透射电镜及激光共聚焦技术观察体外丙型肝炎病毒感染的人胎盘滋养层细胞

目的:探讨体外分离培养的人体胎盘滋养层细胞感染丙型肝炎病毒(HCV)的可能性,以及滋养层细胞感染HCV后的超微结构改变.方法:采用胰蛋白酶消化法及Percoll密度梯度分离法分离培养人胎盘组织中滋养层细胞后,以HCVRNA阳性血清对滋养层细胞进行体外感染试验,应用RT-PCR法定性及定量检测感染后细胞培养上清中HCVRNA,透射电镜观察HCV感染后滋养层细胞的超微结构改变,并用激光共聚焦技术观察免疫荧光染色后HCVNS5在滋养层细胞中的定位.结果:HCV感染后的细胞培养上清中可间断检测到HCVRNA,而对照组始终未检出;激光共聚焦观察显示HCVNS5主要定位于细胞核周;HCV感染后滋养层细胞超微结构发生了明显改变,主要表现为溶酶体大量增生,粗面内质网增生,脂滴减少,出现空泡状结构,并可观察到病毒样颗粒.结论:HCV可以感染滋养层细胞,并导致滋养层细胞的超微结构发生类似黄病毒科病毒感染后的改变.

肝炎病毒感染在非霍奇金淋巴瘤发病中的作用

目的:探讨丙型肝炎病毒和乙型肝炎病毒感染在非霍奇金淋巴瘤发病中的作用。 方法:采用ELISA和反转录-聚合酶链反应的方法检测了74例非霍奇金淋巴瘤患者外周血的抗-HCV抗体和HCVRNA;同时检测了110名健康献血员中抗-HCV抗体和HCVRNA。用ELISA方法检测了74例非霍奇金氏淋巴瘤患者和110名献血员。同时采用聚合酶链反应对于非霍奇金淋巴瘤患者外周血淋巴细胞中Bcl-2/J_H基因重排情况进行了检测。 结果:在74例非霍奇金氏淋巴瘤中的抗-HCV抗体阳性的为4例,阳性率为5.3％,HCVRNA阳性者为6例,阳性率为8.1％;110名健康献血员的抗-HCV抗体的阳性率为0.9％;HCVRNA阳性率为1.8％。非霍奇金淋巴瘤中的抗-HCV抗体阳性率较健康献血员显著增高,而HCVRNA的阳性率也较健康献血员有增高。经x^2检验P>0.05,无显著性差异。在74例非霍奇金淋巴瘤中HBsAg阳性者有3例(4％),而在献血员中为2名(1.7％)。在74例非霍奇金淋巴瘤中有18例外周血检测出Pcl-2/J_H基因重排,且转位均发生在Bcl-2的主要断裂点区域(MBR)。经x^2 test P<0.01,在非霍奇金淋巴瘤中Bcl-2/J_H基因重排和HCV感染有明显的相关性。 结论:HCV和HBV的感染与非霍奇金氏淋巴瘤的发生可能不存在一定的相关关系。

感染性腹泻病原及诊断程序

感染性腹泻病(infectious diarrhea diseases)是一组多病原体、多因素引起的肠道传染病,长期危害着人类的健康.近年来,我国对感染性腹泻病的研究与控制已取得了重大进展,尤其是1992年在国家卫生部领导下制定了我国统一的《中国腹泻病诊断治疗方案》,对加强我国感染性腹泻病管理,不断改进腹泻病的诊断治疗水平,以及合理使用抗生素等方面起到重要作用.但由于经济文化、卫生条件及地区特殊性等方面存在的差异,加之旅游业迅速发展,外事、商务活动频度的增加,给感染性腹泻病的防治带来许多问题和困难,使其发病率仍列各类传染病之首位.然而,与现代医学突飞猛进的发展相比,感染性腹泻的研究进展显得较为缓慢,为了加强这个领域的研究,使其临床应用和基础理论研究不断深入,本刊特邀有关专家就感染性腹泻病的诊断和治疗问题,结合自己的研究和应用经验,进行系统介绍和讨论,以期对读者有所裨益.

感染性腹泻病中的特殊类型-旅行者腹泻

感染性腹泻病(infectious diarrhea disease)为一组广泛存在并流行于世界各地的胃肠道传染病,也是当今全球性重要的公共卫生问题之一,其发病率仅次于上呼吸道感染.在我国感染性腹泻的发病率居所有传染病之首位.旅行者腹泻(diarrhea in travelers,DT)为感染性腹泻病中的一种特殊类型,其定义系指在旅行期间或旅行后,每天有3次或3次以上未成形粪,或未成形粪次数不定但伴有发热、腹痛或呕吐.该定义的范围也可进一步扩大,包括更多较轻微的、但足以影响商务日程或旅游计划的肠道紊乱.目前认为DT并非由于气候、食物或水土等因素所致,可由多种微生物引起,多能自限.绝大多数DT具有传染性,其病原体有细菌、病毒、寄生虫、真菌等,偶见原虫和蠕虫感染.据统计DT发生率低(发病率<8%)的地区有关国、加拿大、欧洲、澳大利亚和新西兰等.DT发生率高(发病率20-60%)的国家有亚、非、拉的大多数发展中国家,处于上述两种类型之间的国家有地中海北部、加勒比海地区、日本和其他国家.旅行者腹泻现已成为感染性腹泻病研究中的热点之一.

西安地区急性GBV.C/HGV感染者的分子流行病学及临床特征

目的:为了了解西安地区急性GBV-C/HGV感染者的分子流行病学及临床特征。 方法:连续收集急性病毒性肝炎病例458例,诊断符合上海会议标准。经EHSA检测的67例非甲-戊型肝炎患者经套式PCR方法检测HGVRNA,采用统一《急性病毒性肝炎调查表》,由专人负责进行临床和流行病学调查。所有数据用EPI软件处理。 结果:经ELISA检测的67例非甲-戊型肝炎患者经套式PCR方法检测有17例呈HGVRNA阳性,50为诊断不明患者。通过对17例HGVRNA阳性患者的流行病学分布所进行的分析表明HGV极易感染抵抗力较弱的儿童和老年人,26岁以下占88.23％,与同一人群同年龄乙肝、丙肝和丁肝患者相比,明显增多,经x^2检验有统计学意义(P<0.05)。而当HGV与HCV或HBV同时感染时,致病力增强,可以使各年龄段人群感染。同时我们可以看到HGVRNA阳性患者于冬春季有一明显的发病高峰,尤以冬季为明显。 结论:GBV-C/HGV并不是临床急性肝炎的主要致病因子。HGVRNA阳性患者在暴露因素、流行病学及临床特征等方面具有与其他各型肝炎相同或相似的特点。

丙型肝炎病毒慢性感染与肝癌相关性研究

本世纪初病毒学家们就认识到病毒能引起癌症，1911年Rous发现一种滤过性因子能引起鸡的肿瘤，这就是Rous肉瘤病毒(Rous sarcoma virus，RSV)．该病毒为一种RNA逆转录病毒．大约20a后，Shope发现了另一种与肿瘤有关的DNA病毒-兔疣头瘤病毒．但由于缺乏更多的资料说明其他病毒与各种肿瘤之间的关系，尤其缺乏各种人类癌症与病毒相关的资料，致使Rous放弃了他早先开始的病毒与肿瘤关系的研究．

复制缺陷型HCV C基因腺病毒表达载体的构建包装及鉴定

目的:构建能表达HCVC基因的复制缺陷型腺病毒表达载体.方法:将HCVH株C区基因定向插入到腺病毒穿梭质粒pAd.CMV-Link.1中,获得重组质粒pAd.HCV-C,再与pJM17共转染293细胞,包装腺病毒表达载体.通过酶切、PCR及测序对穿梭质粒进行了鉴定.对腺病毒载体进行了感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定.利用间接免疫荧光法和Westernblot检测了腺病毒载体在人肝癌细胞HepG2中的表达.结果:酶切、PCR及测序鉴定证实,穿梭质粒插入片段为HCVC区基因.包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可以在293细胞中形成病毒颗粒,腺病毒载体内携带HCVC区基因,并可以在HepG2细胞中表达HCVC抗原.结论:包装成功的复制缺陷型腺病毒载体可以在HepG2细胞中表达HCVC抗原,为丙型肝炎的基因治疗及疫苗的进一步研究奠定了基础.

肝靶向十六酸拉咪呋啶酯固体脂质纳米粒抗乙肝病毒的研究

目的:探讨肝靶向十六酸拉咪呋啶酯固体脂质纳米粒抗HBV的作用.方法:以半乳糖苷为载体,构建十六酸拉咪呋啶酯固体脂质纳米粒(PLN-LAGS),将其靶向导入2.2.15细胞,共同温育10d后,观察对细胞的毒性作用;同时将LAP-GSLN尾静脉注入小鼠体内,RP-HPLC测定拉米呋定(lamivudine,LA)在血清、肝、肾、肺及脾中的分布,用ELISA和荧光定量PCR检测多个时期培养上清中HBsAg,HBeAg和HBVDNA.结果:LAP-GSLN在肝脏中具有靶向性,LAP-GSLN组肝脏的含药量为LA组的3.3倍;导向后4d出现对HBV-DNA的抑制,在药物浓度10.0mg/L时LAP-GSLN组HBVDNA<1.11×107拷贝/L,而单纯LA组则为5.06×109拷贝/L;6d出现对HBsAg,HBeAg抑制,在药物浓度0.01mg/L时,LAP-GSLN,LA组对HBsAg,HBeAg抑制率分别为52.9%,53.9%;32.2%,31.1%;在药物浓度10.0mg/L时,LAP-GSLN,LA组对HBsAg,HBeAg抑制率分别为67.2%,69.0%;45.1%,41.0%.未发现对2.2.15细胞的毒性作用.结论:小剂量半乳糖介导十六酸拉米呋定脂质纳米粒能快速有效的抑制HBV抗原表达和DNA复制.

感染性腹泻的微生态疗法

0引言 从微生态学观点来说,胃肠道受到外界因素的影响导致内部的微生态失调将导致腹泻.对于感染性腹泻的防治,目前仍以抗生素治疗为主,但应用抗生素治疗的弊端已愈来愈引起人们的重视,微生态制剂的兴起是治疗感染性腹泻的又一重要手段,它具有调节肠道菌群失调及改善肠道生态环境的作用,对急、慢性腹泻和抗生素引起的肠道菌群失调有良好的预防和治疗作用.微生态防治的本质是以扶植正常菌群,拮抗致病或条件致病菌,调整和恢复微生态平衡为目的的一种预防和治疗方法[1].

丙型肝炎病毒锤头结构核酶的细胞内免疫

目的:探讨预先转染丙型肝炎病毒(HCV)核酶(Rz213)的人肝癌细胞对HCV再转染的抑制作用.方法:应用从前构建的HCV锤头结构Rz(Rz213),通过脂质体介导的基因转染方法,转染人肝癌细胞(HHCC),经G418筛选转染Rz213的基因克隆,应用luc报告基因的表达活性,观察该细胞克隆对靶基因(pCMVNCRluc)转染的抑制作用.结果:G418筛选能使Rz213在转染细胞内有效表达RzRNA,转染Rz的多克隆细胞能有效地阻断靶基因的再转染.结论:我们构建的Rz213真核表达载体能在HHCC细胞内有效表达,预先转染发挥细胞内免疫作用,可防止HCV感染.

丙型肝炎病毒超微结构研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)基因组克隆成功后,人们对其基因组的研究已十分深入,但由于HCV病毒颗粒在感染者血中、肝脏中含量很低,血中HCV又往往与免疫复合物和脂蛋白包裹存在,以及缺乏有效的HCV体外培养体系和小动物模型,形态结构研究难度极大而相对滞后,有关HCV超微结构和病毒装配过程还知之甚少,多数研究认为HCV病毒颗粒由外膜及核心组成,外膜表面有钉状突起.HCV感染后的细胞多数可见扩大的胞质囊腔,病毒颗粒多存在胞质囊腔内,这些胞质囊腔认为来自扩大的细胞内质网.细胞核内、胞质、血清、体外培养细胞中HCV颗粒的大小、形式有差异,目前尚无统一认识,其在感染细胞内的形态结构和定位尚不清楚.本文就近年来有关HCV超微结构研究的相关文献进行回顾.

一种新型传染病：严重急性呼吸综合征

"严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)",又称为"传染性非典型性肺炎(infectious atypical pneumonia)",是由新型变异的冠状病毒感染引起的一种以肺部感染病变为主要特征的新型传染病,是一种新的、传染性强、死亡率高的急性呼吸道传染病.SARS传播速度很快,在全球广泛流行,到目前为止几个月内我国大陆、香港、台湾、北美、欧洲等33国家或地区均有发现.截止至2003-06-06,全球SARS临床诊断病例已达8 404例,累计死亡779例;在我国内地流行形势一度十分严峻,目前已经得到有效的控制.经包括我国科技人员在内的世界各国科学家的联合快速攻关,于2003-04-16 WHO正式宣布冠状病毒的变异株(SARS-CoV)是传染性非典型肺炎病原体.我们认为临床确诊SARS患者必须重视流行病学接触史、持续出现的发热、头痛等流感样症状及动态观察患者的胸片均是十分必要的.SARS目前尚无特异性治疗和预防方法,主要应用糖皮质激素、抗病毒、抗感染、机械通气、严密隔离等,新的药物和方法尚在研究中.SARS流行已严重干扰和影响了我国乃至国际社会的经济和社会发展,因此控制其流行、研究SARS科学、规范、可靠而有效的治疗方案刻不容缓.目前的研究尚存在许多待解决的问题,随着基础研究的进展,针对SARS的技术和药物终将出现,最终征服这一人类从未面临的疾病.

丙型肝炎病毒C和E1区的DNA改组

目的:利用DNA改组技术进行不同亚型的HCVC和E1区的人工进化。方法:首先利用PCR扩增两段具有较高序列同源性的1kb左右的基因片段,两者相比较同源性大于83%。然后将其等量混合,在Mg2+存在的条件下,用DNaseⅠ切割成50bp左右的小片段。这些小片段在不外加引物的条件下,利用PCR反应进行重聚,再将重聚物经过一轮正常的PCR扩增。结果:获得了与原来片段大小相当的基因片段。结论:这一技术为进一步筛选高活性的HCVC和E1区打下基础,有利于从一组序列同源性程度较高的基因库构建随机嵌合基因,并为改组其他基因家族提供了借鉴。

慢性丙型病毒性肝炎的诊断与治疗

自从发现丙型肝炎病毒(HCV)为非甲非乙型肝炎的病因之一以来,已过15个春秋,丙型病毒性肝炎对人民生命健康的危害仍在继续,然而其本质也在逐渐被人们所认识当今HCV的基础和临床各方面研究已经有了很大进展.但是在诊断、治疗、疫苗研制等方面还不尽如人意,彻底控制丙型肝炎的危害还有很远的路程要走.可以说,在丙型肝炎临床与科研过程中充满了艰辛,任重而道远.因此临床医生对丙型肝炎密切相关的诊疗预防等进展需求显得十分迫切.为了提高临床医生认识,改善国内对丙型肝炎的诊断治疗相对落后的现状,了解目前国内外最主要的研究动态.借今年美国肝病研究协会制定《丙型肝炎的诊断、治疗处理策略-临床实践指南(AASILD Practice Guideline)》及中华医学会肝病学分会、中华医学会传染病与寄生虫病学分会制定《丙型肝炎防治指南》的机会,我们组织一批国内研究丙型肝炎的资深专家和教授撰写了“焦点论坛-慢性丙型肝炎的诊断与治疗”,这次“焦点论坛”主要面向临床医生,故在组稿写作过程中注意“紧扣文题,开门见山,突出重点,临床实用性为主,兼顾相关研究进展”,以进一步推动丙型肝炎的临床实用性研究.希望能在控制丙型肝炎的工作中履行义务,贡献一份薄力.

腺病毒载体的特点及其在HCV研究中的应用

由于腺病毒(adenovirus,Ad)载体在哺乳动物及其多种细胞上进行基因转移和蛋白表达的高效性,使其在基因疫苗及基因治疗的研究中受到人们的青眯,成为当前使用最多的病毒载体之一。为了克服其存在的不足并取得更满意的效果,人们在腺病毒载体的构建和改进方面做了大量的工作,本文谨就腺病毒分子生物学特点、腺病毒载体的优缺点、近年来腺病毒载体构建原理与方法的改进及其在HCV研究中的应用进展作—扼要综述。

出血性大肠杆菌O157:H7感染

0引言 大肠杆菌是寄居肠道的优势菌丛之一,大多数对人体无害,但是人们很早就发现如果大肠杆菌远离肠道,侵入其他组织和血液,就可引起化脓性炎症或败血症.相比而言,其肠道致病性的认识较晚,直到20世纪40年代发现某些血清型大肠杆菌是爆发婴儿腹泻的病因后,各方面的研究才取得了较大的进展.1977年Kanowalchuk et al首次提出,某些大肠杆菌能引起人类出血性腹泻.1982年美国俄勒冈和密执安州分别发生了一起出血性肠炎的爆发流行,并从一名患者粪便中分离出大肠杆菌O157:H7.1985年Kamali认为溶血性尿毒综合征(hemolyticuremia syndrome,HUS)的发生与该菌株有关1983年Riley et al指出:出血性肠炎系由此种新发现的致病性大肠杆菌O157:H7引起,并将该菌命名为肠道出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic E.coli,EHEC)[1].Kanowalchuk et al发现EHEC可产生一种能引起Vero细胞毒效应的物质,故又称之谓Vero毒素型大肠杆菌(verotoxin,E coli,VTEC).近年来由EHECO157:H7引起的感染性腹泻有明显上升趋势[2].

抗乙型肝炎病毒肝靶向药物制剂的研究进展

乙型肝炎病毒感染严重危害人类健康,全身抗病毒和调节免疫功能的治疗效果尚不理想,近年来国内外开展肝靶向药物的研究,即用某中具有特殊亲和力的载体把抗乙肝病毒药物运送到肝靶器官,达到了小剂量、高效应,低毒副性反应的目的,靶向抗乙肝病毒药物可能成为肝炎治疗中确实有效的方法之一。

抗乙型肝炎病毒核酶的研究进展

全世界大约有3.5亿乙型肝炎病毒(HBV)携带者,这种感染者集中分布于包括我国在内的东南亚、东亚及非洲的撒哈拉地区.HBV的持续存在常可导致肝硬化以及肝癌,对于已感染HBV者,目前常用的化学及免疫疗法通常无效.因此,寻找新的抗HBV感染的手段成为热点.核酶做为一种成熟的、可剪切特异性RNA的分子生物学方法受到广泛重视.由于核酶有严格的序列特异性,长期使用对细胞无副作用,并且结构简单,可人工设计,因此,很有希望成为治疗HBV感染的新方法.目前,核酶已广泛用于抗病毒及抗肿瘤的研究,尤其对HIV的研究,已进入临床工作阶段.本文将从核酶的构成、核酶研究的热点以及抗HBV感染等方面进行阐述.

隐匿性HBV感染是一个潜在的威胁

HAV-HEV5种嗜肝病毒发现和采取严格的预防措施后仍有不明原因的肝炎发生和流行,10a来进行了大量寻找新肝炎病毒的工作,但对其致病性至今仍为定论.于是近年又有不少学者深入研究了HBV的血清学谱,发现一部分未明原因肝炎实际由HBV引起.本文就HBsAg阴性HB存在的证据,机制以及如何定义和诊断综述如下.

病毒性肝炎基因治疗的研究和面临的挑战

病毒性肝炎是目前严重危害人类健康的最常见的世界性感染性疾病之一,迄今仍无有效的抗病毒药物,抗病毒基因疗法作为一种新的治疗手段,可望从病因上解决病毒性肝炎的治疗问题,本文结合我们自己的研究综述抗肝炎病毒基因疗法的研究现状和面临的挑战,重点介绍抗肝炎病毒核酶和DNA免疫的研究。