中的磷脂含量，其方法简单、快速、灵敏。

5-羟色胺对去甲肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚的影响

目的 了解 5 羟色胺 (5 HT)对去甲肾上腺素(NE)所致心肌肥厚有何影响。方法 大鼠分别ip5 HT 2mg·kg- 1,NE 2mg·kg- 1或NE 2mg·kg- 1+ 5 HT 2mg·kg- 1。每日 2次 ,连续给药 15d ,d 16麻醉 ,颈动脉插管 ,观察累积iv不同剂量 5 HT对平均动脉压和心电图的影响 ,之后处死大鼠 ,观察心重与体重之比。结果 累积iv 5 HT ,NE组和NE + 5 HT组大鼠血压明显升高 ,诱发室速和室颤的鼠数明显增加 ,但该两组间无显著差异。NE组心室重与体重之比明显增加 ,NE + 5 HT组较NE组相比进一步增加。结论 5 HT加强NE诱发大鼠心肌肥厚和心律失常的作用。

对氯对甲氧基苯乙酮缩氨基硫脲合铜(Ⅱ)配合物的合成表征及其抗癌活性

目的 合成和表征对氯、对甲氧基苯乙酮缩氨基硫脲与铜 (Ⅱ )形成的 4个配合物 ,并观察其中 2个配合物的体内、外抗癌活性。方法 配体和配合物的合成参照文献[1、2 ] ,采用元素分析、摩尔电导和红外光谱对这些配合物进行表征。用胎盘兰染色法测定 2个配合物对S180 腹水癌细胞的体外抗癌活性 ,采用小鼠移植性肿瘤模型观察其体内抗癌作用。结果 2个配体与铜 (Ⅱ )形成的 4个配合物均是以亚胺基N原子和S原子为配位的二齿配合物。其中 2个配合物对氯苯乙酮缩氨基硫脲合铜 (Ⅱ )和对甲氧基苯乙酮缩氨基硫脲合铜 (Ⅱ )具有较好的体内、外抗癌活性。结论 铜 (Ⅱ )

MTS1真核表达载体的构建和鉴定

多种瘤抑制基因(MTS1)表达产物P16蛋白作为细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)的抑制物,使Rb蛋白磷酸化受阻,细胞不能由G_1期进入S期,进而抑制细胞分裂增殖,为进一步开展消化道肿瘤防治研究,我们构建了MTS1真核表达载体,现报告如下。 1 材料和方法 1.1 材料 pUC19-P16质粒和pcDNA3真核表达载体由第四军医大学生化教研室提供,Plasmid purification kit购自上海华顺公司,PCR purification kit购自美国Clontech公司。BamHI,EcoRI,T_4 DNA ligase,Xba Ⅰ,Hind Ⅲ等限制酶,DNA

两种新型抗自由基药物的合成及抗自由基活性的研究

目的 为了提高心血管类药物及结核类药物的抗自由基活性 ,对某些药物作结构修饰 ,以期达到药物与自由基清除剂的双重作用。方法 分别以二苯甲基哌嗪和咖啡酸、儿茶醛和对氨基水杨酸为原料 ,制得 (E) 1 二苯甲基 4 [3 (3,4 二羟苯基 ) 2 丙烯基 ]哌嗪 (I)和儿茶醛缩对氨基水杨酸 (Ⅱ ) ,并通过黄嘌呤 -黄嘌呤氧化酶 -鲁米诺化学发光体系检测其清除O2 · -自由基的活性。结果 合成的两种新化合物经元素分析、红外光谱和核磁共振谱测定 ,与结构相符。化学发光法测定SOD样活性 ,(I)溶液的 [ID]50 为 75 6nmol·L-1;(Ⅱ )溶液的 [ID]50 为 74 5nmol·L-1。结论 新合成的两种化合物不但保留了原药物的有效结构部位 。