用rep-PCR技术研究中国花生根瘤菌的多样性

采用细菌基因组重复序列ＰＣＲ技术（简称ｒｅｐＰＣＲ）中常用的ＲＥＰＰＣＲ和ＥＲＩＣＰＣＲ，对从中国１１个省、市的２３个点、２４个花生品种采集的根瘤中分离的５９株花生根瘤菌Ｂｒａｄｙｒｈｉｚｏｂｉｕｍｓｐ．（Ａｒａｃｈｉｓ）进行多样性研究，同时对来自国外的６株花生根瘤菌及１４株参比慢生根瘤菌也进行了比较。得到的低相似性结果表明中国花生根瘤菌基因组存在显著的多样性。ＲＥＰＰＣＲ揭示，在相似性５０％上分为１１个群，而ＥＲＩＣＰＣＲ却得到２４个分群。这两种结果对菌株的分群有差异，暗示这两种短重复序列在慢生根瘤菌基因组中的分布的不同。没有发现菌株间基因组的多样性分布与花生品种、地理来源之间的必然联系。将两者电泳图谱结合并分析，得到介于上述两者间的结果。此结果进一步反映了菌株基因组间存在的多样性。同时还表明ｒｅｐＰＣＲ不仅是研究生物多样性的快速简便方法，还可应用于菌株的鉴别和生态学研究。

根瘤菌新类群的全细胞蛋白电泳及16S rDNA全序列分析

应用ＳＤＳ全细胞蛋白电泳技术对根瘤菌３个新类群进行聚类分析，并对３个新类群中心菌株的１６ＳｒＤＮＡ全序列（Ｍｒ≈１．５ｋｂ）进行了测定．将所测序列与ＥＭＢＬ／ＢａｎｋＩＴ／ＤＤＢＪ资料库中根瘤菌及相关菌已知种的１６ＳｒＤＮＡ全序列进行聚类比较，得到系统发育树状图．树状图中，菌株ＳＨ２２６２３和ＳＨ１９３１２与山羊豆根瘤菌（Ｒ．ｇａｌｅｇａｅ）、葡萄土壤杆菌（Ａ．ｖｉｔｉｓ）、根癌土壤杆菌（Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）和悬钩子土壤杆菌（Ａ．ｒｕｂｉ）在同一个分支上，彼此亲缘关系较近，与其它根瘤菌群亲缘关系较远，表明它们与山羊豆根瘤菌、土壤杆菌属共同构成了一个新的发育分支．菌株ＳＨ２６７２与天山中慢生根瘤菌（Ｍ．ｔｉａｎｓｈａｎｅｎｓｅ）、华癸中慢生根瘤菌（Ｍ．ｈｕａｋｕｉｉ）、百脉根中慢生根瘤菌（Ｍ．ｌｏｔｉ）、鹰嘴豆中慢生根瘤菌（Ｍ．ｃｉｃｅｒｉ）及地中海中慢生根瘤菌（Ｍ．ｍｅｄｉｔｅｒｒａｎｅｕｍ）共同构成一个分支．

真养产碱杆菌聚羟基烷酸合成酶基因在欧文氏菌中的表达

将含有真养产碱杆菌（Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｅｕｔｒｏｐｈｕｓ）合成聚羟基烷酸（ＰＨＡ）基因（ｐｈａＣＡＢ）的质粒ｐＴＺ１８ＵＰＨＢ改造成为具有卡那霉素抗性的质粒ｐＪＭＣ１，并以电击法将ｐＪＭＣ１引入利用碳源广泛的胡罗卜软腐欧文氏菌（Ｅｒｗｉｎｉａｃａｒｏｔｏｖｏｒａ）非致病菌系（Ｅｃｃ１３Ｂ）中，ｐｈａＣＡＢ可获得高效表达，膨大的转基因菌［Ｅｃｃ１３Ｂ（ｐＪＭＣ１）］细胞内几乎充满ＰＨＡ颗粒。以蔗糖为碳源，初步在５Ｌ发酵罐中对转基因菌进行分批补料培养３５ｈ，菌体干重达２８ｇ／Ｌ，ＰＨＡ占菌体干重的６８％，具有生产潜力。将该菌合成的ＰＨＡ提取纯化（纯度达９９％）后，进行核磁共振分析。