鸡传染性喉气管炎病毒gG蛋白多克隆抗体的制备及初步应用

以鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)LJS09株基因组为模板,应用PCR方法扩增gG基因的主要抗原性片段,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)构建pET-30a-gG-gG串联质粒,转化Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达及纯化,获得His-gG-gG重组蛋白,免疫新西兰大白兔制备抗血清。用ELISA检测抗体效价为1∶104。Western-blot分析结果表明,制备的家兔抗-ILTV gG抗体能与纯化的gG蛋白发生特异性反应,且能检测到内源性gG蛋白。间接免疫荧光试验结果表明,制备的家兔抗ILTV-LJS09gG蛋白的多克隆抗体分别能与ILTV LJS09、HLJ0507、MDJ0442、SD0203、Zhj1298株反应,特异性良好。