实验室条件下长角血蜱甘肃株孤雌生殖种群的生物学特性

在实验室条件下，对我国北方长角血蜱甘肃株孤雌生殖种群的生活史进行了首次观察。研究发现，行孤雌生殖的长角血蜱为三宿主蜱；在兔体完成1个世代共需106～154d，饥饿期的幼蜱、若蜱与两性生殖的饥饿幼蜱、若蜱体重的差异不显著（P〉0．05），而饱血体重与两性生殖的长角血蜱种群饱血体重差异极显著（P〈0．01）；雌蜱饱血体重可达吸血前的108．46±19．72倍，与两性生殖的种群饱血体重差异亦极显著（P〈0．01）。雌蜱产卵量与饱食体重之间呈极显著正相关r=0．8970（P〈0．01）；生殖效率指数REI=6．76，生殖适合度指数RFI=6．29；蜱发育时间在不同季节无明显变化。

生物矿化的口蹄疫病毒样颗粒疫苗的免疫原性评价

生物矿化技术可以增强口蹄疫(foot-and-mouth,FMD)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)的耐热性,但并无试验数据支撑矿化FMD VLPs用于临床的可行性。本研究旨在评价矿化FMD VLPs疫苗在牛和猪上的免疫原性。用VLPs和矿化VLPs免疫猪,采用液相阻断ELISA(LPBE)检测猪血清中的特异性抗体滴度,并经酶联免疫斑点试验(ELISpot)检测免疫猪外周血淋巴细胞(PBLs)经体外刺激后分泌的特异性IFN-γ。用矿化A型VLPs、矿化O型VLPs、矿化的A型和O型二价VLPs分别免疫牛,采用LPBE、中和试验、夹心ELISA检测血清中的特异性抗体、中和抗体以及IL-4和IFN-γ的含量。结果显示,VLPs与矿化VLPs免疫猪的血清抗体水平无显著差异,相对于VLPs,矿化VLPs免疫猪的PBLs分泌的IFN-γ水平高于VLPs免疫猪(P<0.05);3种疫苗免疫牛血清中IL-4和IFN-γ水平均高于PBS组,矿化二价疫苗与相应的矿化单价疫苗免疫牛的血清特异性抗体和中和抗体效价均无显著差异。综上所述,矿化VLPs对牛和猪均具有良好的免疫原性,不同血清型的矿化VLPs可以联合使用并且矿化壳层可增强VLPs诱导细胞免疫应答的能力。

口蹄疫病毒前导蛋白的分子生物学研究进展

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)编码的前导蛋白,不仅是一个重要的蛋白酶,而且对于病毒来说是一个重要的毒力因子,其能够作用于宿主细胞的特异性蛋白,抵抗宿主细胞所产生的抗病毒效应。本文章简述了口蹄疫病毒前导蛋白酶的基本特性,例如前导蛋白的基因结构与病毒复制的关系,前导蛋白酶活性的具体特点,以及前导蛋白影响病毒毒力的分子机制。

兰州市宠物猫隐孢子虫流行情况调查及分子生物学鉴定

为探究兰州市宠物猫隐孢子虫的感染情况,采集兰州市五大主城区宠物猫粪便样品共计655份,提取DNA,采用套式PCR扩增结合测序的方法进行基因分型并构建遗传关系树。兰州市宠物猫隐孢子虫的感染率为3.97%(26/655),测序鉴定发现均为猫隐孢子虫(Cryptosporidium felis)。统计学分析结果显示,兰州市宠物猫隐孢子虫的感染率与品种、季节及样品来源显著相关(P<0.05)。结果表明,兰州市宠物猫携带隐孢子虫且存在传播给人的风险,研究结果为预防兰州地区人、猫感染隐孢子虫提供一定的依据。

环形泰勒虫亚端粒编码可变分泌蛋白家族部分基因的研究进展

环形泰勒虫作为一种转化型泰勒虫,可感染牛单核巨噬细胞,并使其发生转化。目前,仅知环形泰勒虫通过劫持宿主细胞信号通路完成转化,但其转化机制尚未阐明。环形泰勒虫亚端粒编码可变分泌蛋白(SVSP)家族作为环形泰勒虫基因组的最大多基因家族,其在虫体-宿主相互作用中的功能尚不清楚。因此,本文通过对环形泰勒虫SVSP家族中部分基因的结构、表达特征、与宿主相互作用和可能发挥的功能进行总结,以期为环形泰勒虫-宿主相互作用机制和致病机理研究提供思路,同时也为癌症基础生物学研究提供借鉴。

屎肠球菌FDT2的分离鉴定及抑菌特性研究

【目的】从牦牛粪便中分离和鉴定屎肠球菌并进行体外抑菌特性研究,以期筛选出具有优良抑菌特性的益生菌。【方法】用MRS培养基从青海省健康牦牛粪便中分离肠球菌,结合形态学和分子生物学鉴定后进行抑菌性研究。通过发酵过滤分离菌株上清液,采用打孔法观察其对应的抑菌效果,通过改变pH及加入过氧化氢酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶等方法来分析其抑菌物质,并探究温度和pH对菌株发酵上清液的影响。【结果】结合形态学及系统进化树分析表明,分离的2株菌(FDT2和D2)均为屎肠球菌。抑菌试验结果表明,屎肠球菌FDT2对5株致病菌均有抑制作用,其中对产肠毒素性大肠杆菌K88和大肠杆菌ATCC 43888的抑菌性最强,而屎肠球菌D2对5株致病菌均无明显抑菌作用。通过排酸试验证明,屎肠球菌FDT2发酵上清液中起抑菌作用的不是酸性物质;通过加入过氧化氢酶试验证明了抑菌物质中有过氧化氢存在,且发挥部分的抑菌作用;加入胃蛋白酶和胰蛋白酶后其抑菌圈直径极显著低于对照组(P<0.01),表明抑菌物质中包含细菌素,且在抑菌过程中发挥重要作用。随着温度的逐渐升高,屎肠球菌FDT2的抑菌能力有所降低,在100℃下仍有抑菌性,表明其具有较强的热稳定性。随着pH的升高,屎肠球菌FDT2的抑菌活性逐渐下降,说明细菌素在酸性环境下活性较强。【结论】试验共分离到2株菌,其中屎肠球菌FDT2具有良好的抑菌特性,能分泌细菌素等抑菌物质,有必要对其深入研究。

羊口疮病毒基因组结构及重要基因功能研究进展

羊口疮是由羊口疮病毒(orf virus, ORFV)引起的一种人畜共患疾病,具有接触性、嗜上皮性和自限性的特征,该疾病在全球范围内广泛流行,严重影响公共卫生,对养羊业也造成不可忽视的经济损失。本文主要综述了国内外在羊口疮病原学、基因组结构以及功能基因等方面的研究进展,旨在为相关学者提供研究参考。通过对病毒基因组及其功能基因的深入解析,不仅有助于深入理解病毒的致病机理和宿主的互作机制,同时也为疫苗的研发提供理论依据。

2022年达州市家畜O型口蹄疫免疫抗体监测与分析

为准确掌握2022年达州市家畜O型口蹄疫(Foot-and-mouth disease, FMD)免疫效果,从辖区180个场(点)随机采集猪、牛和羊血清2 879份,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行O型FMD免疫抗体检测。结果显示,家畜O型FMD免疫抗体场(点)阳性率为88.89%,样品阳性率为88.78%,均达到农业农村部规定标准。在不同种类家畜方面,牛场(点)阳性率和样品阳性率均最高,分别为93.94%和93.41%;在场(点)类型方面,屠宰环节的场(点)阳性率显著低于养殖环节(P<0.05),规模场(存栏量≥500头/只)的场(点)阳性率、样品阳性率均高于适度规模场(存栏量<500头/只)和散养户;在不同区域方面,通川区场(点)阳性率和样品阳性率均最高,渠县最低;在不同季节方面,场(点)阳性率最高为夏季(92.31%),而样品阳性率最高为冬季(90.76%);从不同生长阶段来看,种畜场(点)阳性率和样品阳性率均最高,分别为96.72%和92.62%。监测结果表明,达州市家畜O型FMD免疫效果较好,建立了有效的免疫保护屏障,可为进一步做好FMD科学防控提供数据参考。

生物安全三级实验室空调系统联动调试案例浅析

生物安全三级实验室的空调系统是影响风量、换气次数和压差三大设计参数的关键性要素。与洁净室的空调系统相比,其不仅控制洁净度级别与温湿度,而且更侧重于管理负压梯度与向内定向气流。总结了生物安全三级实验室空调系统联动调试的方案设计与步骤(尤其是风量和压差),并讨论了送排风方式、风量计算与控制、负压梯度控制、送排风机变频转换,压力梯度动态控制措施等。

生物安全三级实验室通风空调系统联动调试的工程探讨

生物安全三级实验室的通风空调系统是影响风量、压差和换气次数三大设计参数的关键性要素。与洁净室的通风空调系统相比,其不仅控制洁净度级别与温湿度,而且更侧重于管理负压梯度与向内定向气流。总结了生物安全三级实验室通风空调系统联动调试的各实际工程问题——通风空调系统的分区运行和分时运行(如实验、消毒、值班、停机)、送排风机的冗余设置、局部排风设备的连锁控制、工况转换的功能验证。

口蹄疫病毒结构蛋白P1-2A及蛋白酶3C基因的转基因番茄对豚鼠免疫反应的初步研究

构建了O型口蹄疫病毒China99株结构蛋白P1-2A、非结构蛋白3C以及部分2B基因（P1-2X3C）的植物双元表达载体pBin438／P1-2X3C，通过农杆菌介导法转化番茄子叶，经卡那霉素抗性筛选，获得40余株抗性植株，对得到的抗性植株进行分子生物学检测，65％的再生植株PCR检测阳性；RT-PIER结果证实P1-2X3C基因在转基因番茄中能够有效转录；ELISA和Western blot检测表明转基因植株中表达的目的蛋白具有免疫反应性。转基因番茄叶片蛋白粗提液经肌肉途径免疫豚鼠，于第3次免疫后28d用100ID50／0．2mL的同源强毒攻击，结果表明口蹄疫病毒P1—2X3C基因的转基因番茄表达产物具有良好的免疫原性，豚鼠3免后血清效价可达1：64～1：128，攻毒后两组免疫豚鼠保护率分别达3／5和5／5。

乳牛衣原体性流产的病原鉴定及免疫原性研究

对采自甘肃、陕西和宁夏奶牛场的发生不明原因流产乳牛病料进行了间接血凝试验(IHA)、PCR、病原分离鉴定和MOMP基因检测,证实病原为鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci)。对分离株SX5和NX进行毒力稳定性和免疫原性测定,用鸡胚连传20代,SX5和NX株的毒力比较稳定,毒力效价分别为10-11ELD50和10-10ELD50;用这2株菌对小鼠和牛做免疫效力试验,结果显示,免疫鼠5/5和5/5保护,对照鼠0/5保护;免疫牛3/3和3/3保护,对照牛0/3保护。表明,SX5和NX株具有良好的免疫原性,可以作为疫苗研制的候选菌株。

口蹄疫病毒的抗原结构学的研究进展

口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus,FMDV）属于小RNA病毒科口蹄疫病毒属,完整的病毒粒子由衣壳包裹着单股正链RNA构成。FMDV基因组全长约为8.5 kb,主要分为5＇端非编码区、编码区、3＇端非编码区和多聚腺苷酸（poly（A））。5＇端非编码区的5端共价连接病毒自身编码的非结构蛋白（VPg）,而且还包含有S-片段、

弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能及免疫原性研究的新进展

刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)可引起严重的人兽共患弓形虫病,给全世界经济造成巨大的损失,给公共卫生安全带来巨大的隐患。致密颗粒(dense granule)分泌的致密颗粒蛋白(dense granule proteins,GRAs)参与调节纳虫泡(parasitophorous vacuole,PV)及纳虫泡膜(parasitophorous vacuole membrane,PVM)的形成并能维持其结构稳定性,部分GRAs可参与宿主细胞的转录。近几年来,不断发现了多种新的GRA蛋白家族新成员,并随着对该家族成员研究的逐步深入,发现GRAs是研制抗弓形虫疫苗的候选分子之一。本文综述了弓形虫致密颗粒蛋白的生物学功能和免疫原性研究的新进展,旨在为研究弓形虫致病机理和研发新的抗弓形虫疫苗提供思路。

6种鸡艾美耳球虫兰州株的致病性研究

在试验条件下,测定了鸡艾美耳球虫兰州株的毒力,为进行鸡球虫病疫苗免疫和药物防治效果评价试验等研究提供攻虫剂量的选择依据。试验设空白对照组(NC)、不同剂量感染组1组～8组,共9个组,每组20只鸡。结果显示:(1)NC组、第1组～第7组(第8组全部死亡)相对增重率依次为100%、77.23%、77.02%、76.42%、72.86%、63.91%、67.19%和42.06%,其中NC组相对增重率极显著高于所有感染组(p<0.01);第1组和第2组显著高于第5组和第6组(p<0.05),极显著高于第7组间(p<0.01);第7组极显著低于其他试验组(p<0.01)。(2)空白对照组、第1组～第7组各组料肉比依次为2.01、2.21、2.24、2.29、2.33、2.78、2.94和4.06,呈现出剂量依赖关系,其中第7组极显著高于其他各组(p<0.01);第6组和第5组显著大于NC组和第1组～第5组(p<0.05)。(3)攻虫后第8d,每组剖检5只鸡,各肠段平均病变记分各组依次为0、1.79、2.33、2.54、2.63、2.5、2.67和2.8。(4)感染后排卵囊高峰期间,各组平均每克粪便中卵囊数(OPG)值分别为0、3.05×104、2.35×104、32.20×104、62.23×104、60.45×104、103.51×104和150.11×104(第8组除外)。(5)各组死亡率依次为0、5.0%、5.0%、15%、25%、40.0%、45.0%、95%和100%。结果表明:本试验所选用虫株均具有较强的毒力,每只鸡感染6个虫种每个虫种1×104个孢子化卵囊时,感染鸡生长严重受阻;感染剂量为6个虫种每个虫种2×105/只时,半数感染鸡死亡;6个虫种每个虫种3×105/只的感染剂量可导致全部感染鸡死亡,因此,攻虫试验时选择6个虫种每个虫种1×104/只～1×105/只的剂量为宜。

芹菜素镧配合物的结构表征及生物活性研究

以芹菜素和硝酸镧为原料首次合成芹菜素镧配合物,通过元素分析、摩尔电导、红外光谱、热差分析、核磁共振氢谱来分析测定配合物的组成和结构,并对配合物进行了清除超氧自由基(O-·2)和羟自由基(·OH)的研究以及对宫颈癌细胞Hela的抗肿瘤活性的研究。结果表明,配合物组成为:La(C15H9O5)2NO3·1.5H2O,其具有较强的抗氧化活性和抗宫颈癌细胞Hela活性。

NF-κB免疫生物学作用的研究进展

25年前首次发现NF-κB,其是免疫系统中诱导基因表达的重要调节因子,在免疫系统的发育和功能中发挥着重要的生物学作用。固有免疫和适应性免疫,免疫系统中各组织和细胞的发生和发育等过程都受转录因子NF-κB家族的调控。尽管有关NF-κB研究已经很成熟,但仍有许多新的重大发现。综述此领域的新的研究进展,从而为NF-κB在免疫生物学中的应用提供更广阔的视角。

口蹄疫病毒反向遗传学研究进展

反向遗传学操作技术在口蹄疫病毒(FMDV)病原学基础研究领域的应用,使得人们能够在基因组整体水平上研究病毒基因的功能。得益于反向遗传学系统的不断完善和发展,目前人们对FMDV分子病原学也有了更加深入的认识和理解。本文结合实验室在FMDV反向遗传学方向上所开展的探索性研究工作,综述了国内外利用反向遗传学操作技术在研究FMDV分子致病机制、病毒毒力与变异的关系、病毒复制的影响因素、新型FMD基因疫苗的研制等领域所取得的进展,展望FMDV反向遗传学研究新动向。

抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性分析

用灭活O型口蹄疫病毒为抗原免疫BALB/c小鼠4次后,取致敏的脾B淋巴细胞和SP2/0小鼠骨髓瘤细胞进行融合,在HAT选择培养基中培养2周,经间接ELISA法筛选,最终获得了3株抗O型FMDV的阳性杂交瘤细胞株,命名为2F1、2G7和6H4。血清学试验证明该McAbs能与FMDV抗原结合,具有高度特异性。