一种适用于PCR扩增的甜菜干种子DNA快速提取方法的研究

为了寻求一种快速提取甜菜DNA的方法,不经液氮研磨,利用改良CTAB法对甜菜干种子进行了DNA的提取,通过降低水浴时间及利用冰浴快速析出DNA,减少了提取的时间。提取的DNA经0.8%的琼脂糖检测,DNA条带完整,没有降解,经与λDNA进行比对,每毫克干种子可提取DNA大约50 ng,利用SSR引物BvATT1及SRAP引物组合(me1,em2)对提取的DNA进行扩增,用6%的非变性聚丙烯酰胺进行检测,结果条带清晰,特异性强。试验结果表明,利用改良CTAB法完全可以从甜菜干种子中提取到符合甜菜分子试验要求的DNA。本研究首次利用改良CTAB法从甜菜干种子中提取到了高质量的DNA,建立了快速提取甜菜DNA的体系,为分子标记将来在甜菜品种指纹图谱构建及辅助育种等方面的应用奠定了坚实的基础。

甜菜EST-SSR引物的快速筛选

为了快速从甜菜EST-SSR引物中筛选出适合甜菜分子生物学的引物,利用12个不同的甜菜品种对80对甜菜EST-SSR引物进行扩增,同时设置12个不同的退火温度,利用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶对PCR产物进行分离。结果表明:80对EST-SSR引物虽然均能够扩增出产物,但绝大部分引物扩增的条带由于没有多态性或者条带难以辨别而不能够使用,只有13对引物扩增出了清晰、易于识别的条带,有4对引物多态性较高,其余9对引物多态性均较低,而梯度退火温度则表明,退火温度对EST-SSR引物影响不大,只有个别引物会在较低退火温度条件下产生非特异性的条带,因此将所有引物的退火温度均设定为60℃。利用不同品种以及梯度退火温度可以实现EST-SSR引物的快速筛选,但要想筛选出多态性高的引物还需要对更多的EST-SSR引物进行筛选。