柔嫩艾美耳球虫Cathepsin B基因的克隆表达及活性研究

旨在利用同源克隆法从柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)中克隆组织蛋白酶B基因(Etcat B),为进一步研究其基因表达和基因功能奠定基础。选用未孢子化的柔嫩艾美耳球虫Houghton株,通过对已公布的柔嫩艾美尔球虫序列进行分析,利用RT-PCR的方法克隆EtcatB基因的cDNA序列,并将其重组于transE1原核表达载体中,鉴定后,重组质粒转入大肠杆菌Rosetta进行诱导表达。利用纯化所得Etcat B蛋白制备兔抗多抗,同时利用明胶酶谱法初步验证其活性。利用Real-time PCR和Western blot的方法检测Etcat B在球虫发育不同阶段和孢子化不同阶段的表达水平。成功克隆得到一个长度为1 539bp的Etcat B基因,并重组表达了球虫的组织蛋白酶B。SDS-PAGE电泳结果显示,在1mmol·L-1 IPTG 37℃诱导4h下,主要以包涵体的形式表达;4℃过夜诱导可以使之转为可溶性表达。表达产物在低pH、有还原剂存在的环境中,可以降解明胶,初步证明重组表达的酶具有一定的活性,Etcat B在配子体和裂子体时期表达较高,未孢子化和子孢子阶段表达相对较低,孢子化过程中表达逐步增加。Etcat B基因的克隆和表达研究,为进一步探究该基因在鸡球虫入侵及其他生物学功能中所起的作用提供了理论基础。

超高效液相色谱-串联质谱快速检测猪肉中的沃尼妙林残留

建立了检测猪肉样品中新型兽药盐酸沃尼妙林残留的快速超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）确证方法。样品使用乙腈提取,在提取过程中同时加入正己烷去除脂质杂质,离心后取乙腈提取液,浓缩至干,用1 mL 0.1%甲酸水∶乙腈（60∶40,V∶V）复溶上机。以反相C18柱作为分离柱,0.1%甲酸乙腈和0.1%甲酸水为流动相,进行梯度洗脱。方法的检测限为10μg/kg,定量限为20μg/kg;在三个浓度水平（20、50、100μg/kg）下进行添加实验,平均回收率均大于92.60%,批内相对标准偏差为1.31%~6.80%,批间相对标准偏差为3.02%~4.60%。此方法简便迅速且稳定有效,适合快速检测猪肌肉中的沃尼妙林残留。

增蛋素对蛋禽生产性能的影响

选用2700只340日龄同批次的海兰褐蛋鸡,经过100d试验,比较增蛋素对蛋鸡生产性能的影响,全期试验结果表明:添加增蛋素的两试验组比对照组,产蛋率分别高7.59%和9.79%,蛋重提高0.77%和1.36%,蛋破损率降低1.31%和2.12%,次蛋率降低0.41%和0.62%。

增蛋素对蛋禽生产性能的影响

选用2700只340日龄同批次的海兰褐蛋鸡，经过100天试验，比较增蛋素对蛋鸡生产性能的影响，全期试验结果表明：添加增蛋素的两试验组较对照组，产蛋率分别提高7．59％和9．79％，蛋重提高0．77％和1．36％，蛋破损率降低1．31％和2．12％，次蛋率降低0．41％和0．62％。

增蛋素对蛋禽生产性能的影响

选用2700只340日龄同批次的海兰褐蛋鸡,经过100天试验,比较增蛋素对蛋鸡生产性能的影响,全期试验结果表明:试验增蛋素的两试验组较对照组,产蛋率分别高7.59%和9.79%,蛋重提高0.77%和1.36%,蛋破损率降低低1.31%和2.12%,次蛋率降低0.41%和0.62%。