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宿主细胞磷酸甘油酸变位酶5调控A型流感病毒复制机制的研究
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作者 王雨琴 李奇兵 +8 位作者 王波 王一涵 刘旭伟 单智博 王一晗 李梦雅 李呈军 陈化兰 姜丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期885-894,922,共11页
为探究宿主因子磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)调控A型流感病毒复制的机制,本研究设计并合成PGAM5 siRNA和阴性对照Scrambled siRNA(NC siRNA),将二者分别转染A549细胞后,采用荧光定量PCR(qPCR)和western blot(WB)检测该siRNA的干扰效果,利... 为探究宿主因子磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)调控A型流感病毒复制的机制,本研究设计并合成PGAM5 siRNA和阴性对照Scrambled siRNA(NC siRNA),将二者分别转染A549细胞后,采用荧光定量PCR(qPCR)和western blot(WB)检测该siRNA的干扰效果,利用细胞活力试剂盒检测下调PGAM5表达对细胞活力的影响。结果显示,与转染NC siRNA的阴性对照细胞相比,PGAM5 siRNA能够极显著抑制PGAM5在A549细胞中的转录及表达水平(P<0.001、P<0.01)且对细胞活力基本无影响。为探究PGAM5对流感病毒复制的影响,将PGAM5siRNA和NC siRNA分别转染A549细胞36 h后经流感病毒A/WSN/1933(WSN,H1N1)株感染,分别于感染后24 h、48 h及72 h收获上清经噬斑滴定测定各组细胞中的病毒滴度;分别于感染后3 h~5 h采用WB检测病毒各蛋白的表达水平。结果显示,与阴性对照细胞相比,随着感染时间的延长,转染PGAM5 siRNA细胞中的病毒滴度均极显著下降(P<0.001),尤其在转染后72 h病毒滴度下降最多;且该细胞中流感病毒PB2、PB1、PA、HA、NP、NA、M1和NS1蛋白的表达水平均呈下降趋势,以感染后3 h上述蛋白表达水平的降低最为显著。为探究PGAM5调控流感病毒复制的机制,将PGAM5 siRNA和NC siRNA分别转染A549细胞,36 h后以MOI 10 WSN株感染细胞,1 h后分别采用WB检测病毒NP蛋白的表达水平,分析PGAM5对流感病毒吸附和内吞的影响,并于感染后0、3 h、4 h及5 h通过激光共聚焦试验检测细胞内病毒NP蛋白的定位,以确定下调PGAM5对流感病毒vRNP复合体入核及出核的影响,采用Image J统计含病毒NP蛋白的细胞在v RNP复合体入核及出核中的比例。结果显示,与对照组相比,下调PGAM5基因的表达后,吸附在细胞表面或内吞进入各组细胞中的病毒粒子中NP蛋白的表达水平均无显著差异。激光共聚焦观察可见,在下调PGAM5表达的细胞中,病毒NP蛋白先定位于细胞表面,再向细胞核内聚集,而后完成出核、最后定位在细胞质中,与阴性对照细胞结果一致;但在该组细胞中,病毒NP蛋白趋向出核以及完成出核的细胞比例均显著低于阴性对照细胞(P<0.05)。将p CAGGS、pCAGGS-PGAM5及pCAGGS-PGAM5+pCAGGS-Importinα1/3/5/7-Flag/PGAM5和pCAGGS-PGAM5、pCAGGS-Importinβ1-Flag以及pCAGGS-PGAM5+pCAGGS-Importinβ1-Flag分别转染HEK293T细胞,24 h后利用Co-IP试验检测PGAM5与核输入蛋白的相互作用;将pCAGGS-PGAM5、pCAGGS-NS2-Flag及pCAGGS-PGAM5+pCAGGS-NS2-Flag和pCAGGS-PGAM5、pCAGGS-M1-Myc及pCAGGSPGAM5+pCAGGS-M1-Myc分别转染HEK293T细胞,24 h后经Co-IP试验检测PGAM5与核输出蛋白的相互作用。结果显示,PGAM5与核输入蛋白Importinα1/α3/α5/α7及Importinβ1及核输出蛋白M1/NS2均无相互作用。提示,宿主因子PGAM5可能并非通过与M1/NS2的互作调控流感病毒vRNP复合体的出核。本研究首次报道宿主因子PGAM5可以促进流感病毒的复制,且其主要参与调控流感病毒vRNP复合体的出核过程。本研究为深入了解PGAM5蛋白功能奠定了研究基础,也为流感的防控提供了新思路。 展开更多
关键词 流感病毒 复制 磷酸甘油酸变位酶5
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猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征混合感染的诊断与防制 被引量:15
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作者 朱庆虎 刘正有 +4 位作者 尹长海 黄骏明 王翠兰 蔡雪晖 刘明团 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期472-473,共2页
关键词 猪瘟 猪繁殖与呼吸综合征 混合感染 诊断 防制
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鹅细小病毒HG5/82株的分离鉴定及生物学特性的研究 被引量:23
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作者 李桂霞 刘胜旺 +2 位作者 孔宪刚 谷守林 冉多良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期196-201,共6页
本研究通过对1982年黑龙江某鹅场发生的鹅细小病毒病疑似病例的肝病变组织病毒分离,进行回顾性研究。将肝脏加PBS研磨后,-70℃/37℃反复冻融三次,除菌过滤后接种12日龄鹅胚。发现病毒对鹅胚的致死时间为5~6d,胚体体表有轻微出血点。鹅... 本研究通过对1982年黑龙江某鹅场发生的鹅细小病毒病疑似病例的肝病变组织病毒分离,进行回顾性研究。将肝脏加PBS研磨后,-70℃/37℃反复冻融三次,除菌过滤后接种12日龄鹅胚。发现病毒对鹅胚的致死时间为5~6d,胚体体表有轻微出血点。鹅胚尿囊液经磷钨酸染色,可见具有典型特征的细小病毒粒子。将该病毒尿囊液在12日龄鹅胚中连续传16代,随着传代次数的增加,胚体多集中在3~4d死亡。病毒传至第三代时死亡胚体头、颈、背部出现较为严重的出血点,体表有水肿。第五代病毒尿囊液(命名为HG5/82)对12日龄鹅胚的ELD50为10-5.92/0.1mL。将20只12日龄雏鹅分为三个试验组和一个阴性对照组,各组分别接种鹅胚尿囊液104.92ELD50、103.92ELD50、102.92ELD50及生理盐水,发现雏鹅接种HG5/82后4d出现轻微腹泻,随后恢复正常。用套式PCR检测雏鹅肛拭子病毒的体外排放情况。发现三个试验组在接种病毒后1~20d用套式PCR均可检测到病毒。对照组及试验组接种后20~56d没有检测到病毒。将套式PCR产物进行序列测定并于参考毒株进行比较,表明该序列具有GPV相应区域的共同分子特征,与GPV参考毒株B的相应序列同源性达93.6%。本研究结果表明,该分离毒株为典型的鹅细小病毒(GooseParvovirus,GPV),对雏鹅的致病力较弱。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 分离 鉴定 生物学特性 小鹅瘟
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H5N1禽流感病毒感染雏鸡免疫器官细胞因子的变化 被引量:7
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作者 郑世民 高雪丽 +1 位作者 刘超男 刘明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期755-760,共6页
为探讨细胞因子在禽流感免疫发病机制中的作用,应用细胞培养技术和细胞因子活性检测方法,通过对胸腺和脾脏IL-2、IFN和TNF3种细胞因子的检测,研究不同日龄(7和21日龄)SPF雏鸡感染禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)后,上述被检指标... 为探讨细胞因子在禽流感免疫发病机制中的作用,应用细胞培养技术和细胞因子活性检测方法,通过对胸腺和脾脏IL-2、IFN和TNF3种细胞因子的检测,研究不同日龄(7和21日龄)SPF雏鸡感染禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)后,上述被检指标的动态变化,结果发现,无论是7日龄,还是21日龄SPF雏鸡感染AIV后,其免疫器官胸腺和脾脏的IL-2和IFN诱生活性均有不同程度的降低,而TNF活性升高;但不同日龄雏鸡之间被检细胞因子,其降低或升高程度不论持续时间还是量也不完全相同,该研究不但表明细胞因子在禽流感免疫、发病中具有十分重要的调节作用,而且也与雏鸡感染年龄存在一定相关性。 展开更多
关键词 H5N1亚型禽流感病毒 雏鸡 免疫器官 细胞因子
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鸡传染性支气管炎病毒国内分离D971株5a、5b及核蛋白基因的分子特征 被引量:12
5
作者 刘玉芬 荣骏弓 +3 位作者 刘胜旺 孔宪刚 刘丽玲 刘宝全 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期81-87,共7页
本研究参照已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (Infectiousbronchitisvirus ,IBV)基因序列 ,设计合成了一对引物 ,经反转录_聚合酶链式反应 (ReverseTranscription_PolymeraseChainReaction ,RT_PCR)技术扩增得到了IBV国内分离株D971的 5a... 本研究参照已发表的鸡传染性支气管炎病毒 (Infectiousbronchitisvirus ,IBV)基因序列 ,设计合成了一对引物 ,经反转录_聚合酶链式反应 (ReverseTranscription_PolymeraseChainReaction ,RT_PCR)技术扩增得到了IBV国内分离株D971的 5a、5b与核蛋白 (Nucleocapsid ,N)基因 ,片段长约 1.7kb ,并将该基因进行了克隆和序列测定。与国内外部分已发表毒株比较表明 :D9715a基因与Beau、CU_T2、D14 6 6、DE0 72及SD/97/0 2毒株的 5a基因核苷酸序列同源性在 85 .9%~ 93.9%之间 ,氨基酸序列同源性为 78.5 %~ 93.8% ;D9715b基因与上述毒株的 5b基因核苷酸序列同源性在 91.6 %~ 96 .8%之间 ,氨基酸序列同源性为 87.8%~ 93.9% ,比 5a基因保守 ;N基因与Beau、CU_T2、Ark99、M4 1、H5 2、VicS、SD/97/0 2、X、HB、DB及ZJ971毒株的核苷酸序列同源性为 87.0 %~ 91.5 % ,氨基酸序列同源性为 89.7%~ 93.6 %。对文献报道的N基因三个保守位置同源性比较发现 ,D971N基因第 198~ 2 6 4位核苷酸及其推导的氨基酸与上述 11株毒株的相应区域同源性分别为 86 .6 %~ 92 .5 %和 90 .5 %~ 10 0 % ;第 5 4 3~ 70 2位核苷酸及其对应的氨基酸序列同源性分别为 79.4 %~ 90 .6 %和 83.3%~ 96 .3% ;第 993~ 112 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 5a、5b与N基因 分子特征
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Designing Primers for H5 and H7 Subtypes of Avian Influenza Virus and Multiplex RT-PCR Amplification 被引量:5
6
作者 张文慧 郭华 +2 位作者 王伟利 刘明 钱爱东 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2008年第1期15-17,共3页
[Objective] The research aimed to design primers that are suitable for detecting H5 and H7 subtypes of avian influenza virus (AIV) ; [Method] DNAStar was used to analyze the homology of the sequences of H5 and H7 su... [Objective] The research aimed to design primers that are suitable for detecting H5 and H7 subtypes of avian influenza virus (AIV) ; [Method] DNAStar was used to analyze the homology of the sequences of H5 and H7 subtypes of AIV accessed in GenBank, and design primers( by Primer Premier 5.0) on high homologous region of these sequences, and then amplified by RT-PCR. [Result] The multiplex RT-PCR amplification, agarose gel electrophoresis and sequencing results showed that the self-designed primers are successful for detecting AIV. [Conclusion] It is feasible to rapidly diagnose AIV through this method. 展开更多
关键词 Avian influenza virus Primer Premier 5.0 DNAStar Multiplex RT-PCR amplification
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禽流感病毒H5亚型及H7亚型基因的引物设计与多重RT-PCR扩增 被引量:3
7
作者 张文慧 郭华 +2 位作者 王伟利 刘明 钱爱东 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第16期6689-6690,共2页
[目的]设计能用于多重RT-PCR扩增禽流感病毒H5、H7亚型基因的引物。[方法]在GenBank中搜索H5、H7亚型禽流感病毒的基因序列,并利用DNAStar分析其同源性,采用Primer Premier 5.0软件设计引物。[结果]多重RT-PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳及测... [目的]设计能用于多重RT-PCR扩增禽流感病毒H5、H7亚型基因的引物。[方法]在GenBank中搜索H5、H7亚型禽流感病毒的基因序列,并利用DNAStar分析其同源性,采用Primer Premier 5.0软件设计引物。[结果]多重RT-PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳及测序结果显示引物设计成功。[结论]该方法用于禽流感病毒的快速诊断是可行的。 展开更多
关键词 禽流感病毒 PRIMER Premier 5.0 DNAStar 多重RT-PCR
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实验性慢性氟中毒家兔肝、肾动态超微病理学研究 被引量:2
8
作者 曲连东 褚桂芳 +2 位作者 滕国麟 张伟木 杨贵军 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 1994年第4期360-365,共6页
24只20~30日龄体重0.7~1.2kg新西兰白兔随机分为实验组15只(每日每只随饮水摄取NaF45mg/kg体重)及健康对照组9只(饮用自来水).两组在相同饲养管理条件下实验观察.分别在实验第30,60.90d时... 24只20~30日龄体重0.7~1.2kg新西兰白兔随机分为实验组15只(每日每只随饮水摄取NaF45mg/kg体重)及健康对照组9只(饮用自来水).两组在相同饲养管理条件下实验观察.分别在实验第30,60.90d时迫杀,对肝和肾进行超微病理学研究.结果表明,肝和肾实质细胞膜系统损伤明显,胶原原纤维再生增多,且有再生障碍及再生后的损伤性变化. 展开更多
关键词 慢性 氟中毒 病理学 家兔
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正二十面体和二十面体对称病毒 被引量:3
9
作者 王继科 褚桂芳 +4 位作者 吴东来 尹训南 刘洪 蔡虹 曲连东 《生物技术》 CAS CSCD 1992年第3期9-12,共4页
本文从结晶学和拓扑学角度出发,分析了正二十面体的结构特征,并分别阐述了二十面体对称病毒的“准晶体构筑的二十面体原理”和二十面体上的点与球面上的点的拓扑等价关系.并且,在可单纯剖分的基础上,对其二十面体病毒的拓扑表面和三角... 本文从结晶学和拓扑学角度出发,分析了正二十面体的结构特征,并分别阐述了二十面体对称病毒的“准晶体构筑的二十面体原理”和二十面体上的点与球面上的点的拓扑等价关系.并且,在可单纯剖分的基础上,对其二十面体病毒的拓扑表面和三角形剖分数给予了详细的描述. 展开更多
关键词 正二十面体 拓扑等价 立体对称病毒
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新城疫病毒F48E9株V基因的表达及其抗血清的制备 被引量:2
10
作者 韩放 闫丽辉 +2 位作者 曹殿军 刘培欣 李景鹏 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期357-361,共5页
采用PCR方法从鸡源新城疫病毒(NDV)强毒F48E9株P基因重组质粒中扩增出了V 基因全长cDNA,并引进相应的突变位点,将其克隆到pMD18-T载体,然后亚克隆到原核表达载体 pET-30c上,重组质粒经酶切、PCR鉴定及测序,筛选出阳性重组质粒,并命名为p... 采用PCR方法从鸡源新城疫病毒(NDV)强毒F48E9株P基因重组质粒中扩增出了V 基因全长cDNA,并引进相应的突变位点,将其克隆到pMD18-T载体,然后亚克隆到原核表达载体 pET-30c上,重组质粒经酶切、PCR鉴定及测序,筛选出阳性重组质粒,并命名为pET-30c-V。将 pET-30c-V转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/L IPTG 37℃过夜诱导表达,SDS-PAGE 及Western-blotting分析结果表明,所表达的NDV V重组蛋白主要以包涵体形式存在,分子质量约28 ku,与理论值大小相符。将包涵体用8 mol/L脲变性,经Ni-NTA柱纯化,透析复性,得到纯化的V蛋白。用复性后的V蛋白免疫21日龄SPF鸡(300 μg/只),成功制备了抗鸡NDV V蛋白的抗血清。 展开更多
关键词 新城疫病毒 V基因 原核表达
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禽流感病毒H5、H7和H9亚型基因的引物设计与多重RT-PCR扩增 被引量:2
11
作者 张文慧 王伟利 +1 位作者 刘明 钱爱东 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第6期69-70,共2页
PCR技术是分子生物学领域最基本也是最重要的技术手段之一。然而,找到一对合适的核苷酸片段作为引物,使其有效地扩增模板DNA序列,决定着PCR的成败。在GENEBANK中搜索H5、H7和H9亚型禽流感病毒的血凝素基因序列,并利用DNAStar软件分析它... PCR技术是分子生物学领域最基本也是最重要的技术手段之一。然而,找到一对合适的核苷酸片段作为引物,使其有效地扩增模板DNA序列,决定着PCR的成败。在GENEBANK中搜索H5、H7和H9亚型禽流感病毒的血凝素基因序列,并利用DNAStar软件分析它们的同源性,利用Primer Premier5.0软件进行引物设计。多重RT-PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳结果显示引物设计成功。 展开更多
关键词 禽流感病毒 引物设计 多重RT—PCR
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一株溶原性鸡大肠杆菌的分子特征鉴定 被引量:3
12
作者 李鹤 李兆利 +1 位作者 刘思国 倪宏波 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第4期27-29,共3页
为了鉴定和了解实验室保存的1株溶原性鸡大肠杆菌的病原学特性,试验对其遗传进化和基因型等进行了分子特征鉴定。结果表明:鸡大肠杆菌Leco13的16S rRNA与大肠杆菌K12标准株16S rRNA部分序列的同源性达到了99%;用MLST分型特异引物对菌株... 为了鉴定和了解实验室保存的1株溶原性鸡大肠杆菌的病原学特性,试验对其遗传进化和基因型等进行了分子特征鉴定。结果表明:鸡大肠杆菌Leco13的16S rRNA与大肠杆菌K12标准株16S rRNA部分序列的同源性达到了99%;用MLST分型特异引物对菌株的基因型进行鉴定,发现该菌株属于ST10型。同时参考其他文献中的噬菌体提取方法,对分离株进行了噬菌体的提取,成功提取噬菌体DNA后,用EcoRⅠ和HindⅢ进行酶切鉴定并获得了较为清晰的酶切图谱。 展开更多
关键词 禽病原性大肠杆菌 16S RRNA MLST序列分型 噬菌体分离 酶切鉴定
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我国猪流感研究最新概况 被引量:8
13
作者 李海燕 辛晓光 +2 位作者 杨焕良 陈化兰 于康震 《畜牧兽医科技信息》 2003年第2期9-12,共4页
猪流感(Swine Influenza,SI)是由正粘病毒科猪流感病毒(SIV)引起的一种急性、高度接触传染性的猪呼吸道疾病,临床以突发、咳嗽、呼吸困难、发热、衰竭、迅速康复或死亡为特征.该病呈地方性流行,可发生于各年龄和各品种猪,发病率高达100%.
关键词 猪流感 研究概况
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猪瘟发生的原因与对策 被引量:4
14
作者 朱庆虎 戴杰 +1 位作者 黄骏明 王翠兰 《预防兽医学进展》 2001年第4期40-43,共4页
猪瘟(Hog cholera,HC或Swine fever,SF)是一种高度接触性传染、给养猪业造成重大经济损失的A类传染病.其病原为猪瘟病毒(HCV或SFV),在分类学上属黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pstivirus)成员,为二十面体.有囊膜的正链RVA病毒[1],猪... 猪瘟(Hog cholera,HC或Swine fever,SF)是一种高度接触性传染、给养猪业造成重大经济损失的A类传染病.其病原为猪瘟病毒(HCV或SFV),在分类学上属黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pstivirus)成员,为二十面体.有囊膜的正链RVA病毒[1],猪是该病毒唯一的自然宿主.自1833年在美国俄亥俄州(Ohio)首先发现猪瘟以来,一直呈世界性分布,但是越来越多的国家已经成功地净化了该病毒.目前没有该病的国家有:澳大利亚、比利时、加拿大、法国、冰岛、新西兰、葡萄牙、北欧国家、西班牙、瑞典和美国[1].20世纪60年代以前,该病在我国流行也极为普遍.60年代后期,经过广大兽医工作者卓有成效的研究工作,并采取有效的综合防制措施,我国在猪瘟防治方面取得显著成绩,猪瘟大面积流行已得到很好的控制. 展开更多
关键词 猪瘟 发生原因 对策
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关于企业实行内部控制制度的几点建议 被引量:3
15
作者 王娜 范婧敏 张莹 《中小企业管理与科技》 2008年第1期11-12,共2页
转变经营观念,增强控制意识,提高管理水平,是我国企业迎接市场竞争的基本前提。在以往公司改革中,片面强调改革组织结构的重要性,忽视了控制方式的跟进和强化,结果是公司的改革同微观治理机制相脱离。本文结合企业管理实际情况,提出了... 转变经营观念,增强控制意识,提高管理水平,是我国企业迎接市场竞争的基本前提。在以往公司改革中,片面强调改革组织结构的重要性,忽视了控制方式的跟进和强化,结果是公司的改革同微观治理机制相脱离。本文结合企业管理实际情况,提出了企业实行内部控制制度的几点建议。 展开更多
关键词 内部控制 现状 建议
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多重反转录聚合酶链式反应检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒的研究
16
作者 张文慧 王伟利 +2 位作者 郑聪 刘明 钱爱东 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期95-98,共4页
利用多重反转录聚合酶链式反应同时检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒.在GenBank中搜索H5、H7和H9亚型禽流感病毒(AIV)的血凝素基因序列,并利用DNAStar软件分析其相似性,利用Primer Premier 5.0软件设计3对分别针对AIV H5、H7和H9亚型的特... 利用多重反转录聚合酶链式反应同时检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒.在GenBank中搜索H5、H7和H9亚型禽流感病毒(AIV)的血凝素基因序列,并利用DNAStar软件分析其相似性,利用Primer Premier 5.0软件设计3对分别针对AIV H5、H7和H9亚型的特异性引物.这3对引物所扩增的cDNA片段大小分别为427、228和830 bp.结果表明,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了同时检测H5、H7和H9亚型AIV的多重RT-PCR技术.该多重RT-PCR对H5、H7和H9亚型AIV能同时扩增出3条大小分别为427、228和830 bp的cDNA片段,与其他常见禽病病原的核酸不存在交叉反应.该多重RT-PCR对H5、H7和H9亚型AIV cDNA的最低检出量分别为10 pg、1 ng和10 pg. 展开更多
关键词 多重反转录聚合酶链式反应 禽流感病毒 H5亚型 H7亚型 H9亚型
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马传贫病毒基因组转录图谱的研究
17
作者 刘相冬 张宝山 +5 位作者 孙成群 刘永刚 周家喜 王凯波 刘建华 孔宪刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期68-,共1页
EIAV和HIV-1、FIV等病毒均属慢病毒属成员,这些病毒在基因组结构、复制的分子机制、抗原漂移及病毒与宿主的相互作用等方面都十分相似。在慢病毒基因转录过程中,首先形成一个与病毒基因组等长的mRNA,然后经过不同方... EIAV和HIV-1、FIV等病毒均属慢病毒属成员,这些病毒在基因组结构、复制的分子机制、抗原漂移及病毒与宿主的相互作用等方面都十分相似。在慢病毒基因转录过程中,首先形成一个与病毒基因组等长的mRNA,然后经过不同方式的拼接,得到长短不一的mRNA,进而出现核表达不同的蛋白。我们知道,慢病毒的基因表达受多种病毒蛋白及细胞核因子的复杂调控,这一过程的改变往往会影响病毒的致病力和繁殖能力。马传贫白细胞弱毒疫苗是目前唯一成功的慢病毒疫苗,因此比较 DLA EIAV的拚接位点及拚接方式与其他毒株的异同,对于揭示 DLA EIAV致弱的分子机制是十分必要的。本研究首先鉴定了 DLA EIAV和 DA EIAV的几个拼接位点和几个转录产物,将这些拼接位点与已报道毒株相比较,发现 DLA EIAV和 DAEIAV外显子3上游拼接位点为新发现的位点信号。同时,Rev的靶序列RRE的核苷酸序列差异较大。在本研究试验条件下,未克隆到DLAEIAV的1、2、4外显子拼接产物及DAEIAV感染动物细胞的1、4外显子拼接产物,这可能由于样品采集时间及病毒体内外繁殖环境差异造成的假阴性结果,但也有一种可能的情况。 展开更多
关键词 马传贫 转录产物 毒株 基因组 染色体组
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核酸疫苗研究进展 被引量:8
18
作者 周方红 《预防兽医学进展》 1999年第3期17-20,共4页
关键词 核酸疫苗 免疫基因 家畜 疫苗
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SYBR Green Ⅰ荧光RT-PCR法检测H5亚型禽流感病毒
19
作者 刘丽玲 王秀荣 +2 位作者 陈化兰 孙凯 魏萍 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2006年第11期13-15,共3页
用2株不同致病力的H5亚型禽流感病毒(AIV)感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,收集感染后6,12,24,48,72 h的病毒,提取总RNA,利用Rotor Gene RG3 000实时定量PCR仪对H5亚型AIV的HA基因进行检测,试图建立快速检测H5亚型AIV的real-ti... 用2株不同致病力的H5亚型禽流感病毒(AIV)感染Madin-Darby canine kidney(MDCK)细胞,收集感染后6,12,24,48,72 h的病毒,提取总RNA,利用Rotor Gene RG3 000实时定量PCR仪对H5亚型AIV的HA基因进行检测,试图建立快速检测H5亚型AIV的real-time RT-PCR方法,并用所建立的方法对来自全国各地的疑似H5亚型AIV的病料和咽喉拭子、泄殖腔拭子346份进行检测。结果表明:农业部动物流感重点开放实验室建立的HA基因的teal-time RT-PCR方法可以检测到细胞培养物中和临床样品中是否含有H5亚型AIV,与常规RT-PCR比较,该方法更加特异、准确、快速。 展开更多
关键词 real—time RT—PCR H5亚型禽流感病毒 HA基因
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兔多杀性巴氏杆菌热休克蛋白60基因的原核表达及抗原性分析
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作者 卢艳 郭东春 +6 位作者 刘家森 原冬伟 姜骞 司昌德 林欢 崔玉东 曲连东 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第4期108-110,共3页
为了研究多杀性巴氏杆菌(P.multocida,Pm)热休克蛋白60(Hsp60)基因表达产物的抗原性,试验根据已发表的Pm 70株序列(AE004439)设计了1对引物,采用PCR技术扩增了兔多杀性巴氏杆菌C51-17株Hsp60的基因序列,将扩增产物与表达载体pPRO-EX-ht... 为了研究多杀性巴氏杆菌(P.multocida,Pm)热休克蛋白60(Hsp60)基因表达产物的抗原性,试验根据已发表的Pm 70株序列(AE004439)设计了1对引物,采用PCR技术扩增了兔多杀性巴氏杆菌C51-17株Hsp60的基因序列,将扩增产物与表达载体pPRO-EX-htb连接,得到重组表达质粒pHT-Hsp60,再用BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定并测序确认正确后,将重组表达质粒pHT-Hsp60转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达,进行SDS-PAGE分析和Western-blot检测。结果表明:SDS-PAGE表达蛋白约为60 ku,与预期的Hsp60分子质量一致;表达产物与兔多杀性巴氏杆菌阳性血清发生特异性反应,说明表达产物具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 HSP60 原核表达
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