shRNA靶向沉默CNTN1表达对人乳腺癌细胞株MDA-MB-468凋亡及迁移侵袭的影响

目的 探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默接触蛋白-1(CNTN1)基因表达对人乳腺癌MDA-MB-468细胞凋亡及迁移侵袭能力的影响及其机制。方法 将人乳腺癌MDA-MB-468细胞株分为3组:常规更换培养基的为空白组,转染无义shRNA片段的为空载体组,转染靶向沉默CNTN1表达的shRNA载体片段的为沉默组。采用western blot法检测CNTN1蛋白的表达水平。通过流式细胞技术、细胞划痕以及Transwell实验分别检测凋亡率和迁移、侵袭能力的改变,采用western blot法检测细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)和上皮细胞间质化相关基因蛋白[锌指E盒结合蛋白1 (ZEB-1)、波形蛋白(Vimentin)、扭曲蛋白(Twist)、锌指转录因子(Snail)]的表达情况。结果 与空白组和空载体组比较,沉默组MDA-MB-468细胞中CNTN1蛋白表达水平明显降低(P<0.05),凋亡率增加(P<0.05),迁移和侵袭能力均明显减弱(P<0.05),ZEB-1、Vimentin、Twist和Snail的表达水平明显被抑制,而E-cadherin表达水平明显升高。结论 沉默CNTN1表达可通过调节上皮细胞间质转化促进乳腺癌细胞株MDA-MB-468凋亡增加,迁移和侵袭能力减弱。

CNTN1基因在乳腺癌中的表达及其与预后关系的研究

目的检测接触蛋白-1(contactin-1,CNTN1)基因在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌患者临床病理因素和预后的关系。方法回顾性收集陕西省肿瘤医院2015年1月至2015年6月期间符合纳入标准的35例乳腺癌患者的临床病理资料,采用免疫组织化学SP法和Western blot法检测乳腺癌组织及其相应的癌旁组织中CNTN1蛋白的表达情况,同时应用RT-PCR法检测CNTN1 mRNA在相应组织中的表达情况。分析乳腺癌组织中CNTN1蛋白表达与乳腺癌患者5年总生存情况的关系。结果乳腺癌组织中CNTN1蛋白表达阳性率和表达水平均高于其相应的癌旁组织[65.7%(23/35)比45.7%(16/35),χ^(2)=8.235,P=0.003;0.825±0.221比0.412±0.117,t=12.556,P<0.001],同时乳腺癌组织中CNTN1 mRNA表达水平亦高于其相应的癌旁组织(0.763±0.218比0.353±0.135,t=11.162,P<0.001)。CNTN1蛋白表达阳性率在肿瘤直径较大(>2 cm)、低分化、TNM分期较晚(Ⅲ+Ⅳ期)以及有腋窝淋巴结转移乳腺癌患者中更高(P<0.05)。35例乳腺癌患者的中位总生存期为47.3个月,其中CNTN1高表达(大于组织中CNTN1蛋白表达中位数0.785)患者的中位总生存期为36.2个月,低表达患者为52.5个月,CNTN1高表达患者的生存情况差于低表达患者(χ^(2)=4.052,P=0.049)。结论从本研究初步研究结果提示,CNTN1基因过表达可能在原发性乳腺癌的发生及进展中起重要作用且与生存预后有一定的关系。