小金海棠中抗缺铁相关基因的杂交分析

以高效抗缺铁胁迫基因型苹果种小金海棠 (MalusxiaojinensisChengetJiang)为试材 ,以异源的玉米Fe(II) 转运蛋白基因 (irt)和小麦Nramp基因为探针进行了杂交分析。Southern杂交结果表明 ,小金海棠基因组中该两家族基因均存在。Northern杂交结果表明 ,在根中 ,irt的转录受缺铁胁迫诱导 ,并随缺铁胁迫处理天数的增加而加强 ;在根和叶中 。

小金海棠抗缺铁相关基因——Nramp基因片段的克隆

以高效抗缺铁苹果种小金海棠 (MalusxiaojinensisChengetJiang)为试材 ,以异源的小麦Nramp基因为探针进行杂交分析。Southern杂交结果表明 :小金海棠基因组中存在该家族基因。Northern杂交结果表明 :在根和叶中 ,Nramp基因在正常供铁和缺铁胁迫下均能得以转录 ,且叶中的转录受缺铁胁迫的诱导而加强。通过PCR方法已从基因组DNA中扩增出了 75 2bp的特异性产物 ,该片段与水稻的Os Nramp3具有

与植物铁素营养相关的蛋白和基因

介绍铁胁迫下植物铁素吸收的机制Ⅰ、机制Ⅱ系统中铁素吸收、转运的主要相关蛋白及基因 (如Fro2、Irt1、Naat、Nas、Fdh、Adh) ,可能存在的新机制Ⅲ系统中的Nramp基因 ,铁素储存蛋白 (ferritin)及其基因等的研究进展。

常规PCR与RACE结合法快速从cDNA文库中克隆基因

首先根据Fe(Ⅱ ) 转运蛋白基因家族的保守区设计同源的常规PCR引物 (F1,R1) ,扩增出 4 90bp的特异片段 .然后根据RACE法原理 ,巧妙地设计 3′RACE(F2 )和 5′RACE(R3)特异性引物 ,使两者既能分别与文库载体上的筛选扩增引物配对扩增cDNA 3′和 5′末端序列 ,又能使扩增出的 3′RACE和 5′RACE产物序列有重叠部分 ;另外设计引物时还兼顾到使F2和R3也能配对 ,从而能对 3′RACE和 5′RACE扩增产物进行双特异性引物常规PCR鉴定 .该方案不但能够直接根据序列鉴定 3′RACE和 5′RACE产物是否为同一基因序列 ,还能快捷地用常规PCR鉴定 3′RACE和5′RACE扩增产物是否为特异性扩增 ,避免了对非特异性扩增产物的克隆测序等繁琐的鉴定过程 ,优化了基因克隆策略 .最后根据拼读出的全长序列设计引物 (F4 ,R4 )扩增出完整编码区 .应用该方法成功地从小金海棠缺铁处理的根系cDNA文库中克隆了Fe(Ⅱ ) 转运蛋白基因的cDNA .

植物Nramp基因及其与金属离子转运的关系

概述了植物Nramp基因家族及其序列结构分析;在金属离子转运方面的作用机制;表达调控及亚细胞定位;与植物乙烯信号转导途径的核心组分EIN2基因之间的关系等;对今后的研究重点和应用也做了展望。