H5亚型禽流感灭活疫苗病毒基因的定量检测及其与HI抗体效价之间关系的分析

目的建立H5亚型禽流感病毒灭活疫苗中病毒核酸的特异、敏感、快速的定量检测方法,分析其与HI抗体效价之间的相关性。探索禽流感灭活疫苗效力体外检验的方法。方法选取H5亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)血凝素(hemagglutinin,HA)基因保守序列,使用Primer Express 2.0软件设计了特异性引物和TaqMan MGB(minor groove binder)探针,利用实时荧光PCR技术来定量检测禽流感灭活疫苗,通过体外转录,制备含有选定检测序列的RNA标准品,绘制标准曲线。对50批H5亚型禽流感灭活疫苗进行了荧光定量PCR检测,测定了疫苗的HA基因拷贝数,同时测定了50批疫苗相应的HI抗体效价。进行了疫苗的HA基因拷贝数与HI抗体效价之间相关性的分析。结果该方法的灵敏度为10拷贝/反应,标准曲线的相关系数为0.998003,对H9亚型禽流感灭活疫苗和其他禽病疫苗无交叉反应,特异性好、重复性佳。疫苗的HA基因拷贝数与HI抗体效价不相关。结论荧光定量PCR方法为H5亚型禽流感病毒灭活疫苗检测提供了一种特异、敏感、快速的定量检测方法。