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狮棘球绦虫(Echinococcus felidis)生物学特性研究进展
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作者 刘聪暖 娄忠子 +3 位作者 李立 范彦雷 闫鸿斌 贾万忠 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期860-865,874,共7页
本文比较了狮棘球绦虫(Echinococcus felidis)线粒体cox1(细胞色素C氧化酶亚基1)和nad1(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1)基因片段序列,核基因编码基因elp(埃兹-根蛋白-膜突蛋白样蛋白)、ef1a(延伸因子1α)、pepck(磷酸烯醇式丙酮酸... 本文比较了狮棘球绦虫(Echinococcus felidis)线粒体cox1(细胞色素C氧化酶亚基1)和nad1(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位1)基因片段序列,核基因编码基因elp(埃兹-根蛋白-膜突蛋白样蛋白)、ef1a(延伸因子1α)、pepck(磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶)和pold(DNA聚合酶δ)序列,核糖体rRNA基因(ITS1和18SrRNA)序列,以及狮棘球绦虫与其它棘球绦虫之间的DNA序列的差异度,并简述了其吻钩皱褶明显的形态学特征和以独特的狮类为终末宿主的生物学特性。通过对狮棘球绦虫分子遗传标记特征、种地位的确立、种系发生、鉴定方法、宿主范围、地理分布、流行病学特征和未来研究方向的阐述,为从事该领域研究的学者和临床工作者提供了背景知识,并对棘球蚴病的临床流行病学调查和防治工作提供了依据。 展开更多
关键词 狮棘球绦虫 分类学 种系发生 生物学特性 分子遗传标记 流行病学
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棘球属绦虫分子种系发生研究进展 被引量:11
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作者 李立 娄忠子 +4 位作者 闫鸿斌 范彦雷 李建秋 殷宏 贾万忠 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1155-1162,共8页
棘球属绦虫引起的棘球蚴病是一种严重危害人和动物健康的人兽共患寄生虫病。棘球属绦虫分子种系发生分类研究的最新结果表明,其传统的形态学分类需要修正,从原有的5个种增加到9个种。特对棘球属绦虫分子种系发生研究新进展作一综述,为... 棘球属绦虫引起的棘球蚴病是一种严重危害人和动物健康的人兽共患寄生虫病。棘球属绦虫分子种系发生分类研究的最新结果表明,其传统的形态学分类需要修正,从原有的5个种增加到9个种。特对棘球属绦虫分子种系发生研究新进展作一综述,为棘球蚴病的病原生物学鉴定和分类提供参考。 展开更多
关键词 棘球属绦虫 分类学 分子种系发生 进化 流行病学
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带科绦虫线粒体基因组全序列研究进展 被引量:10
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作者 贾万忠 闫鸿斌 +3 位作者 郭爱疆 史万贵 詹芳 付宝权 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期596-600,共5页
关键词 带科绦虫 基因组全序列 线粒体 INFECTIONS 人兽共患寄生虫病 基因组序列分析 棘球蚴病 囊尾蚴病
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CpG DNA重组质粒对猪O型口蹄疫病毒抗原的免疫佐剂效应 被引量:8
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作者 景志忠 蒙学莲 +7 位作者 窦永喜 陈国华 房永祥 黄银君 王超英 刘西兰 张军 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期862-866,共5页
作者应用含CpG基序序列的重组质粒(即CpG DNA)作为免疫佐剂,评价其对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗的免疫增强效果。结果表明:CpG DNA重组质粒与猪口蹄疫灭活病毒抗原疫苗配伍免疫小鼠,CpG DNA重组质粒对小鼠具有较强的免疫佐剂效应,能促... 作者应用含CpG基序序列的重组质粒(即CpG DNA)作为免疫佐剂,评价其对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗的免疫增强效果。结果表明:CpG DNA重组质粒与猪口蹄疫灭活病毒抗原疫苗配伍免疫小鼠,CpG DNA重组质粒对小鼠具有较强的免疫佐剂效应,能促进口蹄疫病毒抗原诱导产生较高水平的特异性抗体,其抗体滴度是空载体疫苗对照的2倍。CpG DNA重组质粒与商品化猪口蹄疫灭活疫苗配伍免疫试验猪,其增强抗原诱导的特异性抗体滴度最高可达标准疫苗的4倍以上,也显著高于空载体疫苗对照 与病毒纯化抗原配伍免疫动物,攻毒后其免疫保护效力的PD50高达13.00,远高于标准疫苗对照(PD504.69)。在CpG DNA重组质粒剂量选择试验中,含低剂量的CpG DNA疫苗(50、200μg.头份-1)都比高剂量组(500μg.头份-1)诱导的抗体滴度高,其中50和200μg.头份-1的CpG DNA剂量,在接种后14~32 d诱导的抗体滴度高达1∶1500,是标准疫苗的4~5倍,而500μg.头份-1剂量诱导的抗体仅是标准疫苗的2倍,说明CpG DNA重组质粒在低剂量时即可发挥强烈的佐剂效应。研究表明CpG DNA对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗有较强的免疫佐剂效应,且使用剂量低,应用前景广阔。 展开更多
关键词 CPGDNA O型口蹄疫病毒 抗原 佐剂效应
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CD4+T细胞表位分析鉴定技术研究进展 被引量:5
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作者 周涛 贾怀杰 +2 位作者 何小兵 管齐赛 景志忠 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期531-534,共4页
CD4+T细胞表位通过激活CD4+T细胞从而介导并调节抗肿瘤或抗感染免疫反应。本文根据CD4+T细胞表位分析方法的最新研究进展,简要介绍CD4+T细胞表位预测分析法与实验鉴定法的基本原理和方法,为高通量筛选和鉴定CD4+T细胞表位提供指导。
关键词 T细胞表位 CD4+T细胞 表位预测 表位鉴定
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小反刍兽疫病毒血凝素蛋白与受体蛋白SLAM的相互作用 被引量:3
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作者 蒙学莲 窦永喜 +2 位作者 朱学亮 骆学农 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期426-433,共8页
旨在利用免疫共沉淀技术验证小反刍兽疫病毒血凝素蛋白和受体蛋白SLAM间的相互作用。鉴于截短的H蛋白仍具有正常的与细胞受体结合的能力,分别构建pcDNA3.1-tH真核表达载体和SLAM及其缺失突变体(m1-胞外区、m2-无信号肽胞外区、m3-胞外区... 旨在利用免疫共沉淀技术验证小反刍兽疫病毒血凝素蛋白和受体蛋白SLAM间的相互作用。鉴于截短的H蛋白仍具有正常的与细胞受体结合的能力,分别构建pcDNA3.1-tH真核表达载体和SLAM及其缺失突变体(m1-胞外区、m2-无信号肽胞外区、m3-胞外区N端29-136位氨基酸和m4-胞外区C端137-240位氨基酸)编码基因的pEGFP-N1系列真核表达载体,将测序正确的重组质粒共转染中国仓鼠卵巢细胞CHO-K1细胞株,利用免疫共沉淀技术验证tH蛋白与SLAM蛋白相互作用的关键氨基酸区段。结果表明,成功构建了预期的重组表达载体,转染CHO细胞后目的蛋白正确表达;免疫共沉淀时,tH能与SLAM、m1、m2和m3蛋白发生反应,但没有与m4蛋白发生反应。由此可知,SLAM N端29-136位氨基酸是决定SLAM与PPRV H蛋白结合的关键氨基酸区段,这与麻疹病毒属其他宿主SLAM受体的研究结果一致。 展开更多
关键词 血凝素蛋白 SLAM 转染 免疫共沉淀 相互作用
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甘肃合作猪白细胞抗原经典Ⅱ类分子DR基因克隆及生物信息学分析 被引量:4
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作者 莫斯科 房永祥 +1 位作者 冯海燕 景志忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1662-1668,共7页
为了克隆甘肃合作猪白细胞抗原(SLA)DRA和DRB基因,分析SLA-DR基因特性和抗原多态性,首次研究了甘肃合作猪在异种移植等研究领域中的应用前景。应用RT-PCR分别扩增合作猪SLA-DRA和SLA-DRB基因并进行测序,将所获得基因序列登录GenBank(登... 为了克隆甘肃合作猪白细胞抗原(SLA)DRA和DRB基因,分析SLA-DR基因特性和抗原多态性,首次研究了甘肃合作猪在异种移植等研究领域中的应用前景。应用RT-PCR分别扩增合作猪SLA-DRA和SLA-DRB基因并进行测序,将所获得基因序列登录GenBank(登录号分别为FJ905823和FJ9058258),再用NCBI中的BLAST和ExPASy等相关软件进行生物信息学分析。发现在猪-人异种移植中,近亲繁殖的合作猪种在与人类主要组织相容性复合体遗传基因水平相似性方面有一定优势,也可作为备选猪种对相关基因进行必要的修饰和改造。 展开更多
关键词 猪白细胞抗原 合作猪 RT-PCR 生物信息学
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人兽共患痘病毒病流行现状及其宿主谱研究进展 被引量:2
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作者 周涛 贾怀杰 +2 位作者 何小兵 房永祥 景志忠 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期159-163,166,共6页
以天花病毒(Variolavirus,VARV)为代表的痘病毒(Poxvirus)是人类最早认识并深受其害的病毒家族,同时也是严重影响公共卫生安全的重要病原。根据痘病毒的自然宿主、病毒特征以及特异性抗原的差异,可将痘病毒科(Poxviridae)分为... 以天花病毒(Variolavirus,VARV)为代表的痘病毒(Poxvirus)是人类最早认识并深受其害的病毒家族,同时也是严重影响公共卫生安全的重要病原。根据痘病毒的自然宿主、病毒特征以及特异性抗原的差异,可将痘病毒科(Poxviridae)分为两个亚科。 展开更多
关键词 病毒病 流行现状 人兽共患 宿主谱 痘病毒科 公共卫生安全 特异性抗原 天花病毒
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猪带绦虫TSOL18特异性单克隆抗体的制备及其体外杀虫作用的研究
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作者 郭爱疆 吴润 +4 位作者 贾万忠 刘斌 闫鸿斌 骆学农 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期208-213,共6页
本研究目的在于制备抗猪带绦虫TSOL18单克隆抗体,并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用。采用SephadexG-100纯化在毕赤酵母中表达的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术建立能分泌抗TSOL18单克隆抗体的细胞株;通... 本研究目的在于制备抗猪带绦虫TSOL18单克隆抗体,并分析单抗对六钩蚴的杀伤作用。采用SephadexG-100纯化在毕赤酵母中表达的猪带绦虫六钩蚴TSOL18蛋白;纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术建立能分泌抗TSOL18单克隆抗体的细胞株;通过ELISA叠加试验进行mAb的抗原表位分析;采用间接ELISA法测定TSOL18单克隆抗体特异性及腹水效价;采用抗TSOL18单克隆抗体对激活的猪带绦虫六钩蚴进行体外六钩蚴杀伤试验,观察单抗对猪带绦虫六钩蚴活力的影响。结果成功获得12株稳定分泌抗TSOL18单克隆抗体的杂交瘤细胞株,识别2个不同抗原表位,不同抗原表位的2株单克隆抗体腹水效价分别为1×102、1×106。抗体体外六钩蚴杀伤试验结果证明,在有补体的情况下,多抗和单抗作用6 d后,六钩蚴结构模糊,边缘不清晰。表明单抗对六钩蚴有一定的杀伤作用。 展开更多
关键词 猪带绦虫六钩蚴 TSOL18 单抗 体外杀六钩蚴作用
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重组产单核细胞李斯特菌溶血素的应用研究
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作者 赵松波 张少华 +3 位作者 周邦信 窦永喜 孙晓林 骆学农 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第3期105-108,共4页
李氏杆菌溶血素(Listeriolysin,LLO)是产单核细胞李斯特菌的主要毒力因子,为探索LLO的免疫保护性和作为诊断抗原的可行性,本研究用重组LLO抗原和单核细胞增多性李氏杆菌(Listeria monocytogenes,LM)全菌分别免疫BALB/c小鼠和家兔,... 李氏杆菌溶血素(Listeriolysin,LLO)是产单核细胞李斯特菌的主要毒力因子,为探索LLO的免疫保护性和作为诊断抗原的可行性,本研究用重组LLO抗原和单核细胞增多性李氏杆菌(Listeria monocytogenes,LM)全菌分别免疫BALB/c小鼠和家兔,定期采血,ELISA检测抗LLO的抗体水平,并分别对免疫和对照动物攻毒致死剂量的LM,分析重组LLO抗原的免疫保护性。结果表明,小鼠和家兔在二免后10-20 d内LLO的抗体即可达到峰值,而且免疫动物能有效抵抗LM的感染。因此,重组LLO不仅可以用作动物LM的诊断抗原,而且具有作为基因工程疫苗的潜力。 展开更多
关键词 重组LLO蛋白 ELISA 免疫 保护性
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小反刍兽疫病毒H基因或F基因重组山羊痘病毒活载体疫苗的研究 被引量:15
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作者 李继东 蒙学莲 +5 位作者 朱学亮 李雪强 尤亚南 窦永喜 骆学农 才学鹏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期111-117,共7页
为构建能够表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因或F基因的重组山羊痘病毒(GPV)并以此为活载体疫苗,在通用转移质粒pTKfpgigp的多克隆位点中插入PPRV的H基因或F基因,构建重组转移质粒pTKfpgigp-PPRV H和pTKfpgigp-PPRV F,并用Lipofectamine 2... 为构建能够表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因或F基因的重组山羊痘病毒(GPV)并以此为活载体疫苗,在通用转移质粒pTKfpgigp的多克隆位点中插入PPRV的H基因或F基因,构建重组转移质粒pTKfpgigp-PPRV H和pTKfpgigp-PPRV F,并用Lipofectamine 2000转染已感染GPV的原代绵羊睾丸细胞,经同源重组产生重组GPV(rGPV)。用GFP和gpt选择标记筛选纯化rGPV,通过RT-PCR和免疫荧光技术检测rGPV在原代绵羊睾丸细胞中外源基因的表达情况。将获得的rGPV皮内接种山羊,检测抗山羊痘病毒和小反刍兽疫病毒的特异性抗体的变化情况。结果显示,获得了含有PPRV H基因或F基因的病毒株rGPV-PPRV H和rGPV-PPRV F;在原代绵羊睾丸细胞中rGPV所含的外源基因进行了正常转录和翻译,表达产物能与PPRV抗血清产生特异性反应,动物免疫试验表明,2株rGPV能诱导产生高水平的抗山羊痘病毒和小反刍兽疫病毒的特异性抗体。上述研究结果为PPRV重组标记疫苗的研制提供了参考。 展开更多
关键词 小反刍兽疫病毒 山羊痘病毒 H基因 F基因
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猪Toll样受体7基因的克隆及序列分析 被引量:5
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作者 段凤云 房永祥 +3 位作者 陈国华 王生富 何延华 景志忠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期599-601,共3页
目的:研究猪TLR7基因的分子结构与功能。方法:用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增技术,从猪脾脏淋巴细胞中克隆猪Toll样受体7基因(pTLR7),利用生物信息学技术预测其结构与功能。结果:基因序列分析表明,克隆的pTLR7基因为3153bp,编码1... 目的:研究猪TLR7基因的分子结构与功能。方法:用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增技术,从猪脾脏淋巴细胞中克隆猪Toll样受体7基因(pTLR7),利用生物信息学技术预测其结构与功能。结果:基因序列分析表明,克隆的pTLR7基因为3153bp,编码1050个氨基酸,富含16.2%的亮氨酸;同源性分析显示,与GenBank上登载的猪TLR7参考序列(DQ333222)的同源性为98.8%,与牛和绵羊的同源性较高,与马、狗、人、家鼠、褐鼠的次之,其遗传演化关系与亲缘关系密切;推导氨基酸的分子结构预测表明,该分子属于I型跨膜受体,由胞外区(588个氨基酸)、跨膜区(23个氨基酸)和胞内区(174个氨基酸)组成,有信号肽序列、富含亮氨酸的重复序列(LRR)和Toll/IL-1R同源区结构域。结论:成功克隆了猪TLR7基因,预测分析证实具有典型的TLR家族结构特征,这为进一步研究其参与病原分子模式识别和信号传导奠定了基础。 展开更多
关键词 猪Toll样受体7 分子克隆 序列分析 结构预测
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正痘病毒干扰宿主免疫应答的分子及其作用途径 被引量:3
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作者 景志忠 贾怀杰 +1 位作者 周涛 何小兵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1503-1512,共10页
正痘病毒属的牛痘病毒、痘苗病毒以及猴痘病毒等成员是最重要的动物源性人兽共患病病原。作者围绕这些正痘病毒编码的干扰宿主免疫应答的分子及其作用途径,重点介绍了病毒阻断宿主干扰素反应、抑制宿主TNF诱导的反应以及失活宿主防御反... 正痘病毒属的牛痘病毒、痘苗病毒以及猴痘病毒等成员是最重要的动物源性人兽共患病病原。作者围绕这些正痘病毒编码的干扰宿主免疫应答的分子及其作用途径,重点介绍了病毒阻断宿主干扰素反应、抑制宿主TNF诱导的反应以及失活宿主防御反应的免疫成分等策略,以加深对痘病毒感染的宿主特异性、免疫逃避以及致病的分子机制的理解。 展开更多
关键词 正痘病毒 病毒感染 宿主免疫反应 调节宿主免疫蛋白 分子机制
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产单核细胞李斯特菌溶血素O基因在大肠杆菌中的优化表达及ELISA检测方法的建立 被引量:3
14
作者 赵松波 孙晓林 +3 位作者 张少华 周邦信 窦永喜 骆学农 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期968-972,共5页
在克隆产单核细胞李斯特菌(LMO)hlyA基因并构建其原核表达载体的基础上,进一步对IPTG浓度、诱导时间、诱导温度等影响目的蛋白表达的重要条件进行了优化。根据确定的最佳诱导条件,使目的蛋白获得了高效表达。对表达的李斯特菌溶血素O(L... 在克隆产单核细胞李斯特菌(LMO)hlyA基因并构建其原核表达载体的基础上,进一步对IPTG浓度、诱导时间、诱导温度等影响目的蛋白表达的重要条件进行了优化。根据确定的最佳诱导条件,使目的蛋白获得了高效表达。对表达的李斯特菌溶血素O(LLO)进行了纯化,以其作为靶抗原,采用间接ELISA方法检测了动物血清中的特异性LLO抗体。结果表明,用表达产物作为靶抗原可对LMO感染动物进行初步诊断,为建立基于LLO的动物李斯特菌病血清学诊断技术奠定了基础。 展开更多
关键词 产单核细胞李斯特菌 李斯特菌溶血素O 优化表达 纯化 酶联免疫吸附试验
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牛趋化因子受体4基因的克隆表达及序列分析 被引量:2
15
作者 李小庆 何延华 +4 位作者 陈国华 房永祥 冯海燕 赵娜 景志忠 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1003-1009,共7页
采用RT-PCR技术,从被刺激诱导的牛外周血单个核细胞(PBMC)中克隆了牛趋化因子受体4(CXCR4)全长基因,并将CXCR4基因和CXCR4基因N端1~126 bp(CXCR442 aa)片段分别亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,命名为pGEX-4T-1-CXCR4、pGEX-4T-1... 采用RT-PCR技术,从被刺激诱导的牛外周血单个核细胞(PBMC)中克隆了牛趋化因子受体4(CXCR4)全长基因,并将CXCR4基因和CXCR4基因N端1~126 bp(CXCR442 aa)片段分别亚克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,命名为pGEX-4T-1-CXCR4、pGEX-4T-1-CXCR442 aa。获得重组菌株后,采用不同的IPTG浓度、不同诱导时间、不同温度和不同培养基等组合诱导表达这两种重组菌,其中pGEX-4T-1-CX-CR442 aa重组菌获得了表达,并在37℃、IPTG浓度为0.8 mmol/L、诱导6 h时表达量最大,约占菌体总蛋白的45%,目的蛋白主要以包涵体的形式存在;而pGEX-4T-1-CXCR4重组菌未表达出目的蛋白。 展开更多
关键词 CXCR4基因 克隆 表达 结构预测
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猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0708株的分离鉴定及其Nsp2基因的遗传变异分析 被引量:3
16
作者 贾怀杰 陈国华 +5 位作者 房永祥 王晓霞 李小庆 莫斯科 瞿惠玲 景志忠 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第10期58-63,共6页
采集江西省某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,RT-PCR检测可扩增出PRRSV ORF7特异性片段,序列分析发现其与美洲型毒株序列一致性达93.9%以上,与欧洲型毒株仅为69.8%。将采集的脑和肺脏处理后接种Marc-145细胞盲传,在盲传的细胞中可扩增... 采集江西省某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,RT-PCR检测可扩增出PRRSV ORF7特异性片段,序列分析发现其与美洲型毒株序列一致性达93.9%以上,与欧洲型毒株仅为69.8%。将采集的脑和肺脏处理后接种Marc-145细胞盲传,在盲传的细胞中可扩增到PRRSV ORF7特异性片段,传至第6代时出现明显的细胞病变;将该毒株NSP2非结构蛋白基因测序分析,发现其编码的氨基酸与国内近年来分离的高致病性PRRSV毒株有较高的同源性,与美洲型代表株VR-2332相比缺失第482位和533-561位共30个氨基酸;纯化病毒并进行电镜观察,可见典型的PRRSV病毒粒子。第8代的细胞毒回归30日龄仔猪,可观察到猪繁殖与呼吸综合征典型症状和病理变化。这表明已成功地分离到1株美洲型PRRSV变异株,命名为JX0708株。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 JX0708株 分离鉴定 NSP2基因 遗传变异分析
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抑制性消减杂交技术的应用 被引量:8
17
作者 李小庆 景志忠 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期46-50,共5页
基因的差异表达是调控各种生命活动的核心分子机制,而分离、克隆并进一步研究差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点,也是功能基因组学研究的重要内容。在研究差异表达基因的诸多项技术中,抑制性消减杂交(SSH)技术具有特异性强、... 基因的差异表达是调控各种生命活动的核心分子机制,而分离、克隆并进一步研究差异表达基因已成为现代分子生物学研究的热点,也是功能基因组学研究的重要内容。在研究差异表达基因的诸多项技术中,抑制性消减杂交(SSH)技术具有特异性强、假阳性率低、灵敏度高和快速简便等优点,被广泛地应用于生命科学和医学领域的基因差异表达的研究中。近年来,抑制性消减杂交(SSH)技术得到了相应的改进和完善,而在许多研究领域,该技术在广度和深度上都有了一些新进展。主要就抑制性消减杂交技术的产生背景、原理、技术流程、特点及其最新应用研究进展等方面作简要综述。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 差异表达 功能基因DSN均一化技术 CDNA微阵列
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猪T细胞受体β链的基因结构及其多样性分析 被引量:1
18
作者 曾爽 李玩生 +5 位作者 房永祥 冯海燕 陈国华 何小兵 贾怀杰 景志忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1874-1882,共9页
设计猪TCRβ链基因的一对特异性引物,用RT-PCR法从合作小型猪外周血、淋巴结和脾淋巴细胞中高通量克隆和鉴定了82个猪TCRβ基因(简称STB)。测序分析表明,克隆的猪TCRβ链的基因都含有可变的信号肽区和V区、高变的D区和J区以及恒定的C区... 设计猪TCRβ链基因的一对特异性引物,用RT-PCR法从合作小型猪外周血、淋巴结和脾淋巴细胞中高通量克隆和鉴定了82个猪TCRβ基因(简称STB)。测序分析表明,克隆的猪TCRβ链的基因都含有可变的信号肽区和V区、高变的D区和J区以及恒定的C区的基因片段,绝大部分基因间的核苷酸序列组成都不完全相同,且具有十分复杂的多态性和多样性,基因间的相似性在36.6%~99.9%,这与TCRβ链的基本基因结构特征相一致。猪TCRβ基因的分子结构、遗传演化关系和归类分析发现,在同一类基因分子中其信号肽区、FR1区和CDR1区、FR2区和CDR2区以及FR3区之间的差异主要由V基因片段的多态性引起,而CDR3区的差异主要由其D、J基因片段的多样性造成。同时发现猪TCRβ与人类的遗传演化关系较近,大部分基因序列都能找到与人类对应的TRBV、TRBD、TRBJ基因片段,但又存在一定的差异性。这表明,猪TCRβ基因既有应对外界复杂微生物环境的免疫多样性分子遗传基础,也有物种间的相似性与特异性。 展开更多
关键词 合作小型猪 TCRβ基因 生物信息学 多样性
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羊口疮病毒QH02株VEGF基因的克隆及其序列分析 被引量:1
19
作者 王盈盈 贾怀杰 +3 位作者 白刚 何妍萍 岳城 景志忠 《新疆农业大学学报》 CAS 2013年第2期98-102,共5页
根据GenBank中登录的羊口疮病毒SA00株基因组序列,针对VEGF基因设计特异性引物,从感染OR-FV/QH02/2010的Hela细胞中提取病毒DNA作模板进行PCR,扩增VEGF基因并将其克隆入pEGM-T Easy载体,经鉴定且测序结果正确后对其序列进行分析。结果表... 根据GenBank中登录的羊口疮病毒SA00株基因组序列,针对VEGF基因设计特异性引物,从感染OR-FV/QH02/2010的Hela细胞中提取病毒DNA作模板进行PCR,扩增VEGF基因并将其克隆入pEGM-T Easy载体,经鉴定且测序结果正确后对其序列进行分析。结果表明,该毒株VEGF基因的开放阅读框(ORF)大小为402bp,编码133个氨基酸,分子量为14.65ku。在氨基酸水平该毒株与国内ORFV各毒株VEGF序列的同源性为70.0%~97.8%,但与陕西株同源性较低(39.5%),与国外ORFV各毒株的同源性为38.8%~82.1%。对该基因的进化分析表明,其与VEGF-A、VEGF-B、VEGF-D型及NZ2株和PA11株的亲缘关系最近。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 VEGF 克隆 序列分析
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羊口疮病毒ORF128锚蛋白对HEK293T细胞NF-κB信号通路的调节作用及机制 被引量:8
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作者 安雪珂 贾怀杰 +4 位作者 冯园 陈国华 何小兵 景志忠 王晓霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期243-249,共7页
目的研究羊口疮病毒(ORFV)感染HEK293T宿主细胞后,其编码的锚蛋白ORF128蛋白对宿主核因子κB(NF-κB)信号通路的影响及其机制。方法将来自ORFV/QH02/2010株的ORF128 DNA序列分别构建至真核表达载体pCMV-tag2B和pEGFP-N1;在病毒感染细胞... 目的研究羊口疮病毒(ORFV)感染HEK293T宿主细胞后,其编码的锚蛋白ORF128蛋白对宿主核因子κB(NF-κB)信号通路的影响及其机制。方法将来自ORFV/QH02/2010株的ORF128 DNA序列分别构建至真核表达载体pCMV-tag2B和pEGFP-N1;在病毒感染细胞期间,利用反转录PCR检测ORF128 mRNA水平、激光共聚焦显微镜检测ORF128蛋白的亚细胞定位;利用双荧光素酶报告基因检测系统分析ORF128对NF-κB信号通路的调节作用, Western blot法检测NF-κBp65的核移位以及NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的蛋白磷酸化水平。结果 ORF128蛋白在病毒感染早期表达且定位于宿主细胞核, ORF128蛋白可抑制NF-κB转录因子报告载体荧光素酶活性; ORF128的表达抑制NF-κBp65的核移位和磷酸化的IκBα(p-IκBα)的降解。结论 ORF128蛋白通过抑制p-IκBα蛋白的降解过程,阻止NF-κBp65蛋白核移位,进而抑制宿主NF-κB信号通路的活化。 展开更多
关键词 羊口疮病毒(ORFV) 锚蛋白 核因子κB( NF-κB) 羊口疮病毒蛋白128(ORF128)
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