透射电镜及激光共聚焦技术观察体外丙型肝炎病毒感染的人胎盘滋养层细胞

目的:探讨体外分离培养的人体胎盘滋养层细胞感染丙型肝炎病毒(HCV)的可能性,以及滋养层细胞感染HCV后的超微结构改变.方法:采用胰蛋白酶消化法及Percoll密度梯度分离法分离培养人胎盘组织中滋养层细胞后,以HCVRNA阳性血清对滋养层细胞进行体外感染试验,应用RT-PCR法定性及定量检测感染后细胞培养上清中HCVRNA,透射电镜观察HCV感染后滋养层细胞的超微结构改变,并用激光共聚焦技术观察免疫荧光染色后HCVNS5在滋养层细胞中的定位.结果:HCV感染后的细胞培养上清中可间断检测到HCVRNA,而对照组始终未检出;激光共聚焦观察显示HCVNS5主要定位于细胞核周;HCV感染后滋养层细胞超微结构发生了明显改变,主要表现为溶酶体大量增生,粗面内质网增生,脂滴减少,出现空泡状结构,并可观察到病毒样颗粒.结论:HCV可以感染滋养层细胞,并导致滋养层细胞的超微结构发生类似黄病毒科病毒感染后的改变.

拉米夫定联合双甲五灵胶囊的抗肝纤维化作用

目的研究拉米夫定与双甲五灵胶囊联合治疗对慢性乙型肝炎患者血清肝纤维化指标及肝脏病理组织学的影响。方法随机选择50例慢性乙型肝炎患者作为治疗组,给予口服中药双甲五灵胶囊,3次/d,6粒/次,并同时口服拉米夫定01g/d,疗程1年;同时设对照组,给予保肝对症治疗。动态观察服药0、6、12个月患者血清中肝纤维化指标透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ型胶原(ⅣC)的变化;对其中8例患者治疗前后肝穿刺活检,用Masson三色组织化学染色后观察肝组织纤维化程度的改变。结果与对照组相比,治疗组患者4项血清肝纤维化指标明显下降(P<001)。肝细胞坏死、汇管区炎细胞浸润及纤维化明显减轻。结论拉米夫定联合双甲五灵胶囊治疗慢性乙型肝炎,可使患者血清HA、LN、PCⅢ、ⅣC含量显著下降,并减轻肝组织的炎症坏死和纤维化程度。

多发性胃肠间质瘤的克隆性及其临床病理

目的:探讨多发性胃肠间质瘤的克隆性及其不同瘤体之间的关系.方法:15个大小不同的瘤体均经中性甲醛固定,石蜡包埋,HE染色和免疫组织化学染色观察确诊后,应用显微切割技术分离病变及病变周围纤维结缔组织,提取基因组DNA,经甲基化敏感的HpaⅡ或HhaⅠ消化,巢式聚合酶链式反应(PCR)扩增磷酸甘油酸激酶(PGK)和雄激素受体(AR)基因.通过BstⅪ消化和琼脂糖电泳显示PGK基因单核苷酸多态性;应用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示AR基因CAG重复序列长度多态性.结果:光镜下瘤细胞主要为梭形,呈束状、编织状或旋涡状排列;胞质丰富,嗜酸性;细胞核杆状或长梭形.免疫组化标记瘤细胞表达CD117和CD34强阳性.克隆性分析结果显示,所有分析的组织在PGK和AR位点的凝胶电泳图上均表现为两条带,具有多态性.其中15个肿瘤组织酶切后下带均消失,只保留上带,显示出X染色体失活嵌合性丢失,证明为肿瘤性病变.而周围纤维结缔组织在酶切前后两条带密度无明显改变.结论:胃肠间质瘤属于单克隆性,多发性胃肠间质瘤起源相同,即起源于同一个细胞.

骶骨胃肠间质瘤的临床病理学特点、克隆性及c-kit基因突变分析

目的:探讨发生于骶骨的胃肠间质瘤(gastrointe stinalstromal tumor,GIST)的临床病理学特点、c-kit基因突变情况及克隆性.方法:手术切除标本经常规HE染色和免疫组化染色观察确诊后,应用显微切割技术分离病变及病变周围纤维结缔组织,提取基因组DNA,再进行c-kit基因外显子9、11、13和17的PCR扩增和测序.同时利用女性X染色体失活的嵌合性和磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase,PGK)和雄激素受体(androgen receptor,AR)基因位点的多态性进行克隆性检测.结果:光镜下瘤细胞主要为梭形,呈束状、编织状或旋涡状排列;胞质丰富,嗜酸性或中性;细胞核杆状或长梭形,核分裂像罕见.免疫组化标记瘤细胞表达CD117和CD34强阳性.PCR产物直接测序检测揭示c-kit基因外显子11有突变发生,而外显子9、13和17均无突变.克隆性检测结果示GIST为单克隆性病变.结论:GIST是肿瘤性病变;发生于骶骨的GIST的诊断需要通过免疫组化来确诊,并行c-kit基因扩增的检测以及测序进一步证实.

新生儿trRNA独立阳性的HBV感染状态

目的:探讨新生儿trRNA独立阳性的HBV感染状态的稳定性及影响因素.方法:跟踪随访85例HBsAg阳性孕妇及所生新生儿,孕妇在接受HBIG治疗前和分娩前各采血1次,新生儿在出生后24h内、1、3、6、9、12、18、24mo各采血1次,检测trRNA、fRNA、乙型肝炎五项和HBVDNA定量,按新生儿trRNA分组比较新生儿HBV活动性感染的发生率,按母亲HBIG治疗、HBeAg、HBV-DNA定量分别分组比较母婴trRNA、fRNA的检出率.结果:随访的新生儿无HBV活动性感染发生,新生儿fRNA均阴性.分别以母婴是否行HBIG治疗分组,比较新生儿trRNA检出率,差别均无统计学意义;以母亲HBeAg分组,分别比较母婴trRNA检出率,差别无统计学意义,而母亲fRNA检出率差别有统计学意义(χ2=8.119,P=0.004);以孕妇产前HBVDNA定量分组,同样分别比较母婴trRNA检出率,差别无统计学意义,而母亲fRNA的检出率差别有统计学意义(χ2=21.948,P=0.000).结论:在随访的近2年时间内,新生儿trRNA独立阳性的HBV感染状态是稳定的,trRNA的检出不受母婴是否行HBIG治疗、HbeAg及HBV-DNA定量的影响.

硝苯地平对妊高征孕妇眼动脉血流的影响

目的 观察硝苯地平对妊高征患者眼动脉血流的影响。方法 应用彩色多普勒超声 ,检测 12例妊高征患者舌下含服硝苯地平前后眼动脉血流变化 ,测定其收缩期第一峰血流速度 (A)、收缩期第二峰值血流速度 (B)、舒张期最低血流速度 (Vmin)及平均血流速度 (Vm) ,记算B/A值。并与同期 12例静脉滴注硫酸镁治疗的妊高征患者进行比较。结果 舌下含服硝苯地平后 ,眼动脉B/A值显著降低 ,由 0 .78± 0 .16降至 0 .5 6± 0 .2 4;同时平均动脉压 (MAP)由 (16.19± 1.2 5 )kPa降至 (13 .92± 1.16)kPa。结论 硝苯地平可扩张眼动脉 。

HOXA9基因抑制肝癌细胞HepG2迁移与侵袭能力的实验研究

目的:探讨同源盒基因HOXA9对肝细胞肝癌细胞株HepG2迁移与侵袭能力的影响。方法:采用Endo FectinTM-Max转染试剂将HOXA9基因真核表达载体及其空载体转染至HepG2细胞,并应用脂质体法转染HOXA9 siRNA序列及阴性对照序列,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)及Western blot方法检测转染后HOXA9的mRNA和蛋白表达水平。以划痕实验和Transwell方法检测转染后细胞的迁移和侵袭能力。结果:在肝癌细胞HepG2中瞬时转染HOXA9真核表达载体后,其mRNA和蛋白表达明显增加,划痕实验检测发现48h细胞愈合率明显抑制,Transwell实验发现迁移和侵袭至下室的细胞数目明显减少;而转染HOXA9siRNA序列后,HepG2细胞中HOXA9 mRNA及蛋白表达明显下调,划痕实验显示48h划痕愈合率增加,Transwell实验显示迁移和侵袭至下室的细胞数目明显增多。结论:HOXA9基因对肝癌细胞HepG2的迁移和侵袭能力有明显抑制作用,为进一步研究HOXA9在肝细胞肝癌发生和进展中的作用奠定了基础。

人类白细胞抗原G及其异构体mRNA在人类着床前胚胎的表达

目的研究人类白细胞抗原G（human leukocyte antigen，HLA-G）及其异构体mRNA在人类着床前胚胎的表达，探讨HLA-G在人类胚胎早期发育中的作用和意义。方法第四军医大学唐都医院妇产科生殖医学中心2003-01-2005-12期间，以体外受精-胚胎移植技术助孕过程中剩余的患者自愿捐赠的人类早期胚胎作为研究对象，采用巢式RT-PCR检测早期胚胎HLA-G及其异构体mRNA的表达。结果检测20个受精后2—3d的人类卵裂期胚胎，2、4、6、8细胞期胚胎各5个，有7个胚胎表达HLA-G及其部分的异构体mRNA。检测5个受精后4d的人类桑葚胚，全部表达HLA-G及其部分的异构体mRNA。检测25个受精后6d的扩张期囊胚，全部受检囊胚均表达HLA-G mRNA，但异构体表达不同。在受检的25个扩张期囊胚中，20个表达HLA-G1（表达率80．0％），4个表达G2（表达率16．0％），25个表达G3（表达率100％）、24个表达G4（表达率96．0％），5个表达G5（表达率20．0％），8个表达G6（表达率32．0％）。结论着床前的人类胚胎表达HLA-G及其异构体mRNA，其阳性表达胚胎的比例，随着胚胎发育的进程而增加。HLA-G异构体在人类着床前胚胎差异表达。