口蹄疫病毒前导蛋白的分子生物学研究进展

口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)编码的前导蛋白,不仅是一个重要的蛋白酶,而且对于病毒来说是一个重要的毒力因子,其能够作用于宿主细胞的特异性蛋白,抵抗宿主细胞所产生的抗病毒效应。本文章简述了口蹄疫病毒前导蛋白酶的基本特性,例如前导蛋白的基因结构与病毒复制的关系,前导蛋白酶活性的具体特点,以及前导蛋白影响病毒毒力的分子机制。

NF-κB免疫生物学作用的研究进展

25年前首次发现NF-κB,其是免疫系统中诱导基因表达的重要调节因子,在免疫系统的发育和功能中发挥着重要的生物学作用。固有免疫和适应性免疫,免疫系统中各组织和细胞的发生和发育等过程都受转录因子NF-κB家族的调控。尽管有关NF-κB研究已经很成熟,但仍有许多新的重大发现。综述此领域的新的研究进展,从而为NF-κB在免疫生物学中的应用提供更广阔的视角。

芹菜素镧配合物的结构表征及生物活性研究

以芹菜素和硝酸镧为原料首次合成芹菜素镧配合物,通过元素分析、摩尔电导、红外光谱、热差分析、核磁共振氢谱来分析测定配合物的组成和结构,并对配合物进行了清除超氧自由基(O-·2)和羟自由基(·OH)的研究以及对宫颈癌细胞Hela的抗肿瘤活性的研究。结果表明,配合物组成为:La(C15H9O5)2NO3·1.5H2O,其具有较强的抗氧化活性和抗宫颈癌细胞Hela活性。

口蹄疫病毒反向遗传学研究进展

反向遗传学操作技术在口蹄疫病毒(FMDV)病原学基础研究领域的应用,使得人们能够在基因组整体水平上研究病毒基因的功能。得益于反向遗传学系统的不断完善和发展,目前人们对FMDV分子病原学也有了更加深入的认识和理解。本文结合实验室在FMDV反向遗传学方向上所开展的探索性研究工作,综述了国内外利用反向遗传学操作技术在研究FMDV分子致病机制、病毒毒力与变异的关系、病毒复制的影响因素、新型FMD基因疫苗的研制等领域所取得的进展,展望FMDV反向遗传学研究新动向。

猪RIG-I真核表达载体的构建及其抗口蹄疫病毒作用研究

为研究模式识别受体分子RIG-I是否具有抑制口蹄疫病毒(FMDV)复制的作用,本研究从猪的PK15细胞中提取RNA,通过分段扩增与融合PCR的方法,扩增猪的RIG-I的完整CDS序列,进一步构建猪RIG-I的真核表达质粒。通过Western blotting和间接免疫荧光试验对构建的真核表达质粒进行表达验证,证明其成功表达,同时证明猪RIG-I蛋白定位于细胞的细胞质中。感染试验发现FMDV能够诱导细胞内RIG-I的转录上调,这表明两者间存在着重要联系。过表达试验证实RIG-I具有抑制FMDV复制的作用,而下调表达RIG-I可以促进FMDV的复制,这表明RIG-I在机体抗口蹄疫病毒感染过程中发挥着重要作用。本研究的开展,为进一步探索RIG-I抗口蹄疫病毒的分子机制提供了理论支持;为口蹄疫病毒感染过程中,天然免疫系统抗病毒机制研究奠定了基础。

干扰素作用机制及其在抗口蹄疫病毒中的应用研究进展

干扰素(interferon,IFN)是人和动物细胞受到适宜刺激产生的一种微量的、具有高度生物学活性的糖蛋白,是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤、抗多发性硬化、抑制细胞增长和免疫调节作用的细胞因子。自20世纪50年代末发现干扰素以来,相关研究取得了巨大进展。文章综述了干扰素的抗病毒机制及其在抗口蹄疫病毒中的应用进展。

南非2型口蹄疫病毒结构蛋白抗原表位研究进展

口蹄疫病毒(FMDV)感染会引起偶蹄动物发生口蹄疫(FMD),产生急性系统性传染性水疱。其分为7个血清型,包括A、O、C型,亚州1型(Asia 1)及南非1、2、3型(SAT1、2、3)。其中,SAT FMDV具有明显的地域性,主要集中在撒哈拉沙漠以南,侵害水牛及野生动物,容易发生抗原变异,疫苗交叉保护效果低。近几年的报告表明,中东地区暴发了SAT2FMDV,跨越了长久以来的地域界限,也对我国的养殖业造成了潜在的威胁。我国在SAT FMDV方面的研究较少,有必要建立特异性和灵敏性高的SAT FMDV监测方法作为战略储备,以防其跨境传播。论文主要介绍了SAT2FMDV结构蛋白抗原表位国内外研究进展,以期为今后研发有关SAT2FMDV战略储备表位疫苗提供理论依据。

病毒样颗粒作为口蹄疫病毒抗原表位载体的研究进展

病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)不含有病毒核酸,不具有自我复制的能力,但拥有与完整病毒粒子相似的空间结构和免疫原性,可以作为口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus,FMDV)抗原表位的载体,将其展示在它的表面。主要介绍了作为FMDV抗原表位的VLPs载体:FMDV-VLPs、HBc-VLPs、PCV2-VLPs和PPV-VLPs,并阐述了VLPs在几种表达系统中的组装现状,以期为今后有关FMD的VLPs研究提供参考。

荧光光谱法和分子模拟技术研究考马斯亮蓝G-250与牛血清白蛋白的相互作用

采用多种光谱技术结合圆二色谱技术研究了考马斯亮蓝G-250(CBBG-250)相互作用于牛血清白蛋白(BSA),探究了两者之间的作用机理。荧光光谱结果表明BSA与CBBG-250结合形式是静态猝灭,随CBBG-250浓度增加,其形成常数随温度逐渐减小,结合比为1∶1,根据Stern-Volmer曲线计算焓变值(ΔH)和熵变值(ΔS)分别为-4.38kJ·mol^(-1)和-6.16J·mol^(-1)·K^(-1),均小于零,证明该过程是一个自发过程。傅里叶红外光谱测定结果表明CBBG-250的加入引起BSA结构的变化,随着CBBG-250溶液浓度的增加,BSA中色氨酸微环境极性被改变,在1 600~1 700cm^(-1)(酰胺带Ⅰ)和1 600~1 500cm^(-1)(酰胺带Ⅱ)处的特征吸收带蓝移。其中1 650cm^(-1)移动至1 710cm^(-1),1 544cm^(-1)移动到1 573cm^(-1),显示BSAα-螺旋(1 650~1 658cm^(-1))和β-折叠(1 620~1 640cm^(-1),1 675cm^(-1))结构发生变化,且α-螺旋含量比结合前有所降低。圆二色谱分析结果表明,两者间通过氢键和范德华力为主的作用力使得BSA二级结构发生变化,α-螺旋含量由42.15%下降至1.27%,该结果进一步被分子建模对接技术证明。

我国O型Mya-98口蹄疫病毒流行情况与毒株分析

2010年年初，O型口蹄疫Mya-98毒株在我国引起疫情，随后在13个省区相继发生25次疫情。同时，该毒株也在日本、韩国、朝鲜等国家和地区报道流行，各国政府为控制疫情，大量扑杀染疫动物，引起了全球的广泛关注。为追寻我国O型Mya-98毒株的来源、归属地位和国内流行情况，收集我国2010年～2012年年底Mya-98口蹄疫流行毒株，对其进行毒株分离鉴定和VPl基因序列测定，并对其进行比对和分析。结果显示：我国O型口蹄疫Mya-98毒株源于东南亚国家，当前优势流行毒株与东南亚国家流行毒株等毒株同源性95％以上，属同-毒株；国内Mya-98毒株随流行历史不同趋向于形成3个不同的进化分支，不同分支之间毒株差异较大，最大差异率可达15％；我国Mya-98毒株宿主适应范围发生变化，由最初猪、牛、羊均可感染到2010年之后主要感染猪。

札幌病毒研究进展

札幌病毒(Sapovirus)可感染人和动物,引起急性病毒性胃肠炎。随着分子生物学、病毒细胞培养和动物模型研究方面的进展,不同类群札幌病毒全基因组测序完成、病毒体外增殖和衣壳蛋白体外表达,从而对该病毒的特性有了一些新的认识。本文从札幌病毒的基因组结构与功能、流行病学、细胞培养、检测方法和疫苗发展5个方面入手,系统介绍了该病毒国内外的研究现状以及存在的问题,其中流行病学及其检测技术的研究成为研究的热点。本文还对札幌病毒分子进化、疫苗研制和病毒的传播等提出了新的观点。

口蹄疫病毒通用型金标检测试纸条诊断方法的建立

为了兽医基层工作人员能够快速诊断口蹄疫病原,与其他传染病做鉴别诊断,有必要建立一种快速、简便区分它们的胶体金免疫层析方法。本试验采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金。将纯化的Asia 1/China/05流行毒株12S偶联抗原的兔抗体制备免疫胶体金,喷免疫胶体金于玻璃纤维制成金标垫。将纯化A/AF72流行株12S偶联抗原的兔抗体和适量O/China/99流行毒株12S偶联抗原的兔抗体混合固定于硝酸纤维素膜上作为检测带。将羊抗兔抗体固定在硝酸纤维素膜的不同区域作为质控带,并组装成口蹄疫病毒通用型金标检测试纸条。利用其对阴性参考样品、各型阳性参考样品、已知背景的田间样品进行检测。灵敏度试验结果显示:建立的试纸条方法敏感性高、可检测到病毒最低含量为0.98×104 LD50;特异性试验显示:在检测与口蹄疫临床症状相似病原———猪水泡病病毒(SVDV)、水泡性口炎(VS)、水泡性疹(VES)抗原时无交叉反应;重复性试验显示:不同批次间、同一批次内检测结果完全一致;符合性试验显示:检测国家口蹄疫参考实验室已确定口蹄疫病毒血清型的样品90份,阳性符合率、阴性符合率分别为96.70%、100%。本试验研发的口蹄疫病毒通用型金标检测试纸条具有很好的灵敏度、特异性、重复性和符合性,适合国内流行的口蹄疫病原的鉴别诊断。

痘病毒入侵融合复合物的研究进展

对于许多病毒而言,一种或两种蛋白就可以完成病毒与宿主细胞的结合,膜融合以及入侵等生物过程。然而,痘病毒却需要利用许多种蛋白完成这一生物过程,这可能与其能感染多种细胞有关联。已鉴定的9种入侵融合复合体蛋白和2种入侵融合复合体相关蛋白都属于非糖基化的跨膜蛋白,这些蛋白的大小在4ku^43ku之间,并且它们之间相互作用可以形成入侵融合复合体(EFC)。这些蛋白在痘病毒中都十分的保守,并且拥有一些共同的性质,这使得它们拥有相似的入侵机制。论文就已鉴定的痘苗病毒的11种入侵融合复合体蛋白的性质、结构、作用以及相互关系做了综述,另外还对可能的入侵融合复合体蛋白进行预测,为痘病毒入侵宿主的机理提供参考。

南非2型口蹄疫病毒VP1基因的核苷酸及其氨基酸序列分析

VP1基因的遗传衍化关系是口蹄疫病毒分型的依据,而且许多重要的抗原位点也都位于VP1蛋白上。为了对南非2型口蹄疫病毒(SAT2-FMDV)VP1的编码基因序列及其氨基酸序列进行分析,为南非2型口蹄疫的诊断及疫苗设计提供理论基础,试验从NCBI下载大量的南非1/2/3型口蹄疫病毒(SAT1/2/3-FMDV)的1D2A2B基因片段,通过序列分析选择相似性较低的序列代表SAT1/2/3,将选中的代表序列连接于p UC57载体上进行合成,再对合成的含目的序列的穿刺菌进行划板、挑单克隆、摇菌、提质粒,得到重组质粒初步进行酶切鉴定后进行测序,测序正确后采用DNAStar软件包对这些合成序列进行分析。结果表明:SAT2-FMDV VP1的编码基因核苷酸序列变异度较大;虽然SAT2口蹄疫病毒VP1蛋白上主要抗原位点位置与其他血清型的差异性并不大,但是关键氨基酸已发生变化。

T细胞受体触发机制的研究进展

T细胞受体(TCR)触发是TCR与配体结合诱导信号进入细胞膜,引发TCR识别抗原过程。关于TCR的触发机制有多种说法,现有3种主要识别触发机制包括:聚集,即在TCR同MHC/抗原肽复合体结合时因有关分子的物理性聚集而被触发;构象改变,在TCR同MHC/抗原肽复合体结合时引起分子结构的改变而被触发;分散与再分布,TCR同MHC/抗原肽复合体结合时引起的TCR-CD3复合物与其他细胞膜相关蛋白的分散与再分布。本文中将综述每一种机制的研究进展,推测T细胞识别过程中3种机制均涉及。

免疫佐剂研究进展

佐剂是能够增强免疫应答或改变免疫应答类型的物质,本身可以具有免疫原性,也可以没有免疫原性。佐剂种类很多,如氢氧化铝佐剂、细菌佐剂、脂多糖、细胞因子等。综述了氢氧化铝佐剂、多糖佐剂、细胞因子佐剂以及一些新型佐剂的研究进展,旨在为今后开展疫苗和佐剂的相关研究提供参考。

B细胞抗原受体信号转导途径研究进展

B细胞抗原受体（B cell antigen receptor,BCR）是由膜免疫球蛋白（mIg）和Igα/Igβ组成的异源寡聚复合体。前者识别抗原,后者转导mIg接受抗原刺激信号。BCR和一些辅助受体及辅佐分子共同完成对抗原的识别及信号转导。BCR信号转导与细胞增殖、分化,生物个体的生长、发育、遗传、疾病、衰老乃至死亡息息相关^[1]。