农业部家畜血吸虫病流行病学观测点2011年观测结果情况

2011年对8个家畜血吸虫病观测点血吸虫感染、野粪污染情况以及螺情进行了调查。全年共检测了21 091头牛、1425只羊以及1760头(匹)其他家畜,血吸虫病感染率分别为0.42%、0.63%和0%。在97头(只)感染家畜中,90.72%(88头)为牛,9.28%(9只)为羊。江西省吴城镇和湖南省南大膳镇的牛血吸虫感染率超过4%。在湖南省和江西省的观测点中发现家畜粪便有血吸虫虫卵污染,其中96.15%阳性野粪为牛粪。所有观测点都有钉螺分布,但阳性钉螺主要分布在湖南省和江西省的观测点。观测结果显示湖南省洞庭湖和江西省鄱阳湖地区是目前防控家畜血吸虫病的重点地区,且病牛依然是血吸虫病疫区(尤其是湖沼型地区)的主要传染源。

中国家畜血吸虫病防治

本文对家畜血防在中国血吸虫病防控中的作用与地位、家畜/农业血防发展历程以及中国血吸虫病防治科研进展、面临的主要难点与挑战等方面进行了论述,并对今后家畜血防工作提出了建议。

2011年中国家畜血吸虫病疫情状况

本文通报了2011年中国家畜血吸虫病疫情状况。湖南省、湖北省、江西省、安徽省、江苏省、四川省、云南省7个流行省共对784 679头牛、41 110只羊以及30 005头(匹)其他家畜进行了检测,阳性率分别为0.88%、0.95%和0.09%。根据各省放牧家畜数和阳性率推算,全国共有病畜10 894头(只、匹),比2010年下降了27.28%,其中病牛为8433头,比2010年下降了33.71%。从病畜的地域分布看,湖南省、江西省两省病畜数占全国病畜数的62.06%,两省合计病牛数占全国病牛数的67.21%。调查结果显示,2011年家畜血吸虫病疫情与2010年相比继续下降。洞庭湖和鄱阳湖地区是今后家畜血吸虫病疫情控制的难点和重点。

2010年全国家畜血吸虫病疫情状况

本文通报了2010年中国家畜血吸虫病疫情状况。在湖南省、湖北省、江西省、安徽省、江苏省、四川省、云南省7个流行省,共对715 733头牛、39 524只羊以及20 822头(匹)其他家畜用粪便毛蚴孵化法进行了检测,血吸虫阳性率分别为1.11%、1.00%和0.03%。根据各省放牧家畜数和阳性率计算,全国共有14 980头(只、匹)家畜感染血吸虫,其中84.92%为病牛(12 721头)。从病牛的地域分布看,湖南省、湖北省、江西省、安徽省4省病牛数占全国病牛数的95.81%。调查结果显示病牛依然是血吸虫病疫区的主要传染源,湖沼型流行区是当前防控血吸虫病的重点地区。

用日本血吸虫重组抗原诊断牛血吸虫病的研究

为寻找可替代虫卵抗原(SEA)用于家畜血吸虫病血清学诊断的重组抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)比较了日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水区多肽重组蛋白LHD-Sj23和日本血吸虫SEA检测牛血吸虫病的敏感性和特异性。结果显示,SEA和LHD-Sj23作为诊断抗原对189例血吸虫病牛和92例健康牛的阳性检出率分别为87.8%和90.5%,阳性符合率分别为93.5%和92.4%。两种抗原之间敏感性和特异性均无显著性差异(P>0.05)。提示,LHD-Sj23重组抗原可替代SEA用于家畜血吸虫病的血清学诊断。

日本血吸虫抱雌沟蛋白筛选噬菌体展示抗原对小鼠血吸虫病免疫效果观察

在前期研究中我们利用日本血吸虫抱雌沟蛋白筛选日本血吸虫噬菌体展示cDNA文库,共获得10种阳性噬菌体克隆。本研究选择其中5种噬菌体克隆单独或联合免疫小鼠,观察其对血吸虫成虫合抱的影响以及对血吸虫病的免疫预防效果。结果显示,19号克隆单独免疫和6号、18号混合免疫在预防实验中分别取得了40.53%和31.14%的减虫率及35.31%,44.65%的肝脏减卵率。研究结果提示,19号、6号和18号噬菌体展示的EST序列编码基因具有一定的抗血吸虫生殖免疫效果,在血吸虫疫苗研究方面具有重要价值。

东方田鼠IgG和IgG_3对日本血吸虫抗原反应特性的研究

本文对东方田鼠(Microtus fortis)总IgG和IgG3对日本血吸虫抗原的反应特性进行了研究。纯化东方田鼠IgG,用间接ELISA法检测不同浓度东方田鼠总IgG和IgG3对日本血吸虫童虫可溶性抗原(soluble schistosomula antigen,SSA)、成虫可溶性抗原(soluble adult worm antigen,SWA)、虫卵可溶性抗原(soluble egg antigen,SEA)、童虫不可溶性抗原(insoluble schistosomula antigen,ISSA)、雄虫不可溶性抗原(insoluble male worm antigen,ISMA)、雌虫不可溶性抗原(insoluble female worm antigen,ISFA),以及基因工程抗原rSj14、rSj23-HLD、rSJ28GST、rSjPP的反应情况。结果显示,HRP标记免抗东方田鼠IgG抗体和羊抗小鼠IgG3抗体作为二抗,A值变化规律一致。该结果显示东方田鼠总IgG和IgG3与日本血吸虫抗原可能存在非特异性反应。

胶体金免疫层析条诊断家畜日本血吸虫病的现场应用

为评估快速胶体金免疫层析条(colloidal gold imunochromatography assay,GICA)诊断现场家畜日本血吸虫病的价值,以GICA法对来自湖南血吸虫病流行区和非流行区的山羊、水牛、黄牛血清进行检测,并和间接血凝法(indirect haemagglutination test,IHA)及粪便孵化法的诊断结果进行比较。结果显示,GICA对流行区284只山羊、172头水牛和145头黄牛血清检测,阳性率分别为10.21%、8.14%、8.28%;对非流行区的30只山羊、25头水牛、17头黄牛检测,假阳性率分别为10%、12%和11.76%。GICA和IHA的诊断结果相比,阳性符合率分别为93.8%、100%、100%,阴性符合率分别为99.7%、98.9%、98.7%;GICA与粪便孵化法的诊断结果相比,阳性符合率均为100%,阴性符合率分别为94.6%、96.9%、94.3%。可见,GICA法快速、简便,可以代替现行的IHA和粪便孵化检查法,用于疫区家畜血吸虫病的筛查。

洱源县马街自然村奶牛血吸虫病综合治理防控效果观察

本文报道了云南省洱源县马街自然村采用综合治理措施防控奶牛血吸虫病的效果。该自然村2004-2006年实施药物驱虫的单一措施,2007-2013年实施综合治理措施,每年采用粪便毛蚴孵化法监测奶牛血吸虫病疫情。结果显示,2004-2006年奶牛血吸虫感染率从19.36%下降到15.44%,防控效果不显著;2007年后疫情快速下降,到2012和2013年奶牛血吸虫感染率为0。可见,在山区型流行区采用与当地实际情况相结合的综合治理措施,对于防控奶牛血吸虫病具有良好效果。

日本血吸虫磷酸甘油酸变位酶SjPGAM基因的克隆、表达及功能分析

磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglyceratemutas)是糖酵解过程中的一种重要酶,主要催化3-磷酸甘油酸转化为2-磷酸甘油酸。利用PCR技术从日本血吸虫19d童虫中首次扩增到一个PGAM家族基因,序列分析表明该基因的完整编码框含753bp,编码250个氨基酸,理论分子量28.26kD,理论等电点7.01。同源性分析结果表明,该基因的氨基酸序列具有典型PGAM家族特征,推测为血吸虫的PGAM基因,命名为SjPGAM(GenBank Accession No.EU374631)。实时定量PCR分析显示该基因在14d和19d童虫中的表达量明显高于其他发育阶段,42d雄虫中的表达量高于雌虫。构建了该基因的原核重组表达质粒pET-28a(+)-PGAM,在大肠杆菌系统中成功获得了表达,重组蛋白以包涵体形式存在,Western blotting显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别。SjPGAM基因及其表达产物的获得,为探索PGAM基因家族在血吸虫能量代谢过程中碳水化合物转运、新陈代谢调节和生长发育提供了重要基础。

酵母双杂交诱饵蛋白日本血吸虫抱雌沟蛋白重组质粒的构建及鉴定

为筛选与血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的因子,本研究以抱雌沟蛋白(gynecophoral canal protein ofSchistosoma japonicum,SjGCP)为诱饵蛋白构建了用于酵母双杂交筛选系统的重组质粒。根据日本血吸虫抱雌沟蛋白的基因序列设计引物,经过PCR扩增、酶切回收,与经相应酶切的线性化载体pBGKT7-BD连接构建重组质粒。随后将重组质粒pGBKT7-BD-SjGCP转化酵母菌株,测定融合蛋白BD-SjGCP在酵母菌中的自激活活性、对酵母菌生长的影响及在酵母中的表达情况。结果显示构建的重组诱饵蛋白质粒pGBKT7-BD-SjGCP能够在酵母细胞内正确表达,没有独自激活报告基因表达的活性,且其表达对酵母细胞没有毒性,不影响酵母细胞的生长。可见,重组质粒pGBKT7-BD-SjGCP可用于筛选与血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的物质。

阳性水牛、黄牛IgG筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库

为寻找有效的家畜日本血吸虫病诊断抗原,从感染日本血吸虫的水牛、黄牛血清中纯化IgG,以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫(44日龄)噬菌体展示c DNA文库。经每种动物IgG三轮(总计六轮)筛选后,随机挑取53个阳性噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析。获得了9个EST序列,其中7个EST序列与已知基因或表达序列标签同源,2个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,以噬菌体展示载体的10B衣壳蛋白开放阅读框(open reading frame,ORF)为依据,对上述7个与Gen Bank数据库资料同源的EST进行对码分析,结果 7个EST序列能和噬菌体展示载体阅读框对码,为有效展示序列。其中3个EST具有较高的重复度,在51个有效克隆中,25个为HSP70 homolog基因,15个为Keratin9基因有重复,6个为Ornithine--oxo-acid transaminase基因。研究结果显示,HSP70 homolog基因、Keratin9基因和Ornithine--oxo-acid transaminase基因作为诊断家畜血吸虫病候选抗原基因,值得进一步开展克隆、表达和诊断效果评估方面的研究。

日本血吸虫基因重组抗原rSj06868对小鼠的免疫保护效果

为克隆、表达日本血吸虫假想蛋白SJCHGC068068编码基因(暂命名为Sj06868)并观察重组抗原的免疫预防效果。应用PCR技术从日本血吸虫7 d童虫、14 d童虫mRNA反转录制备的cDNA中克隆到Sj06868基因的46-438 bp DNA片段,BLASTn分析未发现其他物种中的同源性序列,也未发现其保守序列和相关功能结构域。以pET32a为表达载体、Sj06868基因在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得高效表达,表达产物rSj068068分子量为36 kDa,能被感染血吸虫14 d兔血清识别。将纯化的重组抗原与佐剂ESSAI ISA 206 CELL混合后免疫BALB/c小鼠,与佐剂对照组和PBS对照组相比,分别获得了31.63%、29.19%减虫率以及55.63%、56.27%肝脏虫卵减少率。用ELISA检测各组血清中抗rSj068068特异性抗体结果显示,免疫组在攻击感染前、佐剂对照组和PBS对照组在感染后均产生了较高水平的特异性抗体。本研究结果说明,Sj068068是日本血吸虫特有的童虫期高表达基因,rSj068068在抗血吸虫疫苗和血吸虫感染的诊断方面均有潜在应用价值。