小鼠神经干细胞的生物学特性观察

目的探讨小鼠神经干细胞体外原代培养的生长特性。方法用无血清与单细胞克隆技术对小鼠胚胎脑组织进行分离、培养,用光镜、免疫组织化学进行鉴定,并对其不同生长时期的生物学特性进行透射电镜观察。结果鼠胚胎分离细胞具有连续分化及克隆能力,克隆球和早期的原始细胞神经上皮干细胞蛋白(nestin)抗原呈阳性。成熟分化后胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及神经丝-200(NF-200)抗原呈阳性。不同期电镜结果:培养2周的神经干细胞较原始,核大,细胞质少,细胞器不发达。将其继续培养到4周,部分细胞内可见到发达的细胞器,并在分化细胞中观察到神经微管、微丝、胶样丝和细胞间连接样结构。结论胚胎脑组织在体外培养并克隆成神经球,具有很强的增殖能力,是多分化潜能干细胞。

SD大鼠重型创伤性颅脑损伤后皮质Shank1a蛋白的改变及意义

目的探讨Sprague-Dawley(SD)大鼠重型颅脑损伤后皮质组织中Shank1a蛋白的表达改变及其意义。方法48只成年雄性SD大鼠,按随机数字表法,分为正常对照组、颅脑损伤后1h、6h、24h、48h及72h共6组,每组8只。采用免疫组化染色法和Western blot法行蛋白测定,RT-PCR法行mRNA测定。观察各颅脑损伤组及对照组大鼠Shank1a蛋白及mRNA梯度灰度值,并进行免疫组化评分。结果与对照组比较,严重颅脑损伤后,Shank1a蛋白和mRNA的表达量增加,从伤后1h持续到伤后72h(P<0.05),伤后24h表达量最高(P<0.01)。结论在严重颅脑损伤后,Shank1a出现1个表达高峰,在不同机制的影响下可能对脑损伤发生、发展起重要作用。

脑胶质细胞瘤体内侵袭性的实验研究

目的 探讨胶质瘤的体内侵袭和转移特性。方法 利用体外转染有绿色荧光蛋白(GFP)基因的大鼠C6脑胶质瘤细胞移植模型 ,将携有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)基因的pEGFP N3质粒体外转染C6细胞 ,筛选能稳定表达GFP的瘤细胞克隆 ,并做流式细胞仪和电镜检测。将阳性转染和未转染瘤细胞以立体定向法植入SD大鼠脑实质内 ,建立大鼠移植瘤模型。 4周后处死大鼠并作脑连续石蜡切片 ,相邻切片分别行苏木素 伊红 (HE)及免疫组织化学染色和荧光显微镜 (激发光波长为 488nm)检测。对移植瘤细胞行原代培养 ,以检测荧光基因在体内的保存情况。结果 阳性转染的C6瘤细胞的EGFP在大鼠脑内获得稳定表达 ,在荧光显微镜下较易于区分肿瘤与非肿瘤区 ,并能发现侵袭至远处的单个瘤细胞 ,其敏感性及特异性明显优于HE染色或免疫组化方法。结论 GFP基因体外转染C6胶质瘤细胞并行大鼠脑内移植 ,是一种较好的研究脑胶质瘤侵袭性的体内实验模型。

硼中子俘获法诱导C6胶质瘤细胞凋亡

目的观察硼中子俘获法(BNCT)对体外培养C6细胞的作用并探讨其原理。方法实验分为未照射组(0 Gy)、γ射线组(48、Gy)、反应堆组(3 Gy)、BNCT组(48、Gy)。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定照射后144 h内各组细胞生长曲线。光镜、荧光显微镜、电镜观察BNCT后细胞形态学改变,流式细胞术检测细胞凋亡率,成克隆分析法测定细胞存活分数。结果BNCT组细胞早期即出现凋亡的典型形态学改变。BNCT 48、Gy组细胞生长抑制作用显著强于等剂量的γ射线照射组(P<0.01)。BNCT 48、Gy组处理后48 h凋亡率分别为63.2%、88.3%,显著高于各组(P<0.01)。BNCT 48、Gy组存活分数均<0.0001,显著低于各组(P<0.01)。结论与γ射线照射相比较,BNCT对C6胶质瘤具有较高的相对生物学效应,其作用是通过诱导C6细胞凋亡而实现的。