RGD基序邻近氨基酸突变对口蹄疫病毒O/JC/2010株毒力的影响

为了研究RGD基序邻近氨基酸位点对口蹄疫病毒毒力的影响,利用O/JC/2010株病毒的基因组全长cDNA分子克隆,置换O/HN/93株病毒的VP1基因,拯救获得了1株嵌合病毒(pBlue-HJ);除此之外,在O/JC/2010VP1的3个氨基酸位点进行突变P142T、A152D、Q153P,分为4组,拯救出4株突变病毒:pBlue-HJ(142)、pBlue-HJ(142+152)、pBlue-HJ(152+153)、pBlue-HJ(142+152+153)。比较这5株病毒的LD50和TCID50特性,发现P142T、A152D可以增强口蹄疫病毒对BHK-21细胞和乳鼠的致病力,而Q153P则相反。该试验证明RGD基序附近的非保守氨基酸位点对口蹄疫病毒的毒力存在影响,为进一步阐明口蹄疫病毒的分子致病机制奠定了基础。

应用活体骨髓瘤细胞制备单克隆抗体

目的:用活体骨髓瘤细胞SP2/0做融合提高融合率制备单克隆抗体,并与常规方法比较效果。方法:将SP2/0细胞打到8周龄的SPF级BALB/c小鼠皮下,待实体瘤生长到直径达2～3cm时无菌解剖取实体瘤,分离出骨髓瘤细胞进行融合。同时用培养基培养SP2/0细胞进行融合做比较,分两组进行。比较两种方法的融合率以及两种方法制备出来的单克隆抗体的相对亲和力。结果:做了6次融合,实体瘤融合组融合率为70.4%,常规法融合组44.6%,两种方法制备单抗的相对亲和力均达到1∶100000以上。结论:利用活体实体瘤细胞进行融合能明显提高细胞融合率。

Flotillin-1缺失突变体基因酵母双杂交诱饵载体的构建与鉴定

为了筛选朊蛋白(PrP)与Flotillin-1蛋白相互作用的分子区域,采用RT-PCR方法从牛脑组织中扩增出Flotillin-1基因片段,应用酵母双杂交技术构建Flotillin-1各缺失突变体的诱饵质粒载体pGBKT7-X,进行了酶切鉴定及序列分析,并验证了诱饵质粒载体对酵母细胞的自激活作用和毒性。结果显示,成功构建了诱饵载体pGBKT7-X,部分诱饵载体对报告基因无自激活作用,对酵母细胞无毒性;部分诱饵载体对报告基因有自激活作用,对酵母细胞无毒性。证明,部分重组诱饵载体可用于酵母双杂交系统寻找与PrP蛋白相互作用的分子区域。