鸡球虫病药物防治的研究现状

鸡球虫病是一种对养鸡业造成严重危害的寄生性原虫病,其防治已成为养鸡业的重要课题。目前,对鸡球虫病的防治主要还是依赖药物。本文综述了鸡球虫病药物防治的研究现状,主要阐述了聚醚类载体抗生素、化学合成类抗球虫药研究情况,同时分析了目前药物防治存在的问题,诸如耐药性、药物残留、防治费用支出较大等,最后简单综述了制定合理给药程序、开发中草药、应用疫苗免疫等解决方案与对策。

纳川珠利溶液剂对鸡球虫病的药效学研究

对两种不同配方的0.3%纳川珠利溶液剂,分别以6、3、1mg/L三种剂量饮水预防人工感染的鸡柔嫩艾美耳球虫,并用地克珠利预混剂以1mg/kg剂量作为对照。结果显示,0.3%纳川珠利溶液剂的两种配方以上述3种剂量饮水预防鸡球虫病,具有良好的抗球虫效果,抗球虫指数在180以上,属高效范围。表明0.3%纳川珠利溶液剂是纳川珠利的一种高效预防鸡球虫病的良好剂型。

中药对猪源大肠杆菌O_8体外抑菌试验研究

为了探讨猪源大肠杆菌O8对黄连等10种中药的体外敏感性,采用琼脂扩散法和微量二倍稀释法对10种中药水提物进行体外抑菌试验,测定抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:黄连对大肠杆菌O8呈高度敏感,抑菌圈直径为21.3 mm,其MIC值为7.813mg/mL,抑菌效果最好;黄芩、五倍子呈中度敏感,其MIC值为31.25mg/mL;而苦参不敏感,其MIC值为500mg/mL,抑菌效果差。

脱二氧喹烯酮的制备及其细胞毒性研究

脱二氧喹烯酮为喹烯酮主要代谢物之一,了解脱二氧喹烯酮的安全性对喹烯酮的安全性评价具有重要意义。为评价脱二氧喹烯酮的药效及安全性,本研究探索体外合成制备脱二氧喹烯酮,并进行理化鉴定和抗菌活性测试;通过MTT方法研究脱二氧喹烯酮对Vero、HepG2、Chang Liver和L-02等多种细胞生长的抑制作用,利用单细胞电泳研究其对Chang Liver和L-02细胞DNA的损伤作用,利用流式细胞术研究其对Chang Liver和L-02细胞周期的改变。结果显示,体外成功合成制备出脱二氧喹烯酮,而脱二氧喹烯酮对各种细胞都具有较弱的生长抑制作用,其剂量检测范围内细胞抑制率均不到50%,但在较高剂量下脱二氧喹烯酮能导致细胞DNA损伤,主要表现为尾长和尾部DNA含量显著升高;并且脱二氧喹烯酮还改变Chang Liver细胞周期,表现为S期阻滞。说明脱二氧喹烯酮具有一定的细胞毒性。

抗鸡球虫病的三嗪类新化合物纳川珠利的药效试验

采用抗鸡柔嫩艾美尔球虫实验室笼养试验模型,对新合成的三嗪化合物纳川珠利进行了2批次的抗球虫活性试验。结果显示,纳川珠利添加剂量5、10和30 mg/kg时,抗球虫指数均大于180。添加剂量1和3 mg/kg时,见有少量血便和盲肠病变,抗球虫活性介于中效和高效之间。表明纳川珠利是一种高效安全的新型三嗪类抗球虫化合物,推荐使用剂量以3~5 mg/kg为宜,有望开发成为一种新的抗球虫药物。

抗球虫新化合物纳川珠利的一般毒理学研究

为评价新型抗球虫化合物纳川珠利的一般毒理学特性,选用昆明小鼠进行经口给药的急性毒性试验,以剂量递增法计算蓄积系数(K),于连续给药后第21天一次灌服1个LD50剂量,观察各组小鼠对化合物的耐受性。结果显示,该化合物采用寇氏改良法计算的LD50为768 mg/kg,95%可信限为644～916 mg/kg;采用机率单位加权回归法(Bliss法)计算的LD50为769 mg/kg,95%可信限为615～960 mg/kg;计算的蓄积系数为4.26,中度蓄积;耐受性试验中试验组和对照组的小鼠死亡率差异无统计学意义(P>0.05),小鼠对化合物的耐受性无明显变化。可初步认为该新化合物的毒性较低,在临床上应用相对安全,具有较好的成药性基础。

纳米磷酸钙作为猪瘟多肽疫苗佐剂的研究

为了探索纳米磷酸钙(NCaP)作为猪瘟多肽疫苗佐剂的可行性,本研究利用猪瘟多肽疫苗作为抗原,制备纳米磷酸钙吸附猪瘟多肽疫苗。将制备好的疫苗免疫兔后,分别检测兔抗体水平和攻毒后体温变化情况。检测结果显示,纳米磷酸钙对猪瘟多肽吸附率达70%;免疫后纳米磷酸钙佐剂组抗体水平低于弗氏佐剂,但与游离猪瘟多肽疫苗组相比,有较大提高;除弗氏佐剂组外,所有实验兔均有体温升高现象,纳米磷酸钙佐剂组体温升高的时间与空白组相比推迟16 h。结果表明,NCaP作为佐剂相对游离猪瘟多肽可提高其免疫效果,但其诱导的抗体水平低于弗氏佐剂组。

磷酸钙作为O型口蹄疫多肽疫苗佐剂的研究

为了探索磷酸钙（calciumphosphate，CaP）作为多肽疫苗佐剂的可行性，本研究以O型口蹄疫多肽疫苗为抗原，采用共沉淀法制备CaP-多肽复合物，测定包封率。将制备好的疫苗，分别在0、14、28d腹腔注射免疫Wistar大鼠，尾静脉采血检测口蹄疫抗体水平。结果显示，CaP可包裹一定量的O型口蹄疫多肽，包封率达到50％，免疫大鼠后油佐剂组抗体效价在14d达到2^6，42d增至2^10并可维持35-42d；CaP组在21d后陆续产生抗体，抗体水平较油佐剂低，为2^7～2^8。结果表明，CaP作为佐剂相对游离多肽可以提高O型口蹄疫多肽疫苗免疫效果，但抗体水平相对油佐剂低。

纳川珠利在鸡体内的药动学特征及其与血浆蛋白结合率的研究

为了解纳川珠利在靶动物鸡体内的药动学参数,选用5周龄健康浦东黄羽肉鸡,按照体重单次灌服1、5和10mg/kg受试化合物,采用UPLC-UV方法检测待测样品中目标化合物的浓度,采用体外平衡渗析法检测血浆蛋白结合率。结果显示,纳川珠利在鸡体内的动力学过程符合一级消除动力学,吸收速率常数(Ka)平均0.74h-1,消除速率常数(Ke)平均0.076 3h-1,半衰期(t1/2)平均9.43h,表观分布容积(V/F)平均0.207 7L/kg,低、中、高给药剂量下血药质量浓度-时间曲线下面积AUC0→t分别为48.301 3、236.314 2和472.464 4μg/(mL·h),达峰时间(tmax)分别为4.003 4、2.501 4和3.500 0,达峰浓度(Cmax)分别为4.134 2、18.624 7和33.879 1μg/mL。鸡血浆蛋白的体外结合率大于96.3%,具有非浓度依赖的特点。上述结果表明,纳川珠利属于高血浆蛋白结合率化合物,在鸡体内属一级动力学消除,半衰期较长,代谢较慢,在与其他药物共用时有产生竞争性结合的风险。

抗大肠杆菌性腹泻中药复方筛选研究

为了筛选抗大肠杆菌性腹泻的中药复方,试验采用小鼠腹腔注射大肠杆菌O101的方法建立腹泻模型,比较不同中药复方对腹泻小鼠的症状、体重、血细胞变化及脏器指数的影响。结果表明:与模型对照组比较,复方4组小鼠体重增重显著,脾脏指数差异显著,血细胞指标趋于正常。说明复方4能有效治疗大肠杆菌所致的腹泻。

电位滴定法测定过硫酸氢钾复合粉中氯化钠含量

为建立一种测定过硫酸氢钾复合粉中氯化钠含量的方法,本试验以氯化钠基准试剂为对照,采用电位滴定-水溶液银量法在常温下进行测定.结果表明:该方法测定线性范围为10.0～55.0 mg,r=0.999 7;方法重复性好(RSD=1.11%,n=5);准确度高,回收率为99.6%(RSD=0.88%,n=6),加样回收率为99.1%(RSD=1.39%,n=6).可作为过硫酸氢钾复合粉中氯化钠含量的测定方法.

采用泊洛沙姆为佐剂的O型口蹄疫多肽疫苗对大鼠脾细胞的增值作用

为研究泊洛沙姆作为佐剂的O型口蹄疫多肽疫苗对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测不同浓度的泊洛沙姆407、FMDV-O型泊洛沙姆佐剂多肽疫苗(多肽浓度50μg/m L)、FMDV O型多肽抗原液(7.06 mg/m L,用PBS稀释至50μg/m L)及FMDV O型油乳佐剂多肽疫苗(多肽浓度50μg/m L)对伴刀豆球蛋白A(Concanavalin A,Con A)处理淋巴细胞的增殖率。结果表明,与空白对照组相比较,泊洛沙姆各浓度对脾细胞均有增殖作用,多肽疫苗在高浓度的时候对细胞有抑制作用,随着作用浓度的降低,又进而转为细胞增殖作用。

荧光光谱法在半抗原-载体蛋白偶联物鉴定中的应用

对苯甲酸-牛血清白蛋白偶联物和苯胺-牛血清白蛋白偶联物进行荧光光谱鉴定。结果显示,对苯甲酸-牛血清白蛋白偶联物和苯胺-牛血清白蛋白偶联物的荧光光谱与其半抗原和载体蛋白相比均发生变化,苯甲酸-牛血清白蛋白偶联物和苯胺-牛血清白蛋白偶联物合成成功。研究表明,荧光光谱法是一种鉴定半抗原-载体蛋白偶联物的可行的方法。

磷酸化酵母葡聚糖抗氧化及免疫增强活性研究

采用磷酸化修饰方法对酵母葡聚糖进行结构修饰。通过对1，1-二苯基-2-苦肼基（DPPH）、超氧化物阴离子、羟自由基的清除试验，测定磷酸化酵母葡聚糖（pGSC）的抗氧化活性；通过对小鼠脾脏淋巴细胞的增殖作用评价其细胞免疫增强活性。结果表明：pGSC对DPPH、超氧化物阴离子、羟自由基的清除率均随着pGSC的浓度的增加而增加，在浓度为5mg／mL时，对3种自由基的清除率分别为58．99％、76．25％、62．3％。表明pGSC对3种自由基均有较好的清除作用，表现出了较好的抗氧化活性。在0．5～4mg／mL的浓度范围内，与对照组相比，小鼠脾脏淋巴细胞的增殖（As70）差异不显著（P〉0．05）；但pGSC浓度为0．5mg／mL时，其A570比对照组可提高4．76％，表明pGSC具有一定的免疫增强活性。

15种中药对猪大肠杆菌的体外抑菌试验

为了探讨黄连等15种中草药对猪大肠杆菌的体外抑菌作用,试验采用琼脂扩散法和微量二倍稀释法应用15种中草药水提取物对猪大肠杆菌进行体外抑菌试验,测定抑菌圈直径和最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:黄连、大黄均对大肠杆菌O101呈高度敏感,抑菌圈直径分别为20.8,20.3 mm,其MIC值为7.813 mg/m L,抑菌效果最好;黄芩、黄柏、金银花呈中度敏感,其MIC值为31.25 mg/m L;而苦参、马齿苋、败酱草等不敏感,其MIC值为500 mg/m L,抑菌效果差。

柔嫩艾美耳球虫两种表面抗原基因的原核表达与鉴定

为进一步研究柔嫩艾美耳球虫表面抗原蛋白,应用RT-PCR从柔嫩艾美耳球虫第2代裂殖子总RNA扩增表面抗原基因SAG19(Q70CD0)和SAGfm(U6L233),与pGEM-T easy载体连接,扩增目的片段后分别双酶切扩增产物与pET-28a(+),连接转化至BL21后,诱导表达,分别获得两种重组蛋白。SDSPAGE结果表明,两种重组蛋白的分子质量均为32ku,为包涵体蛋白形式。分别以感染柔嫩艾美耳球虫的鸡血清和重组蛋白免疫新西兰大白兔获得的多克隆抗体作为一抗,经Western blot分析,结果表明重组蛋白具有良好的免疫原性和抗原性。通过对这两种表面抗原基因的研究,为基因工程疫苗的研究提供一定的理论依据。

硝唑沙奈肠溶缓释颗粒体外释放度的测定

【目的】建立硝唑沙奈肠溶缓释颗粒体外释放度的测定方法,为控制肠溶缓释颗粒剂的质量及提高硝唑沙奈(NTZ)治疗畜禽肠道疾病的效果提供参考依据。【方法】采用转篮法[转速75r/min,温度(37.0±0.5)℃,释放介质前2h为750mL2%十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)0.1mol/mLHCl溶液,后加入250mL2%CTAB0.2mol/mL磷酸盐缓冲溶液,pH6.8,总体积1000mL]进行硝唑沙奈肠溶缓释颗粒的溶出试验,分别在不同时间点取样,以高效液相色谱—紫外检测(HPLC-UV)法测定峰面积,计算硝唑沙奈的体外累积释放度,并对释药模型进行拟合。【结果】硝唑沙奈及替唑尼特在2%CTAB0.1mol/mLHCl和2%CTAB磷酸盐缓冲液(pH6.8)两种介质中的理论塔板数均大于3000,分离度均大于2.0。精密度试验、重复性试验、稳定性试验、回收率试验、释放度均一性试验等均表明,HPLC-UV法适用于硝唑沙奈肠溶缓释颗粒体外释放度的测定。硝唑沙奈肠溶缓释颗粒在前2h内的累积释放量<10.0%,至24h时释放度大于90.0%,符合药品释放度检测要求。硝唑沙奈肠溶缓释颗粒体外释放的最佳拟合模型为Higuchi模型。【结论】HPLC-UV法是测定硝唑沙奈肠溶缓释颗粒体外释放度的有效方法,具有准确可靠、重复性良好、回收率高的特点。

新三嗪化合物纳川珠利的小鼠亚急性毒性试验

为评价新三嗪类抗球虫药物纳川珠利的安全性,选用100只昆明小鼠,连续30d分别灌服4.8、19.2、76.8mg/kg的药物,以纯水和空白溶剂为对照,通过临床观察、血液学分析、血液生化检测、脏器系数和病理学检查,系统地评估了该化合物对小鼠的亚急性毒性作用。结果显示,试验期间无小鼠死亡,在开始用药1周内,高剂量组小鼠有轻微临床毒性症状,2周后症状消失。试验过程中各组小鼠增重差异无统计学意义(P>0.05),长期高剂量给药后小鼠心和肝的脏器系数明显改变(P<0.05),血液红细胞、碱性磷酸酶、肌酐明显增高和葡萄糖、胆固醇、尿酸显著降低(P<0.05),高剂量组肝、肾小部分发生轻微水样变性、点状坏死等病理改变,停药15d后,碱性磷酸酶和尿酸水平与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。提示纳川珠利长期大剂量使用可能存在肝、肾等轻微损伤的风险,但损伤是可逆的,停药后短期可逐渐恢复,临床使用相对安全。

利用UPLC-TOF及MS/MS鉴定头孢喹肟中的同分异构体

建立了分离鉴定头孢喹肟中同分异构体杂质的UPLC与TOF及MS/MS联用方法。以乙腈-1m L/L甲酸水为流动相进行梯度洗脱,经RP18色谱柱分离,通过电喷雾串联质谱正离子模式在线检测,使得头孢喹肟及其同分异构体杂质获得有效分离,主成分和其同分异构体杂质的保留时间分别为4.9 min和4.5 min,同时它们的二级质谱产物离子信息及其裂解方式呈现明显的差异。本试验初步建立了分离及鉴定头孢喹肟同分异构体杂质的色谱质谱检测方法,为硫酸头孢喹肟原料药和制剂的有关物质研究及检测奠定了基础。

3-甲基喹噁啉-2-羧酸的制备及其细胞毒性

通过贝鲁特反应和还原、脱羧反应在体外合成制备3-甲基喹噁啉-2-羧酸,并进行理化鉴定和抗菌活性测试;通过MTT方法研究3-甲基喹噁啉-2-羧酸对多种细胞的生长抑制作用,利用单细胞电泳研究其对细胞DNA的损伤作用,利用流式细胞术研究其对细胞周期的改变。结果显示,体外成功合成制备出3-甲基喹噁啉-2-羧酸,而3-甲基喹噁啉-2-羧酸几乎没有抗菌效果,对多种细胞的生长抑制作用较弱,在剂量检测范围内细胞抑制率不到30%,但在一定剂量下能导致细胞DNA损伤,主要表现为尾长和尾部DNA含量显著升高;并且3-甲基喹噁啉-2-羧酸也能改变Chang细胞的细胞周期,表现为S期阻滞。结果表明,3-甲基喹噁啉-2-羧酸具有一定的细胞毒性。