间接ELISA与中和试验检测O型FMDV疫苗免疫猪血清抗体的比较研究

血清中和抗体滴度的高低,体现了血清对病毒感染的中和能力,是评价疫苗免疫效果的重要指标。对国内3个大型猪场共120头猪的血清样品分别进行O型口蹄疫病毒ELISA和病毒中和试验,并分别比较两种方法的符合率和阳性检出率。结果表明,两种方法的阳性符合率和阴性符合率分别为77.3%和72.2%,总符合率为75%,均能有效检测猪血清中的口蹄疫抗体水平,但是采用间接ELISA检测血清抗体,存在一定比例的假阳性或假阴性。病毒中和试验更适合进行口蹄疫血清学的检测。

携带FMDVDNA疫苗重组减毒沙门氏菌的构建及其安全性和稳定性研究

为探讨携带FMDV DNA疫苗重组沙门氏菌口服免疫可行性,PCR扩增O型FMDV主要抗原基因VP1,并连接到真核表达载体p IRES,将构建的质粒p IRES-VP1体外转染BHK-21细胞,间接免疫荧光检测VP1基因的表达。通过氯化钙转化法将重组质粒p IRES-VP1转入减毒鼠伤寒沙门氏菌2266,构建2266(p IRES-VP1)重组菌,并以108、109、1010CFU的剂量口服免疫小鼠,2周后以相同剂量加强免疫,以研究重组菌在小鼠体内的稳定性及安全性,并通过将重组菌进行体外传代,研究重组质粒在体外的稳定性。研究结果表明:108、109CFU剂量免疫小鼠成活率为100%,1010CFU剂量口服小鼠出现扎堆现象,且行动迟缓。重组菌体外连传8代以及免疫小鼠后从脾脏和肝脏分离鉴定表明,重组菌2266(p IRES-VP1)在体内和体外均具有较好的安全性和稳定性。

A型口蹄疫VP1基因的原核表达及纯化

为了研究A型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白的免疫原性,试验采用PCR方法从口蹄疫阳性质粒p MD-18-P1中扩增得到目的基因VP1,与原核表达载体p ET-28a连接,构建重组质粒p ET-28a-VP1,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,筛选的阳性菌落用IPTG诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,通过Western-blot分析蛋白的免疫原性,并用镍亲和树脂纯化鉴定后的重组蛋白。结果表明:重组质粒p ET-28a-VP1经PCR及酶切鉴定证明构建正确;重组质粒能够在大肠杆菌中大量表达,表达产物的分子质量大小约为26 ku,且能被口蹄疫阳性血清识别;镍亲和树脂纯化的蛋白条带单一。说明该蛋白具有免疫学活性,且纯度较高。