棘球蚴EG95重组蛋白研究进展

棘球蚴病是一种对人畜危害极为严重的人兽共患寄生虫病,严重威胁我国流行区农牧民身体健康和畜牧业的发展,对该病的预防迫在眉睫。EG95蛋白在细粒棘球蚴发育过程中必不可少、高度保守,是目前为止已发现的最具潜力的疫苗候选抗原之一。国内外学者在EG95重组抗原的构建、表达、应用等方面进行了大量的工作,本文对其进行综述。

我国包虫病的防治现状

棘球蚴病（又称包虫病）是由寄生于犬科动物的棘球属绦虫的幼虫——棘球蚴寄生在牛、羊、人等多种哺乳动物的脏器内而引起,是一类危害严重的人兽共患寄生虫病。

绦虫种的分类鉴定方法研究进展

绦虫(cestode)物种数目较多,大约有1 500多种,对人及动物危害严重的是绦虫的幼虫,可引起绦虫蚴病,其中猪囊虫病和包虫病是流行严重的人兽共患寄生虫病。本文将对绦虫种的鉴定方法研究进展、应用和发展方向做一简要综述。目前鉴定一个绦虫物种主要依据其形态学、生活史等传统分类学方法并结合分子分类学方法来进行。传统形态学方法不能对那些形态学上相似、但在遗传学方面却不同的绦虫加以鉴定。线粒体和核基因序列在物种鉴定方面的应用已经成为绦虫分类学的研究热点,构成绦虫的核酸条形码,为绦虫隐藏种的发现和新物种的界定,以及为绦虫病的准确诊断、分子流行病学调查、预防措施的制定等提供了重要依据。

多房棘球绦虫EM95蛋白的生物信息学分析

泡型棘球蚴病（alveolarechinococcosis，AE），又称泡型包虫病，是由多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis，Era）的幼虫引起的一种危害严重的人畜共患寄生虫病，可感染包括人在内的多种动物，呈世界性分布。目前该病呈现感染地区以及感染宿主扩增的趋势，在一些非流行区的国家和地区也首次出现有感染人的报道[1]，同时也有该寄生虫感染非特异性宿主的报道，从而间接增加人的感染[2]。

猪带绦虫10ku蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其初步应用

将猪带绦虫六钩蚴10 ku蛋白(TSO10)和囊尾蚴10 ku蛋白(CE10)的基因克隆到表达载体中,构建重组表达载体pGEX-4T-TSO10和pGEX-4T-CE10,经测序证明基因序列完全正确。重组表达载体转化大肠杆菌后诱导表达,用SDS-PAGE、Western-blot和薄层扫描检测表达产物。表达的目的蛋白纯化后用于血清样品ELISA检测。SDS-PAGE、Western-blot和薄层扫描检测结果表明,六钩蚴和囊尾蚴10 ku蛋白基因均能在大肠杆菌中成功表达,表达的融合蛋白的相对分子质量约为35 ku,并能被囊虫病人阳性血清所识别,具有反应原性,表达量分别占菌体蛋白总量的25%和30%。ELISA检测结果显示,10 ku蛋白可用于囊虫病的诊断。

野生动物棘球绦虫感染检测方法的研究进展

论述了棘球绦虫野生动物宿主的种类、分布与感染情况,介绍了剖检法、粪抗原-ELISA检测方法、分子生物学检测方法等棘球绦虫感染检测方法的研究进展,并提出了存在的问题及解决途径,为野生动物棘球绦虫(蚴)病的控制与诊断提供指导。

基于重组猪囊虫18ku抗原的间接ELISA方法的建立

利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从猪囊尾蚴中克隆到18 ku蛋白基因,将扩增产物与pGEM-TEasy载体连接后测序分析。将目的基因亚克隆至表达载体,构建重组质粒pGEX-CE18,经转化大肠杆菌BL21(DE3)后诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物。表达的目的蛋白纯化后作抗原建立检测猪囊虫抗体的重组蛋白间接ELISA方法。结果表明,18 ku蛋白基因在大肠杆菌中成功表达,表达产物约为35 ku的融合蛋白,并能被猪囊虫感染血清识别。经薄层扫描分析,表达量占菌体蛋白总量的28%。与商品化ELISA试剂盒平行检测178份阳性血清样品,二者的符合率为98.83%,说明建立的重组蛋白ELISA方法可用于猪囊虫病的诊断。

细粒棘球绦虫重组EG95抗原在绵羊绦虫蚴病血清抗体检测中的应用

为了分析评价细粒棘球绦虫重组蛋白EG95(rEG95)在血清抗体检测上的效果,以细粒棘球绦虫EG95重组质粒pGEM-EG95为模板,经PCR扩增后将目的片段亚克隆至pET-28a(+),构建重组表达载体pET-EG95,在大肠杆菌BL21中表达,SDS-PAGE分离和电洗脱纯化重组表达产物rEG95。建立重组蛋白间接ELISA方法,检测绵羊带绦虫蚴病血清抗体水平。结果表明,表达产物经SDS-PAGE测定分子质量为21ku左右。该蛋白可被棘球蚴病阳性血清特异性识别,表明该表达产物具有反应原性。应用该重组蛋白间接ELISA检测18份脑多头蚴、15份细颈囊尾蚴、20份棘球蚴感染绵羊血清,24份疫苗抗原rEG95免疫羊血清和来自棘球蚴病疫区的179份绵羊血清,其阳性检出率分别是66.67%、80.00%、100%、91.67%和58.2%,而14份健康羊血清反应为阴性,组间差异有一定统计学意义(P<0.05)。表明EG95蛋白可作为绵羊带绦虫蚴病共同保护性抗原和诊断抗原而加以应用。

弓形虫GJS株pcDNA3-MIC3核酸疫苗的研究

根据GenBank中MIC3基因序列设计1对引物,采用PCR技术从弓形虫GJS株基因组DNA中扩增微线体蛋白3(MIC3)基因片段,克隆到pMD18-T载体,经PCR、酶切及测序鉴定后,阳性重组质粒酶切并亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)后进行PCR、酶切及测序鉴定。重组质粒pcDNA3-MIC3肌肉注射免疫BALB/c小鼠,通过ELISA检测血清特异抗体;经腹腔攻击感染弓形虫GJS株速殖子,观察小鼠的生存时间。结果成功构建了pcD-NA3-MIC3质粒;免疫组小鼠血清检测到特异性抗体;攻击感染后免疫组小鼠平均存活时间较对照组明显延长。表明该核酸疫苗具有较好的免疫原性,能诱导小鼠产生良好的免疫保护作用。

弓形虫排泄分泌抗原研究的新进展

简要介绍了弓形虫排泄分泌抗原的制备及其组分,对近几年国内外排泄分泌抗原在免疫功能及应用方面的研究进展加以综述,并对其在疫苗研制上的成果和前景进行了探讨,旨在为弓形虫病疫苗的研制提供参考。

青海省高原鼠兔体内囊尾蚴分类学地位的初步研究

对从青海省久治县高原鼠兔体内发现的囊尾蚴新种进行了虫种的初步鉴定。利用捕鼠器在青海省久治县捕捉草原上的高原鼠兔,并现场进行解剖,对腹腔或胸腔内发现的囊尾蚴用400mL/L的绵羊胆汁溶液处理,使其头节完全暴露出来,然后用100mL/L福尔马林溶液进行固定,经苏木精-伊红染色,对头节的形态学进行显微观察。选取其中一条囊尾蚴提取基因组DNA,PCR扩增线粒体细胞色素氧化酶亚基1(cox1)基因,分别利用Neighbor-Joining和Maximum Likelihood方法进行分子系统发育分析。剖解显示,高原鼠兔对该种囊尾蚴的感染率为6.0%(3/50),3只鼠兔囊尾蚴的感染强度分别为4、13和28条;染色后观察发现,该囊尾蚴头节有两圈钩和4个吸盘。遗传进化研究分析表明,该种囊尾蚴具有独立的虫种分类地位,与豆状带绦虫具有较近的亲缘关系。综合形态学、中间宿主和系统发育分析结果,初步确定从青海省高原鼠兔体内发现的囊尾蚴为带属绦虫的一新种的幼虫,并建议将其命名为才氏囊尾蚴。