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猪肺炎支原体P97蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其初步应用
被引量:
3
1
作者
王宁
谨瑾
+4 位作者
刘璐
刘欢欢
姜立波
辛九庆
刘恒贵
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第5期1110-1118,共9页
为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的Mhp J株P97蛋白C末端包含R1区的肽段(P97CR1)作为免疫原免疫BALB/C雌鼠,筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp P97蛋白MAb的杂...
为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的Mhp J株P97蛋白C末端包含R1区的肽段(P97CR1)作为免疫原免疫BALB/C雌鼠,筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp P97蛋白MAb的杂交瘤细胞株A3。鉴定结果显示,A3 MAb是IgG1亚类,轻链为κ链。Western blot结果显示A3 MAb能够和原核表达纯化的P97CR1蛋白特异性反应,并且在流式细胞仪分析中能够识别天然的Mhp。通过逐渐截短表达分析该MAb识别的表位序列为LDDNLQ,该抗原表位在Mhp菌株中高度保守。阻断ELISA初步试验结果显示,A3 MAb与蛋白抗原的结合能够被Mhp高免阳性血清阻断。该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的Mhp阻断ELISA检测方法奠定了基础。
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关键词
猪肺炎支原体
单克隆抗体
P97蛋白
表位鉴定
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职称材料
肠炎沙门菌luxS缺失株的构建及其生物学特性研究
被引量:
8
2
作者
于艳超
王莉莉
+2 位作者
潘巧
辛九庆
王秀梅
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期1291-1298,共8页
拟研究LuxS/AI-2群体感应系统对肠炎沙门菌(Salmonella enterica Serovar Enteritidis,SE)生物学特性的影响。利用Red同源重组系统构建LuxS/AI-2系统关键基因luxS缺失株,通过比较亲本株和luxS缺失株体外生长速率、药物敏感性、细胞黏附...
拟研究LuxS/AI-2群体感应系统对肠炎沙门菌(Salmonella enterica Serovar Enteritidis,SE)生物学特性的影响。利用Red同源重组系统构建LuxS/AI-2系统关键基因luxS缺失株,通过比较亲本株和luxS缺失株体外生长速率、药物敏感性、细胞黏附侵袭能力及生物被膜形成能力等生物学特性,初步分析AI-2/LuxS系统对SE生物学特性的影响。结果显示,luxS缺失株能够稳定遗传缺失的△luxS基因;体外生长速率略快;生物被膜形成能力明显增强;对DF-1细胞和Caco-2细胞黏附侵袭能力均显著增加;对氟喹诺酮类药物敏感性提高128~256倍,对氨苄西林、四环素、多西环素、氯霉素和氟苯尼考类等的药物敏感性提高了8倍。以上结果表明,LuxS系统影响肠炎沙门菌的生物学特性(如生物被膜形成、对细胞的黏附侵袭能力),并且该系统也通过某种耐药机制影响肠炎沙门菌的药物敏感性。
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关键词
肠炎沙门菌
群体感应系统
LUXS基因
药物敏感性
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职称材料
蛋白质硫辛酸修饰相关酶大肠杆菌研究模型的构建
3
作者
朱可蒙
谨瑾
+2 位作者
王宁
辛九庆
刘恒贵
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期1073-1081,共9页
为研究不同微生物硫辛酸修饰相关酶的功能,构建了大肠杆菌菌体内研究模型。利用Red同源重组系统对大肠杆菌的lplA、lipB基因依次进行敲除,获得大肠杆菌lplA及lipB双基因缺失株△lplA△lipB~DH5α。将lplA和lipB基因分别克隆到载体pBAD3...
为研究不同微生物硫辛酸修饰相关酶的功能,构建了大肠杆菌菌体内研究模型。利用Red同源重组系统对大肠杆菌的lplA、lipB基因依次进行敲除,获得大肠杆菌lplA及lipB双基因缺失株△lplA△lipB~DH5α。将lplA和lipB基因分别克隆到载体pBAD322G,构建基因回补株ClplA-△lplA△lipB~DH5α和ClipB-△lplA△lipB~DH5α。通过Western blot、质谱分析和补偿试验等方法检测缺失株和回补株对底物的硫辛酸修饰功能。结果显示:上述突变株构建成功并能稳定遗传,回补株构建成功并能发挥生物学功能。补偿试验结果显示,在甘油为碳源的M9基础培养基中,回补株ClipB-△lplA△lipB~DH5α能够生长, ClplA-△lplA△lipB~DH5α补偿硫辛酸后能够生长。以上结果表明,大肠杆菌DH5α硫辛酸修饰功能缺陷菌株构建成功,这有利于以大肠杆菌为生物模型进行其他微生物硫辛酸修饰相关酶的功能研究。
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关键词
大肠杆菌
蛋白质硫辛酸修饰
RED同源重组
lplA
lipB
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职称材料
牛传染性胸膜肺炎抗体间接ELISA检测方法的建立
被引量:
2
4
作者
郝文君
李媛
+2 位作者
周效乾
王秀梅
辛九庆
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第2期329-336,共8页
旨在建立一种检测牛传染性胸膜肺炎(CBPP)血清抗体的间接ELISA方法,用于该病的监测。利用生物信息学软件对CBPP的病原丝状支原体丝状亚种国内分离株Ben-1株的全基因组进行分析,选取脂蛋白rP0308作为包被抗原,通过一系列反应条件的优化,...
旨在建立一种检测牛传染性胸膜肺炎(CBPP)血清抗体的间接ELISA方法,用于该病的监测。利用生物信息学软件对CBPP的病原丝状支原体丝状亚种国内分离株Ben-1株的全基因组进行分析,选取脂蛋白rP0308作为包被抗原,通过一系列反应条件的优化,建立了基于rP0308蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并对其性能进行评价。结果显示该方法的敏感性为92%,特异性为96%,与牛支原体、牛鼻支原体、无乳支原体、口蹄疫、牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎和牛结核分枝杆菌等阳性血清均不发生交叉反应,批内变异系数在2.41%~6.03%,批间变异系数在2.94%~6.59%,重复性良好。利用本方法和商品化的cELISA试剂盒分别对实验室保存的1648份临床样品进行检测,该方法与商品化试剂盒的阴性符合率为89.1%,阳性符合率为79.2%,总符合率为88.7%。以上研究结果表明,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,具有良好的临床应用前景。
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关键词
牛传染性胸膜肺炎
rP0308
间接ELISA
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职称材料
题名
猪肺炎支原体P97蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其初步应用
被引量:
3
1
作者
王宁
谨瑾
刘璐
刘欢欢
姜立波
辛九庆
刘恒贵
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
动物
支
原体
病
创新
团队
齐齐
哈尔
市
动物
卫生监督所
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第5期1110-1118,共9页
基金
兽医生物技术国家重点实验室自主研究课题(SKLVBP201806)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专业(1610302017014)。
文摘
为了制备能够用于阻断ELISA检测的猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)单克隆抗体(MAb),本研究将原核表达的Mhp J株P97蛋白C末端包含R1区的肽段(P97CR1)作为免疫原免疫BALB/C雌鼠,筛选获得一株能稳定分泌抗Mhp P97蛋白MAb的杂交瘤细胞株A3。鉴定结果显示,A3 MAb是IgG1亚类,轻链为κ链。Western blot结果显示A3 MAb能够和原核表达纯化的P97CR1蛋白特异性反应,并且在流式细胞仪分析中能够识别天然的Mhp。通过逐渐截短表达分析该MAb识别的表位序列为LDDNLQ,该抗原表位在Mhp菌株中高度保守。阻断ELISA初步试验结果显示,A3 MAb与蛋白抗原的结合能够被Mhp高免阳性血清阻断。该MAb的制备为进一步建立特异性强、灵敏度高的Mhp阻断ELISA检测方法奠定了基础。
关键词
猪肺炎支原体
单克隆抗体
P97蛋白
表位鉴定
Keywords
Mycoplasma hypneumoniae(Mhp)
monoclonal antibody(MAb)
P97 protein
epitope identification
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
R375.2 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
肠炎沙门菌luxS缺失株的构建及其生物学特性研究
被引量:
8
2
作者
于艳超
王莉莉
潘巧
辛九庆
王秀梅
机构
吉林
农业
大学
动物
科学
技术
学院
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物支原体创新团队
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期1291-1298,共8页
基金
国家自然科学基金青年科学基金项目(31402249)
文摘
拟研究LuxS/AI-2群体感应系统对肠炎沙门菌(Salmonella enterica Serovar Enteritidis,SE)生物学特性的影响。利用Red同源重组系统构建LuxS/AI-2系统关键基因luxS缺失株,通过比较亲本株和luxS缺失株体外生长速率、药物敏感性、细胞黏附侵袭能力及生物被膜形成能力等生物学特性,初步分析AI-2/LuxS系统对SE生物学特性的影响。结果显示,luxS缺失株能够稳定遗传缺失的△luxS基因;体外生长速率略快;生物被膜形成能力明显增强;对DF-1细胞和Caco-2细胞黏附侵袭能力均显著增加;对氟喹诺酮类药物敏感性提高128~256倍,对氨苄西林、四环素、多西环素、氯霉素和氟苯尼考类等的药物敏感性提高了8倍。以上结果表明,LuxS系统影响肠炎沙门菌的生物学特性(如生物被膜形成、对细胞的黏附侵袭能力),并且该系统也通过某种耐药机制影响肠炎沙门菌的药物敏感性。
关键词
肠炎沙门菌
群体感应系统
LUXS基因
药物敏感性
Keywords
Salmonella enterica Serovar Enteritidis
quorum sensing system
luxS gene
antimicrobial susceptibility
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
蛋白质硫辛酸修饰相关酶大肠杆菌研究模型的构建
3
作者
朱可蒙
谨瑾
王宁
辛九庆
刘恒贵
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
动物
支
原体
病
创新
团队
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期1073-1081,共9页
基金
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610302017014)
国家重点研发计划(2016YFD0500908)
文摘
为研究不同微生物硫辛酸修饰相关酶的功能,构建了大肠杆菌菌体内研究模型。利用Red同源重组系统对大肠杆菌的lplA、lipB基因依次进行敲除,获得大肠杆菌lplA及lipB双基因缺失株△lplA△lipB~DH5α。将lplA和lipB基因分别克隆到载体pBAD322G,构建基因回补株ClplA-△lplA△lipB~DH5α和ClipB-△lplA△lipB~DH5α。通过Western blot、质谱分析和补偿试验等方法检测缺失株和回补株对底物的硫辛酸修饰功能。结果显示:上述突变株构建成功并能稳定遗传,回补株构建成功并能发挥生物学功能。补偿试验结果显示,在甘油为碳源的M9基础培养基中,回补株ClipB-△lplA△lipB~DH5α能够生长, ClplA-△lplA△lipB~DH5α补偿硫辛酸后能够生长。以上结果表明,大肠杆菌DH5α硫辛酸修饰功能缺陷菌株构建成功,这有利于以大肠杆菌为生物模型进行其他微生物硫辛酸修饰相关酶的功能研究。
关键词
大肠杆菌
蛋白质硫辛酸修饰
RED同源重组
lplA
lipB
Keywords
Escherichia coli
lipoic acid modification
Red homologous recombination
lplA
lipB
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
牛传染性胸膜肺炎抗体间接ELISA检测方法的建立
被引量:
2
4
作者
郝文君
李媛
周效乾
王秀梅
辛九庆
机构
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物支原体创新团队
东北
农业
大学
动物
医学
学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第2期329-336,共8页
基金
“十三五”国家重点研发计划(2016YFD0500900)。
文摘
旨在建立一种检测牛传染性胸膜肺炎(CBPP)血清抗体的间接ELISA方法,用于该病的监测。利用生物信息学软件对CBPP的病原丝状支原体丝状亚种国内分离株Ben-1株的全基因组进行分析,选取脂蛋白rP0308作为包被抗原,通过一系列反应条件的优化,建立了基于rP0308蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并对其性能进行评价。结果显示该方法的敏感性为92%,特异性为96%,与牛支原体、牛鼻支原体、无乳支原体、口蹄疫、牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎和牛结核分枝杆菌等阳性血清均不发生交叉反应,批内变异系数在2.41%~6.03%,批间变异系数在2.94%~6.59%,重复性良好。利用本方法和商品化的cELISA试剂盒分别对实验室保存的1648份临床样品进行检测,该方法与商品化试剂盒的阴性符合率为89.1%,阳性符合率为79.2%,总符合率为88.7%。以上研究结果表明,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,具有良好的临床应用前景。
关键词
牛传染性胸膜肺炎
rP0308
间接ELISA
Keywords
contagious bovine pleuropneumonia
rP0308
indirect ELISA
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪肺炎支原体P97蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其初步应用
王宁
谨瑾
刘璐
刘欢欢
姜立波
辛九庆
刘恒贵
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
3
下载PDF
职称材料
2
肠炎沙门菌luxS缺失株的构建及其生物学特性研究
于艳超
王莉莉
潘巧
辛九庆
王秀梅
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
8
下载PDF
职称材料
3
蛋白质硫辛酸修饰相关酶大肠杆菌研究模型的构建
朱可蒙
谨瑾
王宁
辛九庆
刘恒贵
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
0
下载PDF
职称材料
4
牛传染性胸膜肺炎抗体间接ELISA检测方法的建立
郝文君
李媛
周效乾
王秀梅
辛九庆
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
2
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
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引证文献
统计分析
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