通过构建三段T-DNA载体高频率获得无标记转基因大豆植株的研究

高频率获得无选择标记转基因植株有利于转基因植物的环境释放和安全性生产，农杆菌介导的共转化法是获得无标记转基因植株的方法之一。含二段T-DNA载体的共转化法已被人们成功应用，而二段以上T-DNA载体的共转化法还未见报道。基于这一目的，通过几个中问质粒构建了含有三段T-DNA的双元表达载体pNB35SVIP1，其中包含1个拷贝bar基因选择标记基因表达盒和2个拷贝VIP1目的基因表达盒。利用EHA101农杆菌菌系介导法转化大豆子叶节，经过在含3～5mg／L glufosinate培养基上多次筛选，获得了一定数量抗性再生植株，然后对抗性再生植株进行叶片涂抹除草剂、Southern blot和Northern blot检测，共鉴定出51棵T0代转基因植株，转化频率0．83％～3．16％，二个基因的共转化频率为86．4％。在对T1代群体进行叶片涂抹除草剂检测的基础上，不抗除草剂植株进行PCR、Southern blot和Northern blot检测，共鉴定出41棵无选择标记转基因植株，无标记植株获得率为7．6％。检测结果还表明，T1代群体中22．7％的株系发生了基因丢失现象，27．3％的株系发生了bar基因沉默现象，目的基因在37．1％的无标记植株中发生了沉默现象。三段T-DNA的双元表达载体是获得无标记转基因植株的理想途径。

小麦花药培养后代和杂交后代中高分子量麦谷蛋白亚基变异分析

通过对Alondra、Orofen等5个小麦品种进行花药培养,同时以新春9号、京771、CB037等9个高分子量麦谷蛋白亚基组成不同的小麦品种相互间配制24个正、反交组合,分析小麦加倍单倍体无性系和品种间杂交后代中高分子量麦谷蛋白亚基变异,探讨利用花药培养和杂交手段改良HMW-GS组成的可能性。SDS-PAGE电泳分析发现,小麦加倍单倍体无性系中HMW-GS发生了频繁变异,Alondra加倍单倍体中变异率最高(61.8%),Verry加倍单倍体次之(16.7%),均出现了原始材料中所不具备的亚基类型;HMW-GS在部分F1杂种中呈现不完全共显性、亚基表达沉默和正、反交亚基表达不一致现象,宁春4号/CB037、京771/宁春4号2个组合中出现了双亲所不含有的亚基;通过连续自交和对新出现亚基的跟踪选择,获得了表达新亚基的高代株系。研究结果对于改良小麦加工品质,加深了解小麦HMW-GS编码基因的遗传特性、结构特性等具有一定理论意义和实践价值。