分子生物学技术在弓形虫病诊断中应用的研究进展

综述了限制性片段长度多态性技术(RFLP)在刚地弓形虫虫株分类方面的应用情况,从PCR、DNA探针技术和基因重组技术方面介绍了用于检测弓形虫DNA的分子生物学技术的研究进展,叙述了编码弓形虫主要蛋白基因的克隆及其表达产物在ELISA诊断中的应用。

寄生虫半胱氨酸蛋白酶研究进展

半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease,CP)是一类在酶的活性中心含有半胱氨酸残基的蛋白水解酶。CP属于木瓜蛋白酶家族,广泛分布于从病毒至脊椎动物的生物体中。对人体半胱氨酸蛋白酶的研究主要集中在细胞凋亡分子机制和恶性肿瘤的基因诊断与治疗等方面。而对寄生虫半胱氨酸蛋白酶研究的内容则更为广泛,其中包含半胱氨酸蛋白酶在寄生虫免疫逃避、毒力、组织细胞入侵、蜕皮及包囊形成、孵化等作用的研究。研究发现,该酶具有较好的种特异性,既可作为寄生虫病诊断抗原和疫苗候选分子,同时,也是药物治疗寄生虫病的靶标。因此,论文重点对寄生虫半胱氨酸蛋白酶近年的研究进展做一综述。

寄生虫蛋白酶体的研究进展

近年来,蛋白酶体的分子组成、亚基、生化机理、胞内功能等方面的研究受到广泛关注,发展迅速。蛋白酶体的主要生物学功能包括:降解细胞内蛋白质、调节细胞周期、促进细胞凋亡、调节转录因子、增加抗原提呈等。在寄生虫中,蛋白酶体不仅参与胞内寄生虫的生长发育调节,同时对宿主造成损伤,并可诱导宿主产生对其的免疫应答。对寄生虫蛋白酶体的研究有助于深入了解寄生虫的入侵机制,为寄生虫病的防治提供新思路。作者对蛋白酶体的结构、功能及寄生虫蛋白酶体的研究进展作一综述。

牛主要人兽共患寄生虫病的危害与防治

对寄生于牛体的人兽共患寄生虫病——日本血吸虫病、片形吸虫病、牛囊尾虫幼病、棘球虫幼病、脑多头虫幼病、隐孢子虫病、弓形虫病、牛住肉孢子虫病和旋毛虫病的主要病状及危害、预防措施与治疗方法进行了简要介绍。

动物寄生线虫遗传多样性的研究进展

动物寄生线虫分子遗传标记的发展对兽医寄生虫学中的基础和应用研究领域有着重要意义。通过对线虫种群遗传多样性的研究,不仅能够为抗药性等位基因的扩散提供理论依据,而且对线虫病防治策略的制定具有指导作用。因此,本文就分子遗传标记(RFLP、RAPD、PCR-SSCP、AFLP、SSR和线粒体DNA)在寄生线虫遗传多样性研究中的应用进行综述。

重组酶聚合酶扩增技术及其在寄生虫检测中的应用

重组酶聚合酶扩增技术（RPA）是以T4噬菌体体内核酸复制机制为原理，以多种蛋白及酶参与的一种新型核酸等温扩增技术，可在37--42qC条件下，20min内将核酸扩增至可检测水平。具有较高的敏感性和特异性，且操作简单，可在非实验室条件下实现对核酸的快速检测。自2006年问世后，已广泛应用于农业、食品安全、医学和转基因检测等多个领域。本文综述了RPA技术的研究进展及其在寄生虫检测中的应用。

甘肃省部分地区牛皮蝇蛆病的流行病学调查

为掌握牛皮蝇蛆病在甘肃地区的流行动态，2003～2005年在甘肃省玛曲县、天祝县、平凉市崆峒区的3个屠宰场剖检1827头牛。结果发现，这3个县（区）均有牛皮蝇蛆病的感染，其中，玛曲县、平凉市崆峒区的皮蝇2期幼虫在牛食管的寄生率以10月份为最高，分别为48．5％和7．8％。表明，药物防治的最佳时间为10月份。

国内莱姆病研究进展

莱姆病是由伯氏疏螺旋体引起的,由蜱传播的自然疫源性疾病,是新发现的人兽共患传染病,主要经蜱叮咬人、兽而传播。该病分布广泛,全世界至今已有五大洲的70多个国家报告发现了该病,而且发病区域仍在继续扩大,发病率呈现上升趋势。我国自从1986年调查发现东北林区人群中存在莱姆病的发生和流行以来,现已证实29个省(市、区)的人群中存在莱姆病的感染,并从病原学上证实其中至少有19个省(市、区)存在该病的自然疫源地,人群中有莱姆病的发生和流行。对动物宿主的调查证实,牛、马、羊、狗、鼠等均存在莱姆病感染,不同地区及不同种动物莱姆病感染存在较大差异。论文从莱姆病的病原分类、流行病学、传播途径、传染源和分子生物学等几方面阐述了莱姆病在中国的流行情况,为进一步了解莱姆病的流行及有效防控提供参考。

马梨形虫病诊断技术研究现状

近年来马梨形虫病流行呈上升趋势,对马属动物产业的发展造成了极大的危害。因此,建立一种实时有效的检测方法就显得尤为重要。病原学诊断法、免疫学诊断法、分子生物学诊断方法的相继建立,为马梨形虫病的早期诊断提供了必要的手段。近年来单克隆抗体技术,DNA重组技术的应用,为该病的诊断提供了新的方法。

小反刍兽疫病毒Nigeria75／1株F基因的克隆与原核表达

提取小反刍兽疫病毒(PPRV)疫苗株Nigeria 75/1的总RNA,用RT-PCR方法扩增F基因并克隆到pMD18-T载体中,以鉴定正确的质粒为模板克隆去掉N端信号肽和跨膜区的F基因(F-1)并亚克隆于原核表达载体pET-30a(+),得到重组质粒pET30-F-1,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析,同时将重组蛋白免疫SPF家兔制备抗体,进行间接免疫荧光检测并用ELISA测定抗体效价。结果显示,目的基因正确插入了表达载体,在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达,用重组蛋白免疫3次后,兔血清抗体达到较高水平,Western-blot分析说明表达产物能够与兔血清抗体发生特异性反应,间接免疫荧光试验显示重组蛋白免疫兔阳性血清能够识别PPRV Nigeria 75/1株全病毒抗原。表明,重组蛋白在原核表达系统内得到了高水平的表达,并且具有较好的反应原性。

柔嫩艾美耳球虫甘肃株抗药性的试验研究

用柔嫩艾美耳球虫甘肃株(E.tenella G S,E t G S)对15日龄雏鸡进行感染,以最适抗球虫活性百分率、抗球虫指数、相对卵囊产量和病变记分减少率为指标,进行综合评定,研究了该虫株对三九球痢灵、地克珠利、氯苯胍和地克珠利氯苯胍合剂等几种常用抗球虫药的敏感性。结果表明,该虫株对三九球痢灵有中度抗药性,对地克珠利和地克珠利氯苯胍合剂有轻度抗药性,对氯苯胍无抗药性。

甘肃榆中县奶牛球虫病流行病学调查与虫种鉴定

奶牛球虫病呈世界性分布,中国部分省市也有报道,但是甘肃省至今尚未有关于奶牛球虫病的相关调查。甘肃省榆中县是甘肃省奶牛主产区之一,为了解甘肃省榆中县奶牛球虫感染情况,对当地6个规模化奶牛养殖场1岁以内荷斯坦奶牛犊牛球虫感染情况进行了调查。试验采用显微镜下观察的方法检测了该地区的234份奶牛粪便样品,并对球虫阳性粪便进行重铬酸钾法孵化来鉴定球虫种类。结果发现,犊牛球虫总感染率达到46.15%,其中1-3月龄犊牛平均感染率为52.43%,4-6月龄犊牛平均感染率为37.50%,7-12月龄犊牛平均感染率为43.37%。经虫种鉴定,共发现7种艾美尔属球虫和1种等孢属球虫,7种艾美尔属球虫分别是牛艾美尔球虫（Eimeria bovis）、奥博艾美尔球虫（Eimeria auburnensis）、邱氏艾美尔球虫（Eimeria zuernii）、阿拉巴艾美尔球虫（Eimeria alabamensis）、亚球形艾美尔球虫（Eimeria subspherica）、椭圆艾美尔球虫（Eimeria ellipsoidalli）、加拿大艾美尔球虫（Eimeria canadensis）,其中牛艾美尔球虫、奥博艾美尔球虫、邱氏艾美尔球虫为优势种。本次调查结果表明,甘肃省榆中县奶牛球虫感染情况严重,应引起相关部门重视。

猫的弓形虫病研究进展

弓形虫是一种专性细胞内寄生性原虫,可以引起人兽共患的弓形虫病。该病呈世界性分布,严重威胁人类健康和畜牧业的发展。猫科动物是弓形虫唯一的终末宿主,在弓形虫的流行与传播中起重要作用。目前对猫弓形虫病致病机理的研究甚少,尚无有效的防治猫弓形虫病的方法。本文对猫弓形虫病的发现历史、流行现状、分子分型、肠内发育、疫苗和诊断研究、猫弓形虫病及弓形虫卵囊相关的组学研究等进行综述,为深入研究猫弓形虫病的致病机理,研制猫弓形虫病的疫苗或药物,开发猫弓形虫病的诊断方法提供新的思路。

麻疹病毒属病毒非结构蛋白结构及功能研究进展

麻疹病毒属在分类上属于副黏病毒科副黏病毒亚科,其成员包括麻疹病毒（Measles virus,MV）、犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）、牛瘟病毒（Rinderpest virus,RPV）、海豹瘟病毒（Phocine distemper virus,PDV）和小反刍兽疫病毒（Peste-des-petits-ruminants virus,PPRV）。

盾糙璃眼蜱传播的牛泰勒虫分离鉴定及生物学特性

自新疆伊宁地区黄牛体表采集的盾糙璃眼蜱饥饿或半饱血成虫,带回实验室感染除脾牛。经血涂片检查发现,于感染后第21天,病牛血液中出现一种以圆环形与卵圆形为主的泰勒虫。经形态学观察和18 S rRNA基因测序和进化关系分析证明,它们为环形泰勒虫。将此饱血成蜱经实验室饲喂条件下,孵化出的幼虫分别饲喂于牛与家兔两种不同的动物,结果在饱血若虫阶段所有的蜱均从两种动物体表脱落,不再叮咬,饥饿成蜱又更换另一宿主,证明其是二宿主蜱。

小反刍兽疫病毒P蛋白的表达、纯化及抗体的制备及初步应用

本文旨在对小反刍兽疫病毒P蛋白进行原核表达,并利用表达的蛋白制备抗血清,然后用于间接免疫荧光检测。将构建好的pET-30a(+)-P重组表达质粒转化大肠杆菌构建P蛋白的原核表达体系。重组菌经IPTG诱导,用SDS-PAGE电泳检测融合蛋白得到了表达。通过对表达条件的优化,确定了P蛋白在28℃、IPTG诱导浓度为0.2 mmol.μL-1的条件下诱导6 h,可溶性P蛋白表达量最高。利用镍柱亲和层析法纯化可溶性的P蛋白,然后以纯化的蛋白为抗原免疫小鼠,制备了多克隆抗体,其滴度最高可达1∶25 600,而且特异性好,表明获得了P蛋白的多克隆抗体。同时利用所制备的抗体对pcDNA3.1/P真核表达进行了间接免疫荧光检测。P蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达,并制备了特异性好、滴度高的抗血清,为研究P蛋白功能奠定了基础。

绵羊痘病毒甘肃流行株ORF121基因的克隆及序列分析

从甘肃景泰疑似羊痘绵羊的皮肤组织中提取基因组DNA,PCR扩增糖蛋白ORF121基因。序列分析表明,该基因由519个核苷酸组成,编码172个氨基酸,分子量为19.9 kua,序列中A+T含量占74.95%,G+C含量仅占25.05%。甘肃景泰株ORF121基因同绵羊痘病毒参考株之间的核苷酸同源性高达99%;与疙瘩皮肤病病毒和山羊痘病毒参考株之间的同源性分别为97%和95.6%。结构预测结果显示,ORF121蛋白具有两个N-糖基化位点和一个跨膜区,且具有极强的亲水性。以上结果表明,ORF121蛋白在不同的绵羊痘病毒流行株之间非常保守,具有潜在的疫苗或/和诊断价值。

绵羊痘病毒甘肃流行株糖蛋白基因orf118的克隆及序列分析

从甘肃景泰疑似羊痘患病绵羊的皮肤组织中提取基因组DNA,利用PCR技术,克隆糖蛋白orf118基因.比较分析表明,该基因由516个核苷酸组成,编码171个氨基酸,相对分子质量为19500,其碱基组成极不平衡,其中A+T含量占72.48%,G+C含量仅占27.52%.甘肃景泰株orf118基因同绵羊痘病毒TU-V02127株之间的核苷酸同源性最高达99.8%,氨基酸的同源性为100%;与疙瘩皮肤病病毒肯尼亚株和山羊痘病毒G20-LKV株之间的同源性分别为96.5%和94.8%.结构预测结果显示,orf118蛋白为分泌蛋白,具有2个N键连结糖基化位点和1个跨膜区.以上结果表明,orf118蛋白在不同的绵羊痘病毒流行株之间非常保守,具有潜在的疫苗和诊断价值.

边缘无浆体病诊断方法的研究进展

综述了边缘无浆体病的常规病原学诊断方法、血清学诊断方法和分子生物学检测方法的国内外研究现状和发展水平,并探讨了核酸探针、PCR和反向线状印迹杂交技术在边缘无浆体病诊断中的应用及研究进展。

羊痘病毒分子特征及检测方法研究进展

羊痘是以发热、全身性的皮肤损伤、痘疹和淋巴结病变为特征的一种传染性高、病死率高、分布广泛的烈性羊病毒病,是所有动物痘病毒中最为重要的一种,严重影响养羊业和国际贸易的发展。目前,国内外对羊痘的研究主要涉及病原学、诊断技术和基因工程疫苗等方面。