来源于益生菌FGM的aga2基因在黄芪发酵过程中的表达

通过对益生菌FGM所产α-半乳糖苷酶aga2基因在黄芪发酵不同阶段的表达水平分析,为α-半乳糖苷酶在黄芪发酵过程中的作用及其益生机制探究提供依据。绘制益生菌FGM在黄芪发酵过程中的生长及发酵液pH变化曲线,同源序列法克隆aga2基因,运用SYBR Green I实时荧光定量PCR技术检测aga2基因在黄芪发酵不同阶段表达水平。结果表明,在发酵6h内FGM菌株处于对数生长期,大量产酸使pH由初始7.2迅速下降到5.3;12h后细菌进入稳定期,pH下降到4.5;48h至发酵结束pH稳定在4.0左右。成功克隆到一段648bp的aga2基因片段(GenBank登录号KC202825),序列相似性最高达98%。发酵24h内aga2基因表达逐渐上调并达到最高;36h表达水平下降明显,仅是初始发酵水平的1.28倍,之后至60h又呈上升趋势。上述结果提示,益生菌FGM在黄芪发酵中可产生α-半乳糖苷酶以分解黄芪粉中的抗营养因子α-半乳糖苷类,其分解产物半乳糖通过Leloir途径中间产物UDP-半乳糖可能间接参与胞外多糖合成,为黄芪发酵产物中多糖得率增加起了一定作用。

种子液传代次数对益生菌FGM株发酵黄芪转化多糖的影响

益生菌FGM株发酵黄芪后,产物粗多糖得率显著提高。为进一步提高FGM株发酵黄芪转化多糖的稳定性,本试验将连续传代的FGM株种子液接种黄芪进行液体发酵,采用细菌平板计数法和苯酚—硫酸法分别测定发酵前、后的细菌总数和发酵后黄芪多糖的含量,并对结果进行了统计学分析。结果表明菌种在多次连续传代后会产生菌种退化现象,发酵产物中多糖含量与种子液细菌总数呈极显著相关(P=0.007),其中第4代种子液发酵黄芪转化多糖的性能最高。