奶牛临床型乳房炎的细菌分离鉴定与耐药性分析

2011年山西省多个奶牛场发生了较严重的乳房炎,对76份采集的奶样进行细菌分离鉴定并采用药敏纸片法检测主要分离菌的抗生素耐药情况。所分离细菌以革兰氏阳性菌为主,革兰氏阳性球菌和其他革兰氏阳性菌分别占60.67%和23.59%。分离出多种病原菌和机会致病菌,主要的病原菌有链球菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等,检出率为2.24%～11.24%,其中无乳链球菌的检出率最高;机会致病菌有粪链球菌、微球菌、克雷伯菌、凝固酶阴性葡萄球菌等,检出率为1.12%～11.24%,其中粪链球菌和微球菌的检出率较大,分别为11.24%和6.74%。药敏试验检测结果显示,在所选的15种药物中,主要分离菌均对丁胺卡那霉素、氟哌酸和恩诺沙星3种药物敏感;大肠杆菌、克雷伯菌、凝固酶阴性葡萄球菌对青霉素类和β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂类药物产生了极强的耐药性,耐药率均为100%;乳房链球菌对该类药物也产生不同程度的耐药,耐药率为20%～100%;对链霉素产生100%耐药的细菌有大肠杆菌、克雷伯菌、无乳链球菌、乳房链球菌、停乳链球菌等细菌;部分分离菌对卡那霉素、庆大霉素、链霉素、四环素、红霉素、先锋霉素Ⅴ、复方新诺明等药物产生不同程度耐药。被检奶牛场混合感染较为严重,应进一步加强环境卫生管理,临床治疗应合理有效用药。

牛源性无乳链球菌血清型分布及抗生素耐药性研究

本研究旨在查明牛源性无乳链球菌血清型分布及对常见抗生素的耐药情况,指导临床合理用药。对从中国部分地区奶牛场采集的临床型乳房炎病牛乳中分离鉴定出78株无乳链球菌地方菌株,制备沉淀反应抗原及6株标准血清型无乳链球菌单因子血清抗体,采用环状沉淀试验,对78株无乳链球菌地方菌株进行了血清学分型鉴定;同时采用K-B纸片法测定了这些菌株对抗生素的耐药情况。结果表明,引起奶牛乳房炎的无乳链球菌血清型主要为X型(60.26%),其次为Ⅲ型(10.26%)、R型(7.69%)、Ⅱ型(7.69%)和Ⅰb型(5.13%),Ⅰa型尚未发现。无乳链球菌对目前临床上使用的大部分抗生素,如头孢唑啉、头孢噻肟、丁胺卡那霉素、卡那霉素、庆大霉素、四环素、强力霉素、氟苯尼考、多黏菌素B、环丙沙星、氟哌酸和头孢他啶/棒酸均较敏感;但对氨苄青霉素、链霉素、恩诺沙星、阿莫西林/棒酸和复方新诺明,有一定的耐药性,其耐药率达50%～100%。本研究对进一步研制有效的药物及疫苗,指导临床合理用药具有重要的意义。

无乳链球菌黏附因子研究进展

无乳链球菌是引起奶牛乳房炎的重要致病菌之一,医学上亦称B群链球菌(GBS),可引起新生儿、孕妇、老年人及免疫功能不全者发病甚至死亡。无乳链球菌的致病机制是目前研究的热点之一。无乳链球菌黏附于宿主细胞表面对其进一步的定植和入侵至关重要,黏附因子在该过程中起重要作用。论文对GBS纤维蛋白原结合蛋白、层黏连蛋白结合蛋白、丝氨酸重复蛋白、有免疫原性的细菌黏附蛋白和αC蛋白5个黏附因子的相关研究进行综述,深入阐述该病原菌的黏附定植机制。

不同佐剂的奶牛乳房炎多联苗对小鼠免疫机能的影响研究

为了探讨不同佐剂的奶牛乳房炎多联苗对小鼠免疫机能的影响,笔者将小白鼠分为3个组,每组30只,分别为蜂胶苗组、铝胶苗组和空白对照组。用制备的氢氧化铝胶和蜂胶2种乳房炎佐剂多联苗分别免疫小鼠,分别于免疫后的7、14、21、30和45d采血,进行2种多联苗免疫后E-玫瑰花环率和淋巴细胞转化率测定。结果表明,蜂胶和铝胶2种佐剂苗与空白对照组相比均能显著提高小鼠的细胞免疫水平,2种苗的细胞免疫水平均在免疫后30d左右达到最高峰(P<0.01),但在免疫后第30和45天时E-玫瑰花环率和淋巴细胞转化率,蜂胶苗组均极显著高于铝胶苗组(P<0.01),说明蜂胶佐剂比铝胶佐剂能更强地增强多联苗抗原对小鼠T细胞的致敏程度。该研究为进一步明确乳房炎多联苗免疫机制及筛选更好的免疫佐剂提供了科学数据。

治疗奶牛卵巢疾病性不孕症中药制剂研究进展

奶牛卵巢疾病包括持久黄体、卵巢囊肿、卵巢静止及卵巢萎缩等,是引起奶牛不孕症的主要病因,常用的疗法以药物疗法为主,主要有激素疗法和中药疗法。本文综述了治疗奶牛卵巢疾病性不孕症的中药制剂散剂、汤剂、子宫灌注剂、酊剂和颗粒剂5种剂型的组方、疗效等研究进展。

我国奶牛主要疾病研究进展

文章主要分析了影响我国奶牛业发展的主要疾病,如乳房炎、子宫内膜炎、卵巢疾病、营养代谢疾病、胎衣不下、犊牛腹泻、肢蹄病等的防治现状,并提出了今后的研究方向与对策。

流产母马血液流变学研究

[目的]研究流产对母马血液流变学的影响。[方法]分别检测正常非孕母马、正常怀孕母马、流产母马、正常分娩母马的血液流变学指标,并作比较。[结果]正常非孕母马与正常怀孕母马的各项血液流变学指标无明显差异(P>0.05)。正常分娩母马的全血比黏度、全血还原比黏度、血浆比黏度、血细胞压积、红细胞电泳时间均显著高于正常非孕母马(P<0.001)。而流产母马的各项血液流变学指标均显著高于正常分娩母马(P<0.001)。[结论]母马流产后血液流变学存在异常。

我国奶牛乳房炎无乳链球菌抗生素耐药性研究

为了查明我国奶牛乳房炎无乳链球菌对抗生素耐药情况,指导临床合理用药,从我国部分地区奶牛场采集的临床型奶牛乳房炎病乳中分离鉴定出无乳链球菌115株,采用K-B纸片法测定了这些菌株对抗生素的耐药情况。结果表明,无乳链球菌对目前临床上使用的大部分抗生素,如头孢唑啉、头孢噻肟、丁胺卡那霉素、卡那霉素、庆大霉素、四环素、强力霉素、麦迪霉素、林可霉素、氟苯尼考、多黏菌素B、环丙沙星、氟哌酸、氨苄青霉素/舒巴坦、头孢噻肟/棒酸和头孢他啶/棒酸均比较敏感;但对青霉素G、氨苄青霉素、链霉素、恩诺沙星、阿莫西林/棒酸和复方新诺明等有一定耐药性,其耐药率达50%～100%。

中药子宫灌注剂治疗奶牛不孕症研究进展

中药子宫灌注剂在奶牛子宫内膜炎和卵巢疾病等繁殖疾病的防治中发挥着巨大的作用,临床用于防治奶牛主要繁殖障碍疾病的子宫灌注剂主要有溶液型、混悬型和乳浊型3种。本文对这3种剂型的组方、疗效及作用机理等的研究概况进行综述,以期为新型中药子宫灌注剂的研制及其在临床上的应用提供参考。

奶牛子宫内膜组织抗菌肽分离纯化及其抗菌活性研究

目的:研发奶牛抗菌肽生物制剂,防治奶牛子宫内膜疾病。方法:采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖弥散法检测子宫内膜组织酸溶性提取物抗菌活性;应用琼脂糖电泳及水平电泳洗脱分离出相应的抗菌条带,HPLC进一步分离纯化,琼脂糖弥散法检测纯化物的抗菌活性,Tricine-SDS-PAGE电泳检测其分子量。结果:粗提物中有两种主要的抗菌成分,其对金黄色葡萄球菌26003、大肠杆菌BL-21、牛致病性大肠杆菌4605、绿脓杆菌10104具有抗菌活性。上层条带的主要色谱峰出现在43、45 min,其中45 min收集的样品有较强的抗菌活性,其相对分子质量约为14 k Da。下层条带主要色谱峰出现在5、35、43、45、46、47、50 min,其中35、43、45 min收集的样品有抗菌活性,其相对分子质量分别约为14-16、6和12 k Da。各个组分对大肠杆菌BL-21和金黄色葡萄球菌26003均具有抑菌活性。结论:从奶牛子宫内膜组织分离出了5个抗菌成分,从相对分子质量、抗菌活性等方面初步认定为抗菌多肽。

基于网络药理学的乌锦颗粒治疗羔羊痢疾的作用机制研究

试验旨在通过网络药理学的挖掘功能对乌锦颗粒治疗羔羊痢疾的有效成分进行筛选,并对其潜在作用靶点和可能的通路进行阐释。依据中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)解析乌锦颗粒各单味药的主要有效化合物,同时查找其所对应的靶点,没有靶点的化合物再次通过Swiss Target Prediction数据库对其靶点进行预测,最后得到有事实靶点的化合物及其对应靶点蛋白,采用Cytoscape 3.7.1软件构建有效成分-靶点蛋白网络图;将筛选出的靶点蛋白上传至String在线数据库,构建乌锦颗粒作用于羔羊(Ovis aries)痢疾的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)图,最后将PPI网络中的核心靶点上传至DAVID数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析,同时进行基因功能聚类分析。结果显示,共筛选出有事实靶点的化合物22种,包括山奈酚、豆甾醇、花生四烯酸甲酯、槲皮素及鞣花酸等,化合物对应靶点蛋白去重后共计129个;PPI网络图显示节点数为74,边数为287,平均节点度为7.76,核心靶点蛋白共计67个,包括INSR、NR3C1、ESR1、PLG及PGR等;GO功能富集分析得到与生物过程(BP)相关的条目54个(FDR<0.05),与细胞成分(CC)相关的条目11个(FDR<0.05),与分子功能(MF)相关的条目22个(FDR<0.05),GO功能富集基因计数较多的条目有转录(transcription)、质膜(plasma membrane)及锌离子结合(zinc ion binding)等;KEGG通路富集结果涉及50个基因,基因协同参与的调控通路43条,涉及基因较多的有神经活性配体-受体相互作用(neuroactive ligand-receptor interaction)、癌症的途径(pathways in cancer)及补体和凝血级联(complement and coagulation cascades)等;基因功能分类结果显示,64个核心靶基因中有12个基因具有聚类结果,将其分为功能不同的2组,分别为聚类1组(富集分数6.11,涉及7个核心靶基因)和聚类2组(富集分数2.84,涉及5个核心靶基因)。综上,乌锦颗粒可能是通过多种化合物作用于多种不同的靶点,参与多种通路的调节来实现对羔羊痢疾的治疗机制。

黄藤素对山羊子宫内膜上皮细胞的体外毒性研究

为了探究黄藤素的体外细胞毒性,采用不同浓度的黄藤素作用山羊子宫内膜上皮细胞（EECs）后,采用MTT 法绘制细胞生长曲线；倒置显微镜下观察细胞生长状态；瑞氏—姬姆萨染色法观察细胞形态学变化并通过测定乳酸脱氢酶（LDH）含量检测细胞膜的完整性。结果显示,当黄藤素的浓度为10-227μg/mL 时,黄藤素对EECs有促增殖的作用；当浓度大于227μg/mL 时出现细胞增殖抑制现象,药物对细胞的半数增殖抑制率（IC50）为360μg/mL；瑞氏—姬姆萨染色结果显示,100、200μg/mL 的黄藤素作用于 EECs 时均未对其细胞核、细胞浆的形态产生影响；LDH 结果显示,药物浓度≥250μg/mL 时细胞 LDH 的释放量极显著高于正常细胞组（P 〈0.01）。综上所述,黄藤素作用于山羊 EECs 后呈现一定的毒性作用,且呈现显著的剂量依赖效应,作用于 EECs 的安全剂量范围为≤250μg/mL。

白术提取液急性毒性试验

测定白术提取液对小鼠腹腔注射和肌内注射的急性毒性,评价其安全性,为临床安全用药提供依据。采用最大给药量法,将60只小鼠随机分为3组,每组20只,分为白术提取液100g/kg腹腔注射组、20g/kg肌内注射组和生理盐水100mL/kg腹腔注射组,注射给药后连续观察7d,测定其1日最大给药量,确定白术提取液的急性毒性。结果表明,小鼠腹腔注射和肌内注射的1日最大给药量依次为100和20g/kg,分别相当于临床犬日用量的400和80倍。说明白术提取液较为安全,可在临床研究试用。

荷斯坦奶牛子宫内膜上皮细胞的体外培养

为建立和完善奶牛子宫内膜上皮细胞的体外培养技术,采用组织培养和胶原酶消化相结合的方法,对中国荷斯坦奶牛的子宫内膜上皮细胞进行了原代分离培养,经胰酶差时消化进行纯化,并以免疫组化法检测角蛋白表达。结果显示,所采用的方法可高效获得呈铺路石样的上皮细胞,角蛋白表达呈阳性,第2～8代的传代细胞在形态特征和增殖状态上保持着与原代细胞相近的生物学特征。

中草药饲料添加剂“禽健宝”对蛋鸡生产性能和防病效果观察

用51周龄罗曼蛋鸡2 630羽,随机分为禽健宝组、喹乙醇组和空白对照组。试验期限为60 d。禽健宝组和喹乙醇组在基础日粮中分别按4 g/kg和35 mg/kg的量添加,空白对照组不添加任何药物。结果表明禽健宝组产蛋率分别比喹乙醇组和对照组提高1.0%和3.9%;喹乙醇组和对照组死亡率分别为0.11%和0.91%,禽健宝组为0。禽健宝组和喹乙醇组料蛋比均比对照组降低7.72%。说明禽健宝不但能提高产蛋鸡的产蛋率,提高饲料报酬,而且具有较好的防病保健作用。

芩连液与白虎汤对气分证家兔补体经典途径活化的影响比较

为比较经方白虎汤与自拟方芩连液的分子疗效区别,以静脉注射内毒素建立了具有高热证候的气分证家兔模型,并用白虎汤和自拟方芩连液分别进行治疗,通过ELISA检测比较治疗前后血清总补体(CH50)的含量变化,并采用实时荧光定量PCR技术检测了肝组织中补体第三成分(C3)基因和C-反应蛋白(CRP)基因的表达变化。结果表明,在气分证家兔模型中,补体系统以经典途径活化。白虎汤的治疗能同时保证C3基因和CRP基因的高表达起到治愈作用,而芩连液仅以提高CRP的表达量发挥一定的保护作用。研究表明白虎汤对动物气分证的疗效优于芩连液。

静脉灌注LPS对家兔的发热效应及肝蛋白的SDS-PAGE比较分析

以静脉注射内毒素(LPS)的方法建立了家兔发热模型,并以白虎汤的降温治疗作为反证,再运用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳比较和分析了LPS引起的发热效应对家兔肝脏总蛋白表达变化的影响以及肝组织病理变化。结果表明,以15μg/kg体重的LPS静脉注射家兔能很好地复制出动物温病模型,模型组、治疗组和对照组3组动物的肝蛋白表达均有各自的特异条带。所以,肝组织蛋白的表达变化可以作为动物温病研究与评价的生物学指标。

芩连液与白虎汤对气分证家兔免疫调节及抗氧化活性的影响比较

为比较自拟方芩连液和白虎汤对气分证的疗效差别,以静脉注射脂多糖(LPS)制作气分证家兔模型,在两种药物治疗前后分别检测了血清免疫球蛋白IgG、IgM和IgA的含量变化,以及血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)的变化。结果显示,白虎汤对气分证家兔升高了的血清免疫球蛋白和T-AOC的含量变化无显著影响,但能使血清SOD下降,MDA上升;芩连液可使得IgM和IgG含量下降,SOD上升,MDA无显著变化,而T-AOC含量下降。结果表明,白虎汤对气分证家兔免疫调节和总抗氧化能力的保持优于芩连液,但对SOD和MDA调节不及芩连液。

犬瘟热病毒分离株N、H、F蛋白基因的变异分析

通过RT-PCR方法扩增到犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)分离株GS0812-4的N、H、F蛋白基因,然后克隆入pGEM-T Easy载体并进行序列分析和抗原表位预测分析。结果表明,GS0812-4分离株的N、H、F蛋白基因与其他分离株相应序列的核苷酸同源性分别为93.2%～97.8%、90.3%～97.3%、93.2%～97.8%,其推定的氨基酸同源性分别为96.6%～98.7%、91.3%～97.9%和96.6%～98.7%;GS0812-4分离株N、H、F蛋白基因与疫苗株相应序列的核苷酸同源性分别为93.1%～93.8%、89.4%～90.5%、93.1%～93.8%,其推定的氨基酸同源性分别为96.4%～97.3%、89.3%～91.3%、96.4%～97.3%。由基因系统发育树可知,GS0812-4与疫苗株处于不同的分支,其中与MKY-KM08的亲缘关系最近,但GS0812-4在N、H、F 3个基因系统发育树上与其他同一毒株的亲缘关系远近不同。H、F蛋白的抗原表位预测结果表明,GS0812-4与MKY-KM08和疫苗株的抗原表位均有差异。说明GS0812-4是野毒株,与MKY-KM08属于同一基因型,来源于同一毒株,但两毒株间的H蛋白和F蛋白的抗原表位仍有差异。

芩连液与白虎汤对脂多糖致家兔肝损伤的疗效比较

为比较自拟方芩连液和白虎汤对高热病症的治疗效果,通过静脉注射脂多糖(LPS)复制了家兔高热病症,并在两种药物治疗前后分别进行了肝脏组织病理观察与血清生化指标分析。结果显示,15μg/kg LPS能致家兔肝脏组织产生明显病理损伤,血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和尿素(Urea)含量上升,而总胆固醇(TC)含量下降,经白虎汤和芩连液治疗后肝脏组织病理损伤显著减轻,4项血清生化指标向正常水平恢复。结果表明,白虎汤和芩连液对LPS引起的肝损伤都具有显著的治愈效果,且两种组方的疗效各有优势。