急性肝衰竭大鼠肝细胞移植的实验研究

目的:探讨大鼠同种异体肝细胞经腹腔、脾脏、门静脉移植对药物性急性肝衰竭大鼠的治疗作用. 方法:D-氨基半乳糖诱导大鼠急性肝衰竭后60 h,分6组进行治疗实验.Ⅰ组:腹腔内移植2×1010/L肝细胞悬液1 mL;Ⅱ组:腹腔内注射生理盐水1 mL;Ⅲ组:经门静脉注射2×1010/L肝细胞悬液1 mL;Ⅳ组:经门静脉注射生理盐水1 mL:Ⅴ组:向脾脏内移植2×1010/L肝细胞悬液1 mL; Ⅵ组:脾内注射生理盐水1 mL.移植同时各组大鼠肌肉注射环孢霉素A(CsA)10 mg/kg,观察大鼠的存活率、肝脏功能和肝脏病理变化情况. 结果:Ⅰ组大鼠存活率比Ⅱ组有明显提高(60%对20%, P<0.01),肝脏功能及肝脏病理明显改善.Ⅲ组大鼠存活率与Ⅳ组无显著差异(20%对13.3%,P>0.05),肝脏功能及肝脏病理未见改善.Ⅴ组与Ⅵ组比较存活率有提高(47% 对20%,P<0.05). 结论:经腹腔及脾脏移植同种异体肝细胞可明显改善D-gal 诱导的肝衰竭大鼠的存活率,部分改善肝功能及肝脏病理;经门静脉移植同种异体肝细胞不能改善D-gal诱导的肝衰竭大鼠的存活率、肝脏功能及肝脏病理.

乙型肝炎病毒S基因经显微注射导入SMMC-7721细胞核内的表达

目的探讨细胞核显微注射导入外源基因的方法,观察HBV-S基因导入人肝癌细胞株SMMC-7721后的表达及其稳定性。方法将含有HBV-S片段的质粒pCR3.1-S线性化,通过显微注射仪直接注入培养的SMMC-7721细胞核内,G418筛选后,经EIA和免疫荧光法分别检测细胞培养上清和细胞内HBsAg的表达。结果每注射100～150个细胞可筛选出一个阳性克隆,3个阳性克隆经扩大培养后,其中1个克隆的培养上清经EIA法检测HBsAg阳性,免疫荧光显示细胞膜及细胞质均有HBsAg表达,并持续6mo以上。结论 HBV-S基因经显微注射导入SMMC-7721细胞后获得持续稳定的表达。

2080例药物中毒门诊病例分析

本文对 2 0 80例门诊药物中毒病例进行流行病学分析 ,了解就诊病例药物中毒性别、年龄、文化程度、职业分布、季节性的构成比 。

肝干细胞研究现状

肝干细胞具有双分化潜能,可向肝细胞和胆管上皮细胞分化发育;胚胎期肝干细胞来源于肝始基,成年期肝干细胞可能来源于Hering管细胞和骨髓造血干细胞;细胞间作用和细胞基质间作用对于肝干细胞的分化成熟起重要作用;肝干细胞在肝脏疾病的基础研究和临床治疗方面具有广阔的应用前景。

免疫缺陷小鼠肿瘤模型的建立及其肿瘤相关免疫机制的探讨

目的:观察不同免疫缺陷小鼠中的人肝癌细胞生长情况以及T,B淋巴细胞的免疫作用,探讨免疫缺陷小鼠肿瘤模型制作的意义。 方法:将体外培养的人肝癌细胞接种到四种免疫缺陷小鼠,分别为:B细胞缺陷的CBA/N,T细胞缺陷的Balb/c-nu,T,B细胞缺陷的SCID及免疫重建的SCID小鼠,观察其生长特点;作鼠脾细胞毒试验,测定外周血CD4^+,CD8^+数分数和荷瘤鼠血清Ig含量的变化;作肝癌细胞凝集试验。 结果:CBA/N和用BALB/c鼠外周血淋巴细胞重建的SCID(B-PBL-SCID)鼠不成瘤,nude、SCID和用CBA/N鼠外周血淋巴细重建的SCID(C-PBL-SCID)小鼠全部成瘤;SCID鼠的瘤体比裸鼠瘤体长的更快,肝内接种转移率更高、转移范围更大。接种瘤细胞的BALB/c和CBA/N鼠脾细胞对癌细胞杀伤力较强,免疫重建的SCID鼠脾细胞毒杀伤较小。接种瘤细胞的鼠CD4^+数分数都下降,CD8^+变化不大,CD4^+/CD8^+比值下降。具有B细胞的实验鼠均测得Ig在mg·L^(-1)水平,并能使癌细胞产生凝集反应。 结论:SCID鼠是建立肿瘤模型和免疫重建研究的理想小鼠;小鼠成瘤率与T细胞相关,T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用;B淋巴细胞及其产生的抗体在抗肿瘤中起着不可忽视的作用。

抗恶性黑素瘤单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体的构建及评评价

目的构建抗MM单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体,并验证其表达效率及功能。方法通过PCR方法将鱼精蛋白截短片段序列与抗黑色素瘤细胞表面抗原单链抗体基因相连接;采用TaKaRap MD19-T载体试剂盒将PCR后获得的融合蛋白扩增产物进行T载体构建;构建GST融合蛋白表达载体以实现在大肠杆菌中该融合蛋白的可溶性表达,经两步亲和纯化后获得scFv-tP蛋白;采用凝胶阻滞电泳迁移率变动分析EMSA技术检测Anti-MM scFv-tP与siRNA的结合活性;荧光分子标记scFv-tP蛋白后分别采用流式细胞术检测和共聚焦显微镜观察其与Li Br细胞株进行细胞表面抗原结合活性验证;采用不同浓度FITC标记的siRNA与scFv-tP进行混合,分别与LiBr细胞(A)及DU145细胞(B)进行混合孵育,观察肿瘤细胞对携载siRNA的单链抗体的内化活性。结果成功构建抗恶性黑素瘤单链抗体-鱼精蛋白片段融合蛋白(Anti-MM scFv-tP)表达载体;实现在大肠杆菌中该融合蛋白的可溶性表达,可获得较纯的scFv-tP蛋白;Anti-MM scFv-tP蛋白与siRNA有明显的结合与携载能力,可以有效与LiBr细胞表面特异性抗原进行结合,且有较强的内化活性。结论本研究构建的抗MM单链抗体-鱼精蛋白融合蛋白表达载体可稳定表达,Anti-MM scFv-tP蛋白具有siRNA结合携载能力,可靶向识别结合进入LiBr细胞,为后续进一步研究该单链抗体融合蛋白靶向载体携载siRNA在体内外抑制恶性黑色素瘤恶性进展奠定坚实的基础。

狂犬病病毒3aG株糖蛋白重组质粒构建及其体液免疫的研究

将狂犬病病毒 3aG株糖蛋白克隆至真核表达载体pCI neo中 ,构建了重组表达载体 pCI neorabG ,以此免疫昆明种小鼠 ,3周后 ,取血进行ELISA检测。结果 ,试验组的 10只小鼠中有 9只抗狂犬病病毒抗体为阳性 ,而对照组的 10只小鼠全部为阴性。试验初步表明 ,pCI