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题名高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性克隆的构建
被引量:6
- 1
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作者
吕健
孙志
张建武
刘维全
袁世山
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机构
中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室
中国农业大学生物学院
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出处
《微生物与感染》
2007年第4期219-227,共9页
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基金
国家自然科学基金重点项目(No.30530580)
上海市科技兴农重点攻关项目(2006B4)
科技部重大基础研究"973"专项(2005CB523200)
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文摘
目的确定"猪高热综合征"的主要病原是否为猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),为探寻高致病性病毒基因组结构和功能、高致病性蓝耳病发病机制,以及进一步研制针对后者的基因工程疫苗奠定基础。方法根据PRRSV基因组序列设计特异性引物,分5段扩增了高致病性PRRSV JX143株的全长cDNA,将各cDNA片段克隆到pBlueScriptⅡSK(+)载体中,进而利用重叠区中的单酶切位点将其连接成JX143株的全长cDNA克隆pJX143和含有遗传标记MluⅠ限制性内切酶的基因组全长cDNA克隆pJX143-M。结果全长cDNA克隆经体外合成RNA后转染MA-104细胞,均获得稳定的拯救病毒。通过比较亲本病毒与拯救病毒的病毒滴度、多步生长曲线和利用拯救病毒vJX143进行动物回归试验,结果发现病毒学及生物学特性没有显著差异。结论PRRSV的JX143株病毒确实是引起"猪高热综合征"的主要病原;建立了首个高致病性PRRSV的感染性cDNA克隆,证明拯救病毒与亲本病毒生物学特性相同。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
感染性克隆
高致病性
动物回归试验
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Keywords
Porcine reproductive and respiratory syndrome virus
Full length eDNA clone
High-pathogeneity
Regression text
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分类号
S858.28
[农业科学—临床兽医学]
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题名猪繁殖与呼吸综合征病毒嵌合感染性克隆的构建和应用
被引量:3
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作者
李祥健
张建武
吕健
余丹丹
姚火春
袁世山
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机构
中国农业科学院上海兽医研究所动物传染病防治研究室农业部动物寄生虫病重点实验室
南京农业大学动物医学院农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室
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出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第9期1573-1581,共9页
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基金
国家"十一五"科技支撑计划(No.2007BAD86B06-3)
上海市科技兴农计划(No.2006-10-4)
+1 种基金
上海浦江人才计划(No.06PJ14118)
"973"项目(No.2005CB523202)资助~~
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文摘
高致病性猪蓝耳病近年来在我国广泛流行,目前尚无高效疫苗用于该病的防制。本研究以PRRSV弱毒感染性克隆-pAPRRS作为主要骨架,将高致病性猪蓝耳病病毒江西分离株(JX143)的主要结构蛋白基因(ORF4-7)以及3′UTR区域替换入pAPPRS相应编码区域,构建了pSX12(ORF4-7-3′UTR)、p5NX12(ORF5-7-3′UTR)以及p56N12(ORF5-6)三个PRRSV全长嵌合克隆。经DNA转染Marc-145细胞后拯救出嵌合病毒,并对拯救病毒进行了病毒生物学特性的分析;选取拯救病毒v56N12(ORF5-6)和vSX12(ORF4-7-3′UTR)免疫29日龄猪进行免疫原性试验,结果表明,以v56N12免疫后抗体水平相对较低,故免疫原性相对较差;而vSX12病毒免疫后14d血清ELISA抗体达到阳性值(IDEXXELISA值s/p≥0.4),免疫后28d中和抗体效价从原来的1:5以下上升到1:15以上,说明vSX12具有良好的免疫原性并可进行免疫监测;免疫后28d以强毒JX143株攻毒,结果vSX12免疫组未见发病,而未免疫攻毒对照组全部发病并有1头死亡,vSX12免疫猪攻毒后病毒血症持续6d后消失,而对照组攻毒后至少持续13d,说明vSX12可对高致病性猪蓝耳病提供有效的免疫保护。本研究构建的三个嵌合病毒为开发同时抗经典和变异株PRRSV感染的二价疫苗,以及探寻高致病性猪蓝耳病病毒的毒力因子奠定了基础。
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关键词
猪繁殖与呼吸障碍综合征
高致病性猪蓝耳病
感染性克隆
嵌合病毒
候选疫苗
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Keywords
PRRSV, high pathogenecity, infectious cDNA clone, chimeric viruses, vaccine candidates
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分类号
S852.5
[农业科学—基础兽医学]
Q789
[生物学—分子生物学]
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