基于创建国际一流农业科研机构背景下的后勤改革与创新——以中国农业科学院哈尔滨兽医研究所为例

创建国际一流农业科研机构是中国农业科学院提出的发展目标,一流的机构需要配套的后勤管理做保障。文章根据我国农业科研系统后勤改革的经验和研究所自身的探索实践,以及国外大学、研究所后勤管理的经验和模式,提出了农业研究所后勤改革的思路与分类,包括自管、外包、自管与社会化服务相结合的模式,以及后勤改革的具体措施和注意事项,以期为国际一流研究所的后勤管理提供参考。

加强科研平台建设 提升科技创新能力——以中国农业科学院哈尔滨兽医研究所为例

科研创新平台是提高科研人员创新和实践能力、提升科研机构创新水平的重要载体,强化科研创新平台建设,提高科技创新能力对于促进研究所可持续性发展意义重大。文章以中国农业科学院哈尔滨兽医研究所为例,阐述了科研平台建设的意义和作用,分析了利用科研平台提高科研人员创新能力的效果及目前存在的问题,提出了创新管理机制,提高管理运行水平;强化评价体系建设,完善科学评价方式;注重人才团队建设,激发创新活力等提升科研平台管理水平的措施,以期为加强我国农业科技条件平台建设与管理提供借鉴。

发展中的中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

哈尔滨兽医研究所始建于1948年6月,是新中国建立最早的兽医科研单位。我所隶属于中国农业科学院,坐落在美丽的北国文化名城——哈尔滨市。所区占地面积6.8万多平方米,试验用房建筑面积3.7万多平方米。 哈尔滨兽医研究所的前身是东北行政委员会家畜防治所。1949年改名为东北人民政府农业部兽医研究所,1957年划归刚组建的中国农业科学院领导,定名为中国农业科学院兽医研究所。

守正创新笃行致远——中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

1946年,为支援解放战争和战后恢复生产,原延安光华农场场长陈凌风同志受党中央委派,辗转来到东北解放区.经过一年多的艰苦筹建,于1948年在哈尔滨伪满家畜防疫所的废址上成立了“东北行政委员会农林处家畜防治所”并担任第一任所长.研究所历经多次更名——“东北人民政府农业部兽医研究所”(1949年)、“哈尔滨兽医研究所”(1954年,隶属中央政府农业部)、“中国农业科学院兽医研究所”(1957年,隶属中国农业科学院),于1965年定名为“中国农业科学院哈尔滨兽医研究所”(哈兽研).

哈尔滨兽医研究所获奖著作

1、《畜禽病毒图谱》(李成等),获第五届全国优秀科技图书二等奖(中国新闻出版署,1990)。 2、《家畜传染病学》(哈兽研所),获第六届全国优秀科技图书一等奖,(中国新闻出版署,1992)。

兽医内科学课程教学改革的研究

《兽医内科学》是动物医学专业非常重要的一门专业课，是研究畜禽内部组织、器官非传染性疾病的发生、发展、转归及防治的科学，研究的主要内容是常见、多发、群发病，以研究疾病的发生机理、临床症状和防治方法为重点。它是以动物解剖学、动物生理学、动物微生物与免疫学、动物病理学、动物生物化学、

猪瘟疫苗的研究现状与发展趋势

猪瘟是由猪瘟病毒感染引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,主要特征是发病急、高热稽留和细小血管壁变性,从而引起泛发性小点状出血、梗死和坏死。该病传染性强,病死率高,对养猪业危害巨大。OIE将其列为法定报告疾病,我国将其列为一类动物疫病。猪瘟病毒是其病原体,尽管猪瘟病毒各个毒株的毒力不同,但是它们都使养猪业产生了巨大损失,威胁着全世界的猪肉生产和国家人口的粮食安全。

猪急性腹泻综合征冠状病毒诱导细胞自噬并增强病毒复制的研究

为研究猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)感染细胞是否诱导自噬及自噬对病毒复制的影响,本研究将SADS-CoV(MOI 0.1)接种Vero E6细胞培养36 h后,经透射电子显微镜观察可见,SADS-CoV感染的细胞中出现了包裹胞浆的自噬体样双层膜结构,证实SADS-CoV可以诱导Vero E6细胞发生自噬。构建pEGFP-LC3的真核表达质粒并经双酶切及测序鉴定正确后转染Vero E6细胞,24 h后以SADS-CoV感染,24 h后经激光共聚焦显微镜观察可见,与阴性对照组细胞相比,感染SADS-CoV的细胞出现绿色荧光的点状聚集。进一步将SADS-CoV(MOI 0.1)感染Vero E6细胞不同时间后通过western blot检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达水平的变化,结果显示,与阴性对照组相比,SADS-CoV感染组LC3-Ⅱ的表达水平升高,LC3-Ⅱ/GAPDH比值呈上升趋势,而p62蛋白表达水平则显著降低(P<0.05),表明SADS-CoV感染能够诱导Vero E6细胞产生完整的自噬应答。为了探究自噬对病毒复制的影响,本研究分别采用自噬抑制剂3-MA和自噬诱导剂Rapamycin处理Vero E6细胞后以SADS-CoV感染,于感染后不同时间收获细胞,通过western blot和病毒滴度(TCID_(50))测定检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与仅感染病毒的对照组相比,采用3-MA处理Vero E6细胞后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)均显著降低(P<0.05),而采用Rapamycin处理后SADS-CoV N蛋白的表达水平及TCID_(50)则均显著升高(P<0.05)。针对ATG5基因设计3条特异性的ATG5 si RNA(siATG5-1/2/3),将干扰效率较好的siATG5-1转染Vero E6细胞后再以SADS-CoV感染,24 h后检测病毒滴度并利用western blot检测SADS-CoV N蛋白表达水平的变化。结果显示,与未转染siATG5的3组阴性细胞相比,转染细胞中SADS-CoV N蛋白的表达水平及病毒滴度均显著降低(P<0.05)。本研究首次表明SADS-CoV感染可以诱导宿主细胞自噬并促进病毒的复制,该结果为深入研究SADS-CoV感染与其致病机理以及防控该病毒的感染奠定了基础。

敲除CRFK细胞氨基肽酶N对猫传染性腹膜炎病毒复制影响的研究

猫氨基肽酶N(fAPN)参与猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的感染过程,为研究f APN对FIPV复制的影响,本研究针对f APN第14外显子设计了1对sg RNA,将sg RNA退火后克隆至p X458质粒中,构建同时含有Cas9蛋白和sg RNA的重组质粒。重组质粒经PCR及测序鉴定正确后,瞬时转染猫肾细胞(CRFK)中,24 h后通过流式细胞仪分选带有绿色荧光的单克隆细胞。单克隆细胞经稳定传代培养后,细胞中的绿色荧光消失,对细胞进行PCR和测序,结果显示:3株单克隆细胞在f APN第14外显子有1个碱基的插入,造成移码突变,导致f APN不能正常表达,表明敲除f APN蛋白的CRFK细胞系正确构建,命名为KO-APN14。将FIPV分别感染CRFK细胞及培养20代的KO-APN14细胞,48 h后通过间接免疫荧光试验(IFA)检测FIPV N蛋白的表达;将FIPV分别感染CRFK细胞及KO-APN14细胞,在感染4 h、12 h、24 h、36 h时采用RT-q PCR分别检测FIPV N基因、视黄酸(维甲酸)诱导基因I(RIG-I)、黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)、Toll样受体3(TLR3)、干扰素β(IFN-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)的转录水平。IFA结果显示:感染FIPV的CRFK细胞出现绿色荧光,未感染FIPV的CRFK细胞、未感染FIPV的KO-APN14细胞及感染FIPV的KO-APN14细胞均无绿色荧光;RT-q PCR检测FIPV感染各细胞后病毒N基因的转录水平,结果显示:与感染FIPV的CRFK细胞相比,感染FIPV的KO-APN14细胞能够极显著抑制FIPV N基因的转录(P<0.0001);RT-q PCR检测FIPV感染各细胞后上述各细胞因子的转录水平,结果显示:与感染FIPV的CRFK细胞相比,感染FIPV的KO-APN14细胞能够抑制RIG-I、MDA5、TLR3、IFN-β、IL-6、IL-10、TNF-α及f APN的转录。综上所述,f APN是FIPV在侵入细胞及病毒复制过程中发挥重要作用,并在FIPV引起的炎症反应过程中起关键作用。本研究为f APN在免疫炎症反应中作用的研究提供科学依据,并为培育基因编辑抗病育种猫奠定实验基础。

金银花的生物学功能及其在动物生产中的应用研究进展

金银花(Honeysuckle)最早记载于东晋《肘后备急方》,在我国已有1 000多年的使用历史,是传统的药食同源植物,被广泛应用于医药、食品、化妆品、保健品及畜牧等领域。金银花富含黄酮类、有机酸类、挥发油类和环烯醚萜苷类等多种活性成分,具有抑菌抗炎、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、降低糖脂、调节免疫及保护肝脏等药理功能。金银花作为一种良好的新型饲料添加剂,其功能与饲用抗生素相似,可预防疾病、促进生长和保证肉品质,但目前关于金银花及其提取物在动物生产领域的应用研究相对较少。本文综述了金银花及其提取物的生物学功能以及其在动物生产中的应用,以期为金银花的后续研究及资源的合理开发利用提供参考依据。

稳定表达马NLRP3 HEK293T细胞系的构建及用于马NLRP3炎性小体的研究

为构建稳定表达马NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(eqNLRP3)的细胞系,并用于eqNLRP3炎性小体激活的研究,本研究采用同源重组的方法将经PCR扩增的eqNLRP3和GFP基因克隆至pLPCX中,构建重组表达质粒pLPCX-Flag-eqNLRP3-GFP,经PCR和测序鉴定正确后与pCGP、pVSV-G共转染HEK293T细胞,48 h后获得携带eqNLRP3的慢病毒。将该慢病毒感染HEK293T细胞,并采用嘌呤霉素筛选携带绿色荧光(GFP+)的单克隆细胞。采用western blot鉴定该细胞中eqNLRP3蛋白的表达、反应原性及细胞遗传稳定性。Western blot结果显示在146.1 ku处出现特异性条带,且传至1、4、7、10代的细胞均出现该条带,表明获得稳定表达eqNLRP3蛋白的HEK293T细胞系HEK293Teq NLRP3(2G1细胞)。采用NLRP3特异性激活剂尼日利亚菌素(Nig)处理2G1细胞1 h;将表达质粒pCDNA3.1-eqASC-HA转染2G1细胞,加入Nig处理1 h,采用激光共聚焦显微镜分别观察上述细胞中e NLRP3的聚化状态,及在2G1细胞中表达eqASC后能否形成ASC斑点(eqNLRP3-eqASC的复合物,即NLRP3炎性小体激活的典型特征)。结果显示,正常2G1细胞中呈绿色荧光的eqNLRP3弥散分布于细胞质中,加入Nig后弥散的eqNLRP3在细胞质中形成典型绿色荧光的点状聚集。转染表达eqASC质粒的2G1细胞中出现的红色荧光(eqASC)主要在细胞质中呈弥散性分布;转染表达eqASC的2G1细胞用Nig处理后形成2.5μm的中间呈绿色荧光四周呈红色荧光的典型ASC斑点。上述结果表明2G1细胞可以响应特异性激活剂并诱导eqNLRP3的聚化,招募ASC形成ASC斑点。将本实验室构建的iGLuc报告系统中的4种表达炎性小体蛋白质粒分别与EIV各蛋白对应质粒共转染HEK293T细胞,24 h后利用该报告系统检测各组细胞中的荧光素酶活性;采用western blot检测各共转染细胞中各EIV蛋白的表达对该系统中4种炎性小体蛋白表达的影响,通过上述两个试验筛选能够激活eqNLRP3炎性小体的EIV蛋白。iGLuc报告系统检测结果显示,仅表达EIV M2蛋白质粒的细胞上清中荧光素酶活性显著高于阳性对照组(P<0.05);western blot结果显示,EIV M2蛋白的表达对4种炎性小体蛋白的表达均无明显影响,表明EIV M2蛋白激活了eqNLRP3炎性小体。将表达EIV M2蛋白及表达eqASC的质粒共转染2G1细胞,24 h后经激光共聚焦显微镜观察以进一步验证上述结果。结果显示,该组细胞中带绿色荧光的eqNLRP3出现点状聚集,并招募细胞质中带红色荧光的eqASC形成了ASC斑点,与i GLuc报告系统筛选结果一致。上述结果表明,EIV感染对HEK293Teq NLRP3细胞系中的eqNLRP3产生了聚化效应,并招募ASC形成ASC斑点。本研究建立了稳定表达eqNLRP3蛋白的HEK293T细胞系,为马属动物病原感染激活NLRP3炎性小体的评价奠定了物质基础。

畜牧兽医研究所图书馆管理新理念

本文从畜牧兽医研究所图书馆所处的历史沿革和时代背景,通过分析畜牧兽医研究所图书馆面临的实际困境和当下运转现状,阐明新时代图书馆馆员必须运用新理念来管理图书馆,不断转变服务方式和服务内容,借助网络平台,让图书馆不断焕发生机和活力。

畜牧兽医研究所图书馆在研究生教育和培养中的重要作用

本文主要从专业教育和通识教育这两个方面阐述了畜牧兽医研究所图书馆在研究生教育和培养中的重要作用及其畜牧兽医研究所中存在的重要价值。多读书读好书好读书的读书氛围是当代畜牧兽医研究所必须要有的学习氛围,畜牧兽医科研事业的创新和发展离不开优秀的人才和高质量的图书馆。

2型猪链球菌pnp基因缺失株与回补株的构建及其生物学特性的研究

为研究2型猪链球菌(SS2) pnp基因的生物学功能,本研究通过基因无痕操作技术构建SS2 05ZYH33pnp基因缺失株Δpnp以及回补株CΔpnp,经PCR和测序鉴定结果表明,正确构建了pnp基因无痕缺失株和回补株。将05ZYH33、Δpnp以及CΔpnp分别在不同温度(28℃、37℃、42℃)培养后测定OD_(600nm)值,绘制各菌株的生长曲线;利用革兰氏染色后经镜检及透射电镜观察各菌株的形态结构;通过滴定微孔平板结晶紫法检测各菌株的生物被膜形成能力;采用接触法分析各菌株的溶血特性;于含不同抗生素的THB平板上培养各菌株,分析各菌株的药物敏感性;于氧化条件与酸性条件下培养各菌株,通过统计存活率评价各菌株的氧化耐受与酸耐受能力。结果显示,缺失株的生长速率明显低于野生株和回补株,且在冷应激条件下的生存能力下降;与野生株和回补株相比,缺失株细胞壁肽聚糖层的结构更加松散、溶血能力下降、生物被膜形成能力下降、对不同类型抗生素的敏感性增强、抗氧化与抗酸能力均下降。上述结果表明pnp基因是SS2的一个重要调节因子,参与调节细菌对外界环境变化的适应能力。本研究为科学防控猪链球菌病以及研发新型抗菌药物奠定基础。

2019-2022年中国H6N1亚型禽流感病毒的生物学特性分析

【背景】H6亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)广泛流行于我国南方地区,是我国家禽中最常见AIV之一。H6N1亚型AIV频繁地与其他野鸟源毒株重配,并且可以作为供体为高致病性AIV提供内部基因片段,产生新型重组病毒,进而威胁人类健康。【目的】通过对我国H6N1亚型AIV的演化动态及其相关生物学特性分析研究,为我国禽流感的综合防控提供数据支持。【方法】采集2019—2022年我国25个省(直辖市、自治区)的活禽交易市场及养殖场家禽喉和泄殖腔拭子,通过接种鸡胚分离到7株H6N1亚型AIVs并对其进行全基因组测序,分析其遗传演化特征、受体结合特性及其对SPF鸡和BALB/c小鼠的感染性。【结果】遗传演化分析表明,7株病毒的基因与分离于北美及东南亚地区的野鸟源病毒基因同源性较高,基因来源复杂,具有明显的遗传多样性。贝叶斯演化分析表明,H6亚型AIV HA基因曾发生过多次的跨洲际传播,欧亚谱系病毒在北美地区也有着较长时间流行。1株病毒HA基因与北美地区毒株基因高度同源,根据贝叶斯演化分析结果,推测该病毒在野鸟体内经历了复杂的基因重配后形成,后经野鸟传入我国。特殊氨基酸位点分析结果显示,病毒HA蛋白裂解位点序列均为PQIETR↓GLF,符合低致病性AIV特征;此外,另有1株病毒的NP蛋白发生Y52H突变,据报道,该突变对AIV获得抵抗人干扰素刺激基因BTN3A3的能力起到关键作用。受体结合特性分析表明,部分毒株具有双受体结合特性,但结合人源受体能力弱于结合禽源受体能力。病毒对SPF鸡的感染性试验表明,鸡感染A/chicken/Jiangxi/S40445/2019(H6N1)后能通过呼吸道及消化道排毒,并且病毒可在鸡群内通过接触传播。鸡感染A/duck/Jiangxi/S10941/2019(H6N1)后仅有少数鸡通过呼吸道排毒,病毒无法在鸡群间通过接触传播。BALB/c小鼠的感染性试验表明,H6N1亚型AIV无需提前适应便可在小鼠呼吸道内有效复制,但对小鼠仍呈低致病力。【结论】2019—2022年分离于我国的H6N1亚型AIV基因大部分来源于野鸟源病毒,候鸟可经东亚-澳大利亚迁徙路线将病毒传入我国;部分病毒能够结合人源唾液酸受体并在小鼠呼吸道内有效复制,表明该亚型病毒对公共卫生安全构成潜在威胁。

蛋白质棕榈酰化修饰调控蛋白质功能的研究进展

蛋白质是生命的物质基础,也是基因功能的执行者。蛋白质需要经过基因转录、转录后加工、翻译、翻译后加工及转运等多个复杂过程后才具有生理功能。蛋白质翻译后加工修饰形式包括磷酸化、糖基化、甲基化、羟基化、泛素化及脂质化等[1],其中脂质化修饰是一种重要的翻译后加工修饰形式。

猪源和犬源ELF4蛋白的亚细胞定位比较研究

本研究旨在对比分析猪E74样因子4(sELF4)和犬E74样因子4(cELF4)的亚细胞定位,为深入开展二者功能研究提供依据。利用PCR截短扩增sELF4和cELF4,分别克隆至真核表达载体pEGFP-C1中,构建17个sELF4重组真核表达载体和13个cELF4重组真核表达质粒,转染HeLa细胞、Hoechst33342染色,荧光倒置显微镜观察亚细胞定位,运用生物信息学软件分析其编码氨基酸序列特征。结果表明,sELF4和cELF4蛋白全长均定位在细胞核中,sELF4 196~291 aa(586~873 bp)之间有可能存在两个细胞质核定位信号肽,cELF4的核定位信号肽分布在203~291 aa(607~873 bp),cELF4 292~663 aa(874~1 992 bp)、sELF4 292~662 aa(874~1 989 bp)在细胞中发生聚集现象。cELF4与sELF4氨基酸序列在第169~303位氨基酸之间均高度保守,其他区段均存在不同程度的差异。综上,sELF4蛋白全长和cELF4蛋白全长均定位在细胞核中,截短表达的羧基端功能区有聚集现象,二者的核定位信号肽分布有一定差异。

表达胸腺肽和干扰素融合蛋白的重组乳酸乳球菌作为鸡新城疫病毒活疫苗免疫佐剂的初步研究

为评估以滴鼻方式免疫表达鸡胸腺肽和鸡干扰素融合蛋白的重组乳酸乳球菌能否作为新城疫病毒(NDV)活疫苗的免疫佐剂及对其免疫效力的影响,本研究以表达鸡胸腺肽和鸡γ干扰素融合蛋白(cTα1-cIFN-γ,后简写为Tα1-IFN)的重组乳酸乳球菌(Tα1-IFN/r-L.lactis)与NDV活疫苗混合后(Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗)滴鼻免疫14日龄SPF鸡,同时设NDV活疫苗组、L.lactis+NDV活疫苗组及PBS阴性对照组。分别于免疫后不同时间(3 d、7 d、14 d、21 d、28 d)采血,于免疫后14 d、21 d、28 d分别检测各组鸡血清中的HI抗体效价;采用间接ELISA测定免疫后3 d、7 d及14 d各组鸡血清中主要细胞因子的分泌水平;分离各组鸡免疫后21 d及28 d外周血单个核细胞(PBMC)和外周血白细胞,分别通过CCK-8法检测各组鸡PBMC和白细胞中抗原递呈细胞(APC)的增殖活性。HI抗体检结果显示,分别在免疫后14 d、21 d,Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡的NDV HI抗体效价与NDV活疫苗组以及L.lactis+NDV活疫苗组均无显著差异;但免疫后28 d,该组鸡血清中的NDV HI抗体效价极显著高于其余两组(P<0.0001)。细胞因子检测结果显示,在免疫后各时间点Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡血清中IFN-γ及IL-2(Th1型细胞因子)和IL-4(Th2型细胞因子)的分泌水平基本均显著或者均极显著高于NDV活疫苗组、L.lactis+NDV活疫苗组及阴性对照组(14 d的IL4除外)。Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡血清中IL-1β(促炎因子)和IL-10(抗炎因子)的分泌水平在免疫后3 d、7 d、14 d均极显著高于其余各组(P<0.0001)。细胞增殖活性的检测结果显示,免疫后21 d和28 d,Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡PBMC的增殖活性均极显著高于其余各组;免疫后28 d,该组鸡PBMC的增殖活性均极显著高于L.lactis+NDV活疫苗组和阴性对照组(P<0.0001),但与NDV活疫苗组差异不显著(P>0.05);免疫后21 d和28 d,Tα1-IFN/r-L.lactis+NDV活疫苗组鸡外周血白细胞中APC的增殖活性均极显著高于其余各组(P<0.0001);免疫后28 d,该组鸡白细胞中APC的增殖活性极显著高于NDV活疫苗组(P<0.01),但与L.lactis+NDV活疫苗组和阴性对照组均无显著差异。上述结果表明,本研究采用表达Tα1-IFN的重组乳酸乳球菌与NDV活疫苗同时滴鼻免疫SPF鸡后,可诱导其产生较高水平的体液免疫及细胞免疫反应,增强SPF鸡免疫系统的应答能力,同时又能维持鸡体内的免疫稳态。有望成为一种新型的、有潜力的免疫佐剂,为新型免疫佐剂的开发提供了重要实验数据及参考依据。

《动物研究:体内实验报告》即ARRIVE 2.0指南的解释和阐述(五)

提高生物医学研究结果的可重复性是一项重大挑战,研究人员透明且准确地报告其研究过程有利于读者对该研究结果的可靠性进行评估,进而重复该实验或在该成果的基础上进一步探索。ARRIVE 2.0指南是英国国家3Rs中心(NC3Rs)于2019年组织发布的一份适用于任何与活体动物研究报告相关的指导性清单,用以提高动物体内实验设计、实验实施和实验报告的规范性,以及动物实验结果的可靠性、可重复性和临床转化率。ARRIVE 2.0指南的使用不仅可以丰富动物实验研究报告的细节,确保动物实验结果信息被充分评估和利用,还可以使读者准确且清晰地了解作者所表述的内容,促进基础研究评审过程的透明化和完整性。本文是在国际期刊遵循ARRIVE 2.0指南的最佳实践基础上,对2020年发表于PLoS Biology期刊上的ARRIVE 2.0指南完整解读版(https://arriveguidelines.org)第五部分包括“推荐11条”里的第6~11条:“动物照护和监测”、“解析/科学阐释”、“可推广性/转化”、“研究方案注册”、“数据获取”和“利益冲突声明”等内容进行了编译、解释和阐述,以期促进国内研究人员充分理解并使用ARRIVE 2.0指南,提高实验动物研究及报告的规范性,助推我国实验动物科技与比较医学研究的高质量发展。