二氧化锰纳米片介导的旋毛虫病检测方法的建立

以半胱氨酸蛋白酶抑制剂样蛋白(Cystatin-like protein,CLP)为研究对象,以实验室前期制备的重组蛋白rCLP为检测抗原进行包被,抗CLP单克隆抗体(McAb)1H9作为竞争抗体,利用二氧化锰纳米片独特的光学特性,建立一种准确、快速、高效的旋毛虫病比色免疫测定方法。采用旋毛虫人工感染猪血清、其他寄生虫感染猪血清及常规病毒疫苗免疫猪血清对该方法的特异性、敏感性进行验证。结果显示,该方法检测刚地弓形虫、微小隐孢子虫、猪囊尾蚴、猪蛔虫、猪鞭虫感染猪的血清和常规病毒疫苗(猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒和口蹄疫病毒疫苗)免疫猪血清均为阴性,无交叉反应。对高(10000条/头)、中(1000条/头)、低(100条/头)3组感染剂量感染后不同时间的人工感染猪血清进行检测,该方法在高剂量组中检测的血清抗体阳性转化时间与商品化试剂盒的检测结果一致,在中、低剂量组中血清抗体阳性转化时间晚于商品化试剂盒。同时,该方法在低剂量组中检测的旋毛虫感染阳性检出率高于人工消化法的检测结果,说明该方法敏感性较高。对所建立的方法进行加标回收验证,回收率为98.8%~102.7%,表明该方法稳定性高。以上结果表明,本研究建立的二氧化锰纳米片介导的旋毛虫病检测方法特异性好、敏感性高、操作简单、无须大型仪器即可出结果,可用于旋毛虫病的快速筛检。