人骨髓间质干细胞体外扩增和向内皮细胞定向诱导分化的研究

目的:体外分离、扩增成人骨髓间质干细胞(MSCs)和向内皮细胞(ECs)定向诱导分化,开辟心血管组织工程种子细胞的新来源。方法:采用Percoll(1073g/L)从正常成人骨髓中分离出MSCs,纯化和扩增后流式细胞仪鉴定其纯度;用血管内皮生长因子(VEGF)诱导MSCs向ECs分化,Ⅷ因子(vWF)免疫组化和透射电镜(TEM)鉴定细胞性质。结果:5·0×105个MSCs在体外扩增15代后,获得8·0×1012个MSCs,扩增了约1·6×107倍;MSCs在加入VEGF诱导培养大约14-21d,80%-90%的诱导细胞对Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应;TEM可观察到胞浆内有Weible-palade小体,证实为ECs。结论:成人骨髓MSCs在体外具有定向诱导分化为ECs的潜能,这为心脏组织工程瓣体外构建,尤其是在小儿先天性心脏病组织工程研究中种子细胞的来源提供了可能性。

同种生物心脏组织工程瓣体外构建的初步研究

目的 在生物瓣支架上种植并静态培养自体内皮细胞 (ECs) ,形成完整的内皮细胞单层 ,为下一步脉动流培养并最终体外构建同种生物组织工程瓣 (TEHV)提供材料基础。方法 生物瓣支架选择经液氮保存的成人主动脉带瓣管道 ,用 0 1 %SDS脱去表面的ECs ;成人骨髓间充质干细胞 (MSCs)体外定向诱导分化的ECs作为种子细胞 ,高密度 (>1 0 5cell/cm2 )种植于瓣膜支架上静态培养 2 0d ,扫描电镜观察、摄片 ,以确定再内皮化程度。结果 同种生物瓣支架表面的ECs完全脱去 ,而细胞外基质成分保存良好 ;MSCs体外诱导分化的ECs与生物瓣支架复合体静态培养第 7、1 4和 2 0d ,再内皮化程度分别为 73%、85 %和 92 %。结论 静态培养条件下构建的TEHV基本上实现了体外再内皮化的预期目标。