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雪茄烟叶原料发酵微生物多样性及酶活变化研究 被引量:17
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作者 张磊 罗泽华 +7 位作者 杨明川 李世贵 辛玉华 蔡斌 刘好宝 曾代龙 顾金刚 段碧华 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期171-180,共10页
烟叶原料发酵是决定雪茄品质与风味的关键因素之一,研究了雪茄烟叶不同发酵阶段的微生物多样性及蛋白酶、淀粉酶、果胶酶的变化规律。结果表明,不同发酵阶段微生物菌群呈动态变化,样品1在发酵起始阶段以葡萄球菌属为优势菌,结束则以肠... 烟叶原料发酵是决定雪茄品质与风味的关键因素之一,研究了雪茄烟叶不同发酵阶段的微生物多样性及蛋白酶、淀粉酶、果胶酶的变化规律。结果表明,不同发酵阶段微生物菌群呈动态变化,样品1在发酵起始阶段以葡萄球菌属为优势菌,结束则以肠杆菌属、假单胞菌属、短杆菌属为优势菌;而样品2在发酵过程中主要以葡萄球菌和四联球菌为优势菌。不同发酵阶段酶活性变化规律具有一定差异性:样品1蛋白酶(165.95 U·g^(-1))与淀粉酶(0.34 U·g^(-1))在发酵结束活性较强,果胶酶活性(1.30 U·g^(-1))在发酵起始较强;样品2蛋白酶活性(121.57 U·g^(-1))发酵结束活性较强;果胶酶活性(1.60 U·g^(-1))与淀粉酶活性(0.38 U·g^(-1))在发酵中期活性较强。样品1雪茄原料在三个不同发酵阶段pH变化较为明显,在发酵中期pH为7.6,呈碱性;样品2雪茄原料在不同发酵阶段pH变化较小,整个发酵阶段pH呈酸性。 展开更多
关键词 雪茄 发酵 微生物多样性 酶活 PH
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桃红侧耳子实体颜色的遗传规律研究 被引量:1
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作者 张泽华 高巍 +3 位作者 邬向丽 黄晨阳 常明昌 张金霞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期70-75,共6页
子实体颜色是食用菌的重要商品性状之一,也是食用菌遗传育种的重要方向。以桃红侧耳[Pleurotus djamor(Rumph. ex Fr.)Boedijn]的粉红色菌株CCMSSC00450和灰褐色菌株CCMSSC04445为亲本,通过原生质体单核化技术,分别获得各自的组成型单... 子实体颜色是食用菌的重要商品性状之一,也是食用菌遗传育种的重要方向。以桃红侧耳[Pleurotus djamor(Rumph. ex Fr.)Boedijn]的粉红色菌株CCMSSC00450和灰褐色菌株CCMSSC04445为亲本,通过原生质体单核化技术,分别获得各自的组成型单核菌株PDm52、PDm17和PDm99、PDm14。经相互配对杂交和出菇试验,4个杂交子均可结实,且色泽不同,其中PDm52×PDm99是粉红色、PDm52×PDm14是粉灰色、PDm17×PDm14是灰褐色、PDm17×PDm99是白色。以粉红色杂交子PDm52×PDm99的207个单孢单核体作为粉红色子实体的分离群体,以PDm17为测交菌株,构建测交群体。出菇结果显示,测交群体的子实体颜色出现明显的性状分离,由深到浅连续分布,存在粉红色、淡粉色、白色等。结果表明,P. djamor子实体的粉红色相对于白色为不完全显性,白色为隐性;子实体颜色性状是具有高遗传力的多基因控制的数量性状;菌盖颜色和菌褶颜色存在极显著相关性。 展开更多
关键词 桃红侧耳 子实体颜色 数量性状 测交 杂交
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辣椒根际促生菌的分离筛选及抗病促生特性研究 被引量:27
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作者 杨茉 高婷 +3 位作者 李滟璟 魏崇瑶 高淼 马莲菊 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期104-109,共6页
获得辣椒根际促生菌(Plant growth promoting rhizobacteria,PGPR)并探究其抗病促生特性。采用固氮、无机磷和有机磷培养基从江苏省徐州市采集的辣椒根际土壤中分离筛选根际促生菌株(PGPR),通过形态特征及16S rDNA序列分析进行菌株鉴定... 获得辣椒根际促生菌(Plant growth promoting rhizobacteria,PGPR)并探究其抗病促生特性。采用固氮、无机磷和有机磷培养基从江苏省徐州市采集的辣椒根际土壤中分离筛选根际促生菌株(PGPR),通过形态特征及16S rDNA序列分析进行菌株鉴定,对菌株的固氮、解磷、分泌3-吲哚乙酸(IAA)能力及对4种辣椒病害病原菌抗病能力进行探究。得到13株辣椒PGPR菌株,经鉴定分别属于Bacillus、Pseudomonas、Lelliottia、Siccibacter、Achromobacter、Microbacterium和Paenibacillus;13株PGPR菌株均有固氮功能;其中7株可解有机磷,分别属于Lelliottia、Bacillus、Siccibacter、Microbacterium、Paenibacillus;5株可解无机磷,分别属于Lelliottia、Bacillus、Siccibacter、Pseudomonas;3株具有分泌IAA能力,分别属于Lelliottia、Siccibacter、Bacillus;5株具有抗病能力,分别属于Bacillus、Lelliottia、Siccibacter。辣椒根际土壤含有在农业生产上具有潜在的应用价值的多功能根际促生菌。 展开更多
关键词 辣椒 根际促生菌 抗病
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Trichoderma lentiforme ACCC30425脂肪酶基因的原核表达及其酶学性质的初步研究
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作者 王宇洲 马锐 +4 位作者 向杰 陈敬师 李世贵 龚明波 顾金刚 《生物技术进展》 2018年第6期530-536,共7页
基于在Trichoderma lentiforme ACCC30425全基因组序列注释的15个脂肪酶基因,进行脂肪酶基因合成与Escherichia coli BL21异源表达,获得11个产脂肪酶阳性克隆,其中酶活力最高为1.5 U/mL。经初步酶学分析,结果表明重组表达脂肪酶普遍具... 基于在Trichoderma lentiforme ACCC30425全基因组序列注释的15个脂肪酶基因,进行脂肪酶基因合成与Escherichia coli BL21异源表达,获得11个产脂肪酶阳性克隆,其中酶活力最高为1.5 U/mL。经初步酶学分析,结果表明重组表达脂肪酶普遍具有耐热性、耐碱性的特征,最适温度范围为50~90℃,最适pH范围为8.5~9.5。其中,LipP最适温度为90℃,远高于目前已知脂肪酶的最适温度; LipQ最适温度为50℃,最接近洗涤工业的中温温度;其他脂肪酶最适温度为70℃或80℃,均属耐热脂肪酶。 展开更多
关键词 木霉 脂肪酶 原核表达 耐热性
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热胁迫下糙皮侧耳实时荧光定量PCR内参基因的选择 被引量:12
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作者 侯志浩 赵梦然 +3 位作者 陈强 张妍 黄晨阳 邬向丽 《食用菌学报》 CSCD 北大核心 2019年第3期11-18,F0003,共9页
在组成型表达基因和热胁迫转录组数据中选择12个基因作为热胁迫下糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)实时荧光定量PCR的候选基因。以40℃热处理0.5、1、3、6、12、24、48 h的糙皮侧耳菌丝体为材料,采用候选基因的特异性引物进行实时荧光定量... 在组成型表达基因和热胁迫转录组数据中选择12个基因作为热胁迫下糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)实时荧光定量PCR的候选基因。以40℃热处理0.5、1、3、6、12、24、48 h的糙皮侧耳菌丝体为材料,采用候选基因的特异性引物进行实时荧光定量PCR,运用geNorm、NormFinder和BestKeeper 3种软件对结果进行分析,评估12个候选基因的稳定性。结果显示β-微管蛋白基因、β-肌动蛋白基因和丝/苏氨酸蛋白磷酸酶基因可以作为糙皮侧耳热胁迫下理想的内参基因,而丝氨酸蛋白酶基因、磷酸化酶基因和细胞周期蛋白不适合作为糙皮侧耳热胁迫下的内参基因。 展开更多
关键词 糙皮侧耳 内参基因 热胁迫 实时荧光定量PCR
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基于转录-代谢联合分析哈茨木霉ACCC32527对NaCl胁迫的分子调节 被引量:3
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作者 向杰 陈敬师 +3 位作者 夏鑫鑫 刘快 李世贵 顾金刚 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2079-2091,共13页
【目的】通过NaCl胁迫下哈茨木霉(Trichoderma harzianum)ACCC32527差异转录组和代谢组数据分析,挖掘关键功能型差异表达基因(DEG)及次级代谢产物。【方法】采用RNAseq和GCTOFMS技术分别完成0(T1)、0.4(T2)、0.6(T3)mol·L^-1NaCl... 【目的】通过NaCl胁迫下哈茨木霉(Trichoderma harzianum)ACCC32527差异转录组和代谢组数据分析,挖掘关键功能型差异表达基因(DEG)及次级代谢产物。【方法】采用RNAseq和GCTOFMS技术分别完成0(T1)、0.4(T2)、0.6(T3)mol·L^-1NaCl胁迫下哈茨木霉ACCC32527的差异表达基因和次级代谢产物检测,利用相关软件及数据库(GO、COG、KEGG pathway等)完成对差异表达基因(|log2fold change)|>1&FDR<0.01)和次级代谢产物(P-value≤0.05&VIP>1)的筛选、注释和分类,并进行RTqPCR验证。【结果】NaCl胁迫处理后,ACCC32527的生长受到抑制,繁殖速率明显降低,并在该条件下分别获得T1 vs T2和T1 vs T3比较组637、1570个DEG,获得DEG的16种表达模式,包括9种上调表达模式(950gene)、3种下调表达模式(662gene)和4种不规则表达模式(309gene),共有的GO功能分类为催化活性、结合、细胞器、细胞膜部分、细胞膜、细胞部分、细胞、单组织过程和代谢过程,且占主要比例,约为61%—94%,其中处理前后基因比例差异较大的分类为催化活性。KEGG代谢通路富集分析发现,不同NaCl浓度处理下的DEG富集到的代谢通路种类及数量存在较大差异,分别有225和535个差异基因富集于20条KEGG通路,包括代谢通路、抗生素的合成和次级代谢产物合成,其中T2和T3处理下核糖体的生物合成途径分别有12个和18个相关基因受到抑制。从NaCl胁迫下差异转录组中筛选出活性氧清除、离子转运和细胞壁及胞外结构等共73个相关基因,并且多数为上调表达基因。另外,差异代谢组学分析表明,T3处理下,胞内小分子代谢物出现明显变化,累积量增加的代谢产物有30种,包括氨基酸及其衍生物、糖类及其衍生物和醇类,而减少的代谢物有53种,涉及脂肪酸和有机酸等。其中,甘油是已知的真菌重要渗透保护物,T3处理下ACCC32527胞内甘油水平提高,可参与细胞的渗透调节,维持渗透压平衡。RTqPCR验证了7个差异表达显著基因,虽然在表达量上存在一定的差异,但表达趋势与RNAseq分析结果基本一致,表明转录组测序结果的可靠性。【结论】NaCl胁迫引起哈茨木霉ACCC32527大量基因及次级代谢产物变化,获得了与NaCl胁迫调节相关基因和代谢产物,这些机制共同作用减少盐离子对细胞的毒害作用,研究结果可为研究木霉菌的耐盐机理提供重要信息。 展开更多
关键词 NACL 哈茨木霉 转录组 代谢组 耐盐机理
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非洲哈茨木霉产抑菌挥发性有机物碳源代谢机制 被引量:3
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作者 陈敬师 黄玉洋 +3 位作者 向杰 郭清华 李世贵 顾金刚 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第22期4601-4612,共12页
【目的】获得生防菌非洲哈茨木霉(Trichoderma afroharzianum)ACCC 33109高产抑菌挥发性有机物的突变菌株,并分析其碳源代谢以挖掘高产抑菌挥发性有机物的机制。【方法】通过原生质体紫外诱变野生株ACCC33109获得突变株,以对扣法筛选挥... 【目的】获得生防菌非洲哈茨木霉(Trichoderma afroharzianum)ACCC 33109高产抑菌挥发性有机物的突变菌株,并分析其碳源代谢以挖掘高产抑菌挥发性有机物的机制。【方法】通过原生质体紫外诱变野生株ACCC33109获得突变株,以对扣法筛选挥发性有机物抑制尖镰孢(Fusarium oxysporum)活性差异大的突变菌株,利用Omnilog表型芯片技术比较野生株ACCC 33109和突变株MU153、MU792对不同种类碳源代谢的差异特征。【结果】野生株ACCC 33109经紫外线诱变2.0 min(致死率为76.63%)共获得828个突变株,对扣法筛选获得30个挥发性有机物对尖镰孢抑制率高于野生株的突变株,其中突变株MU153抑菌率高达53.86%,较野生株提高了16.68%,而突变株MU792的抑菌率降至15.83%。盆栽试验表明非洲哈茨木霉ACCC 33109和MU153菌株均对黄瓜具有促生作用,对黄瓜枯萎病有防治作用,与野生株ACCC 33109相比,突变株MU153对黄瓜枯萎病的相对防治效果提高了15.88%,相对于清水对照,防病效果高达89.69%。另外,紫外诱变导致突变株的菌落、菌丝、分生孢子梗和孢子形态发生了变化,相对于ACCC 33109,MU153菌丝变为絮状、生长速度快、密度大、并有色素产生,而MU792菌丝生长速度慢、密度低、菌落后期由绿色变为白色;突变株MU153和MU792分生孢子梗增大、孢子变大,且分生孢子梗基部宽度降低。紫外诱变引起突变株对碳源代谢能力的改变,相对于ACCC 33109,MU153对FF板中46种物质的代谢能力较高,包括D-阿拉伯醇、二胺乙醇、麦芽糖、熊果苷、纤维二糖和α-D-葡萄糖等,对其他50种物质的代谢能力低于ACCC 33109,包括对羟基苯乙酸、琥珀酸、琥珀酰胺酸、糖原、溴代丁二酸和L-苏氨酸等。MU792对FF板中27种物质的代谢能力较高,包括γ-羟丁酸、葡萄糖-1磷酸、β-羟丁酸、D-乳酸甲酯、D-山梨醇和丙酰胺等,对其他69种物质的代谢能力低于ACCC 33109,包括琥珀酰胺酸、N-乙酰-D-葡萄糖胺、对羟基苯乙酸、葵二酸、吐温-80和D-糖质酸。α-D-葡萄糖最利于抑菌挥发性有机物的产生,以α-D-葡萄糖为碳源时,ACCC 33109、MU153和MU792的挥发性有机物对尖镰孢的抑菌率依次为48.08%、56.17%和40.94%。【结论】非洲哈茨木霉突变株MU153具有高产抑菌挥发性有机物的能力,以α-D-葡萄糖为碳源时抑菌效果更佳,是一株具有应用潜力的生防菌。 展开更多
关键词 非洲哈茨木霉 挥发性有机物 紫外诱变 表型分析
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表型特征结合基因组分析鉴定不同菌落形态Bacillus velezensis ACCC 19742 被引量:5
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作者 郭鹤宝 王星 +1 位作者 何山文 张晓霞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期142-148,共7页
在中国农业微生物菌种中心(ACCC)菌株的定期转接保藏过程中,发现解淀粉芽孢杆菌ACCC 19742在同一培养基上出现两种不同的菌落形态,将这两个不同形态的菌株编号为19742-1和19742-2。通过形态学、生理生化及基因组分析相结合鉴定不同菌落... 在中国农业微生物菌种中心(ACCC)菌株的定期转接保藏过程中,发现解淀粉芽孢杆菌ACCC 19742在同一培养基上出现两种不同的菌落形态,将这两个不同形态的菌株编号为19742-1和19742-2。通过形态学、生理生化及基因组分析相结合鉴定不同菌落形态ACCC 19742,并进一步确定该菌株的分类地位。首先将菌株进行分离与纯化,其次将纯化后的菌株进行16S rRNA及gyrB基因扩增及序列分析,通过MEGA 7.0软件构建系统发育树;API 20NE、BIOLOG及脂肪酸等分析菌株的生理生化特性;全基因组分析菌株的ANI和DDH值。两株菌在API 20NE中,仅葡萄糖酸盐同化反应存在差异;脂肪酸检测中主要组成相同,仅是百分含量方面略有差别;两株菌的16S rRNA基因相似性为100%,gyrB基因的相似性为99.4%;全基因组测序表明,两株菌的ANI值为99.95%,DDH值为99.62%。综合遗传学特征和表型特征,证实两者为来源于同一菌株不同的形态变异型,而并非污染所致。同时,19742-1和19742-2与Bacillus velezensis NRRL_B 41580~T的ANI及DDH值最高,分别为97%和77%,且16S rRNA和gyrB系统进化分析也表明,该菌株在分类地位上属于贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),而非解淀粉芽孢杆菌。这为菌株的保藏提供了一定的参考价值。 展开更多
关键词 解淀粉芽孢杆菌 形态变异型 全基因组测序 贝莱斯芽孢杆菌
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糙皮侧耳乳酸脱氢酶鉴定及其菌丝高温胁迫下表达特征分析 被引量:1
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作者 吴柏增 何琪 +1 位作者 姚方杰 赵梦然 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期350-359,共10页
乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)可催化丙酮酸与乳酸(lactic acid,LA)之间的可逆转化,为探索乳酸脱氢酶基因在糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌丝体高温胁迫响应中的作用,在糙皮侧耳(P. ostreatus)菌株CCMSSC00389基因组中鉴定... 乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)可催化丙酮酸与乳酸(lactic acid,LA)之间的可逆转化,为探索乳酸脱氢酶基因在糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)菌丝体高温胁迫响应中的作用,在糙皮侧耳(P. ostreatus)菌株CCMSSC00389基因组中鉴定获得了8个乳酸脱氢酶编码基因。生物信息学分析结果显示,3个基因编码D型乳酸脱氢酶,5个基因编码L型乳酸脱氢酶。氨基酸序列比对、系统发育、三维结构和亚细胞定位分析显示,3个D型乳酸脱氢酶的同源性较高,可能属于细胞色素C依赖的D型乳酸脱氢酶,D-LDH2和D-LDH3位于线粒体中;5个L型乳酸脱氢酶的氨基酸序列同源性较低,并按电子受体和亚细胞定位的不同分为3个类型。通过检测36℃、40℃高温胁迫下乳酸脱氢酶基因的表达量变化,明确D-ldh3、L-ldh5和L-ldh7表达特征相同,L-ldh6和L-ldh8的表达特征相同,D-ldh1、D-ldh2和L-ldh4则表现出不同的基因表达趋势,表明乳酸脱氢酶基因对不同高温胁迫温度的响应方式存在差异。高温胁迫条件下,乳酸脱氢酶总酶活性降低,胞内乳酸含量升高;外源添加乳酸脱氢酶抑制剂和乳酸都能显著抑制菌丝生长,表明乳酸脱氢酶能够调控热胁迫下糙皮侧耳的菌丝生长。推测糙皮侧耳乳酸脱氢酶通过降低基因转录水平和酶活性,影响了胞内乳酸脱氢向丙酮酸的转化,导致胞内乳酸的过量积累造成细胞损伤,最终抑制了菌丝生长速率。 展开更多
关键词 糙皮侧耳 乳酸脱氢酶 高温响应 基因表达
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NaCl胁迫下哈茨木霉ACCC32524的转录组和代谢组分析
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作者 向杰 陈敬师 +3 位作者 夏鑫鑫 刘快 李世贵 顾金刚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期2165-2181,共17页
【目的】通过分析NaCl胁迫下哈茨木霉(Trichoderma harzianum)ACCC32524转录组和代谢组数据,研究差异表达基因及次级代谢产物的变化情况,初步探索响应NaCl胁迫的分子机制。【方法】利用Illumina HiSeq XTen高通量测序平台完成0、0.4、0.... 【目的】通过分析NaCl胁迫下哈茨木霉(Trichoderma harzianum)ACCC32524转录组和代谢组数据,研究差异表达基因及次级代谢产物的变化情况,初步探索响应NaCl胁迫的分子机制。【方法】利用Illumina HiSeq XTen高通量测序平台完成0、0.4、0.6 mol/L NaCl浓度胁迫培养下哈茨木霉ACCC32524的转录组测序,GC-TOF-MS技术完成对0mol/L和0.6mol/LNaCl胁迫培养下的差异次级代谢产物检测,利用相关软件及数据库对差异表达基因(DEGs)和次级代谢产物的注释、筛选和分类,并进行RT-qPCR验证。【结果】本研究分别得到0.4 mol/L和0.6 mol/L NaCl胁迫下417和733条差异表达基因;GO富集分析显示,分别有318和582条差异表达基因注释到生物学过程、分子功能和细胞组分3个一级分类和40个二级分类;COG分类结果表明分别有232和414条转录本为20个类别,涉及差异表达基因最多的分别为氨基酸的转运和代谢、一般功能预测、碳水化合物的转运和代谢;KEGG代谢途径分析结果表明,分别有75和96条基因归到25个代谢通路中(P≤0.05),其中涉及差异基因最多的是氨基酸的生物合成和2-氧代羧酸代谢通路。从转录组数据中共筛选出与渗透调节、离子转运、活性氧清除等22个耐盐相关基因。0 mol/L和0.6 mol/L NaCl胁迫下的代谢组数据中共筛选出101个差异次级代谢产物,包括8种积累量上调和93种下调物质,其中36个得到定性,分属于糖类、有机酸和氨基酸等9个分类中。RT-qPCR验证挑选的差异表达基因的表达量变化,均与RNA-seq分析结果一致。【结论】NaCl胁迫下引起哈茨木霉ACCC32524基因及次级代谢产物发生明显变化,细胞代谢途径发生明显偏移,这些进程共同作用减少NaCl对细胞的毒害作用,为木霉菌的耐盐机理研究提供重要信息。 展开更多
关键词 哈茨木霉 NACL 转录组 代谢组 耐盐机理
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