喹乙醇对HepG2细胞抗氧化系统的影响

目的:观察喹乙醇对人肝癌细胞(HepG2)抗氧化系统的影响,探讨喹乙醇诱导HepG2细胞氧化性损伤的机制。方法:分别将0、200、400、800μg/ml的喹乙醇作用于HepG2细胞24h后,检测各组细胞内抗氧化酶/物的变化;另设800μg/ml的喹乙醇作用于HepG2细胞3h后,再用超氧化物歧化酶(SOD)(100μg/ml)、过氧化氢酶(CAT)(100μg/ml)及SOD(100μg/ml)+CAT(100μg/ml)分别作用细胞3h的各实验组,采用分子探针2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFDA)检测各组处理后细胞内活性氧含量的变化。结果:不同浓度的喹乙醇作用HepG2细胞24h后,细胞总ATPase、Na+K+-ATPase及Ca2+Mg2+-ATPase和细胞内SOD、谷胱甘肽(GSH)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性随喹乙醇浓度的升高而下降(P<0.05或P<0.01),且具有一定的剂量-效应关系,细胞内CAT活性较对照组下降(P<0.01),但无剂量-效应关系,而细胞内丙二醛(MDA)水平随喹乙醇浓度的升高而增加(P<0.05或P<0.01),且呈一定的剂量-效应关系。经喹乙醇(800μg/ml)处理细胞后,再分别用CAT、SOD及SOD+CAT处理的各组,其ROS含量与单纯喹乙醇(800μg/ml)组相比分别减少80%(P<0.01)、40%及95%(P<0.01)。结论:喹乙醇可使体外培养HepG2细胞的抗氧化系统受到一定的破坏,且产生的ROS形式以H2O2为主。

p38 MAPK在喹乙醇诱导HepG2细胞凋亡中的作用

目的:研究p38 MAPK信号通路在喹乙醇诱导的HepG2细胞凋亡中的作用。方法:分别用不同浓度(0、200、400、800μg/ml)的喹乙醇染毒HepG2细胞24 h和800μg/ml喹乙醇染毒HepG2细胞不同时间(0、0.5、1、2、4、6、12、24 h)后,采用Westernblot法检测细胞内磷酸化p38蛋白和p38总蛋白的表达情况,以p38 MAPK磷酸化水平反映p38 MAPK信号通路的活性。分别采用0、10、20μmol/L的p38 MAPK特异性抑制剂SB203580预处理HepG2细胞1 h后,再用800μg/ml喹乙醇染毒24 h,采用Annexin VFITC/PI法检测细胞凋亡。结果:随着喹乙醇染毒浓度和时间的增加,HepG2细胞的p38磷酸化蛋白表达量逐步增加,其中800μg/ml喹乙醇染毒细胞24 h的实验组与对照组相比,p38磷酸化蛋白的表达量明显上调(P<0.01)。10、20μmol/L的SB203580对喹乙醇诱导细胞凋亡有促进作用,细胞的凋亡率分别为35.4%±2.83%、40.2%±3.98%,较喹乙醇对照组(23.1%±3.59%)明显升高(P<0.05)。结论:喹乙醇能激活p38 MAPK信号通路,且p38 MAPK信号通路的激活参与抑制喹乙醇介导的HepG2细胞凋亡的过程。

喹乙醇诱导HepG2细胞自噬的实验研究

目的:研究喹乙醇对HepG2细胞自噬的影响。方法:分别用不同浓度(0、200、400、800μg/mL)喹乙醇染毒HepG2细胞24h后,进行单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine,MDC)染色,分别通过荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞自噬发生情况。另外,分别用不同浓度喹乙醇(0、200、400、800μg/mL)染毒HepG2细胞24h和400μg/mL喹乙醇染毒HepG2细胞不同时间(0、1、3、6、12、24h)后,采用Westernblot方法检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin1的表达。结果:随着喹乙醇染毒剂量增加,MDC阳性细胞的荧光强度及细胞内MDC荧光颗粒数目明显增加。流式结果显示,与对照组相比,200、400和800μg/mL染毒组MDC阳性细胞百分比均显著增加(P<0.05或<0.01)。随着喹乙醇染毒浓度和时间的增加,LC3-和Beclin1表达量均明显增加,其中400μg/mL喹乙醇染毒细胞24h组与对照组相比,LC3-Ⅱ和Beclin1的表达量均明显上调(P<0.01)。结论:喹乙醇诱导了HepG2细胞的自噬反应。