绵羊多羔主效基因FecB研究、检测及应用

绵羊是重要的家畜,其产羔数是影响养羊业经济效益的关键因素。FecB基因是目前已知调控绵羊产羔数的主效基因之一,其效应位点检测及应用在提升绵羊年出栏率和羊肉产量、加快多羔肉羊新品种培育以及提高规模化羊场养殖效益等方面发挥着重要作用。本文对绵羊多羔主效基因FecB的发现及定位、群体分布与起源、调控绵羊多羔的作用机制、检测方法的建立和发展及其在多羔肉羊育种中的应用进行了综述,以期为绵羊育种和养殖相关从业者提供参考。

抗氧化剂在家禽精液储存中的应用研究进展

家禽精液储存对于种质资源的保护和维持家禽养殖业的可持续发展至关重要。家禽精子独特的结构特征,使得其在储存过程中特别容易受到氧化应激损伤,抗氧化系统失衡,导致精子活力和受精能力的下降。因此,为保证精子正常功能,可通过额外添加不同类型的抗氧化剂来降低损伤。本综述旨在介绍家禽精子结构特征及其抗氧化系统特点,并总结了抗氧化剂在家禽精液储存中的应用与效果,以期为家禽精液储存技术研究提供参考。

延长产蛋周期对白来航鸡和北京油鸡淘汰鸡屠宰性能和肉品质的影响

试验旨在研究延长不同品种鸡产蛋周期对其淘汰鸡的屠宰性能、肉品质和肌肉主要营养成分含量的影响。试验选取52、72和100周龄的北京油鸡和白来航鸡母鸡,比较不同品种不同淘汰周龄各指标的差异。结果显示:延长产蛋周期对两品种体重无显著影响(P>0.05)。100周龄北京油鸡半净膛重与52周龄无显著差异(P>0.05),但显著高于72周龄(P<0.05),全净膛重显著高于52和72周龄(P<0.05)。100周龄白来航鸡腹脂重和腹脂率显著低于72周龄(P<0.05),北京油鸡也有类似趋势。此外,北京油鸡胸肌滴水损失和蒸煮损失分别为3.10%~4.77%和13.50%~18.90%,均高于白来航鸡(P>0.05)。胸肌主要营养成分水分、粗蛋白质、总饱和脂肪酸和总不饱和脂肪酸等在品种间和周龄间均无显著差异(P>0.05)。研究表明,延长产蛋周期对北京油鸡和白来航鸡的体重和主要营养成分没有显著影响,但显著降低高产蛋鸡的腹脂重和腹脂率,改善胴体组成。

两个品种山羊MTNR1A基因组织表达差异研究

大部分山羊表现出季节性发情繁殖特点,但其分子遗传机理尚不清楚。近年来,越来越多的研究结果提示,哺乳动物的季节性繁殖与MTNR1A基因有关。为探明山羊MTNR1A基因的作用,采用荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对常年发情的济宁青山羊和季节性发情的辽宁绒山羊下丘脑-垂体-卵巢繁殖轴组织中MTNR1A基因mRNA的表达差异进行了对比分析。组织表达谱结果发现,MTNR1A m RNA在两品种山羊的下丘脑、大脑皮层、海马体、卵巢和辽宁绒山羊垂体中均有表达。荧光定量PCR结果分析发现,MTNR1A基因在两品种山羊下丘脑中的表达量较高(P<0.05),在卵巢中有一定的表达,而在垂体中的表达量较低;在辽宁绒山羊下丘脑和卵巢中MTNR1A基因的表达量高于济宁青山羊(P>0.05)。提示MTNR1A基因可能与山羊季节性繁殖调控有关,值得进一步深入研究。

种公鸡繁殖性能调控机制的研究进展

在现代养禽业中,公鸡在繁育体系中占据着举足轻重的地位,该文综述了公鸡的生殖生理特征,以及遗传、营养、饲养模式与环境条件等因素对公鸡精液品质和繁殖性能的影响,以期为种公鸡繁殖性能的选育、管理和性能调控提供参考。

单细胞转录组测序技术在家养动物中的应用

单细胞转录组测序技术(single cell RNA sequencing,scRNA-seq)可以能够以高精度分辨率鉴定单个细胞类型和细胞状态,打破普通转录组测序(bulk RNA sequencing,RNA-seq)无法探究目标细胞具体表达特征的困境,在各个领域的探索中起到重要作用,目前广泛应用于人类及小鼠发育生物学、肿瘤学、免疫学、复杂疾病、肠道微生物组及临床应用等诸多领域。近年来,scRNA-seq在畜牧业领域也开展了一些开创性的研究并获得了一系列的成果,主要集中在动物繁殖性能、胚胎发育、关键性状解析等方面,但相较于在人类上的应用还较为薄弱,在其他领域的应用也仍有待深入。本文主要综述了scRNA-seq的工作流程及其在家养动物中应用的研究进展,以期为提高scRNA-seq分析效率以及在家养动物中的创新应用提供参考。

利用CRISPR/Cas9编辑系统构建ACTA1基因敲除的PEFs细胞系

【目的】利用CRISPR/Cas9技术获得α-肌动蛋白1(actin alpha 1,ACTA1)基因敲除的猪胎儿成纤维细胞(porcine embryo fibroblasts, PEFs),为后续在细胞水平上探究猪ACTA1基因功能及发掘友好基因座位奠定基础。【方法】通过实时荧光定量PCR检测ACTA1基因在巴马小型猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背部皮下脂肪和背最长肌7种组织中的表达情况;利用CRISPOR在线网站在猪ACTA1基因第7外显子区域设计3条向导RNA(single guide RNA,sgRNA),并将其连接至pX330载体;通过T7E1酶切检测不同sgRNA活性,选择效率较高且符合目标的载体质粒共转染至PEFs中;利用有限稀释法筛选单克隆细胞,并对获得的单克隆细胞进行基因型鉴定和脱靶分析。【结果】实时荧光定量PCR结果表明,ACTA1基因在背最长肌中的表达量极显著高于其他组织(P<0.01)。设计的3条sgRNA的基因编辑效率分别为24.87%(sgRNA1)、39.59%(sgRNA2)、36.93%(sgRNA3),综合切割位置和基因编辑效率,选用sgRNA1和sgRNA2共转染细胞。基因型鉴定结果表明,获得的69株单克隆细胞中有20株单克隆细胞发生了编辑,其中单等位基因片段敲除细胞3株,双等位基因片段敲除细胞1株,片段敲除效率为5.8%(4/69)。脱靶分析结果显示,在预测的脱靶位点未检测到脱靶效应。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑系统成功构建了ACTA1基因纯合敲除的PEFs,研究结果为进一步探究ACTA1基因对猪骨骼肌发育调控提供了技术支撑和理论基础,同时为挖掘猪组织特异性表达的友好位点提供新思路。

不同绵羊群体多羔主效基因FecB的检测

为分析FecB基因在不同绵羊群体中的分布情况以及对产羔数的影响,利用TaqMan探针分型技术检测了27 774只不同绵羊群体的FecB基因,结合12 304只个体的前3胎产羔数据,探索多羔主效基因FecB在提高绵羊繁殖力方面的重要作用。分型结果显示,湖羊群体含有最高的B等位基因频率,达0.90以上,且随着群体中湖羊血统含量的增加B等位基因频率也增加。湖羊、皮山红羊、杜湖杂交羊、杜湖(♂)×湖羊(♀)杂交羊以及利用湖羊培育的鲁中肉羊FecB基因的不同基因型产羔数间均存在极显著差异(P <0.01)。这不仅展示了FecB基因对于绵羊产羔数的重要影响,也显示出通过引入本土绵羊FecB基因改良肉用品种繁殖力的可行性和潜力。

miR-535靶向GAB2基因通过激活PI3K/AKT信号通路促进山羊颗粒细胞增殖

【背景】MicroRNA(miRNA)是长度为18—25 nt的短RNA分子,在哺乳动物卵巢颗粒细胞调控卵泡发育过程中起着重要作用。团队前期对云上黑山羊高、低产羔数个体卵巢转录组测序结果显示,miR-535能够影响山羊产羔数,但具体调控机制尚不清楚。【目的】通过研究miR-535靶向GAB2(GRB2 associated binding protein 2)及其相关信号通路PI3K/AKT对山羊颗粒细胞增殖的影响,进一步探讨其分子生物学调控机制。【方法】在本研究中,选择具有两胎以上产羔记录的高、低产云上黑山羊各3只,同期发情处理后采集卵泡期卵巢组织,收集原代颗粒细胞。使用荧光定量PCR(reverse transcription-quantitativePCR,RT-qPCR)检测miR-535和GAB2在云上黑山羊高、低产卵巢组织中的表达量。构建GAB2的过表达/干扰载体,使用RT-qPCR、Western blot、免疫荧光、CCK8、EdU和细胞凋亡检测候选基因GAB2对山羊卵巢颗粒细胞增殖的影响。使用miRDB和miRanda软件预测miR-535和GAB2的靶向关系,构建GAB2的野生型和突变型载体,利用双荧光素酶活性检验检测miR-535和GAB2的靶向关系。构建过表达/干扰miR-535载体,探究其颗粒细胞增殖及下游基因功能的影响。【结果】RT-qPCR结果显示,GAB2在高产云上黑山羊卵巢组织中的表达量显著低于低产个体,miR-535的表达则相反(P<0.05);随后,RT-qPCR和Westernblot结果表明,在颗粒细胞中过表达GAB2后,CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著升高(P<0.05),BAX的表达量显著降低(P<0.05),抑制其表达则与之相反;EdU和CCK8检测显示,GAB2过表达后显著促进颗粒细胞增殖(P<0.05),抑制其表达后则相反;双荧光素酶报告试验表明,miR-535抑制了GAB2基因3’UTR区域的双荧光素酶活性。RT-qPCR和Western blot结果显示,在颗粒细胞中过表达miR-535后,GAB2、CCND2、CDK4和BCL2的表达量显著降低(P<0.05),BAX的表达量显著升高(P<0.05),抑制其表达后则与之相反;EdU和CCK8检测显示,miR-535过表达后抑制颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反;细胞凋亡试验表明,miR-535过表达后促进颗粒细胞增殖,抑制其表达后则相反。在颗粒细胞中抑制miR-535后,发现PI3K/AKT信号通路标志因子AKT1的表达水平显著升高(P<0.05)。【结论】miR-535通过抑制GAB2的表达,抑制了山羊颗粒细胞的增殖,为进一步探究miR-535调控山羊颗粒细胞的生物学功能提供了理论依据。