一株pH1N1/2009猪流感病毒的进化分析与生物学特性研究

为了解SIV A/swine/Liaoning/5/2014(H1N1)分离株的生物学特性与遗传进化关系,本研究对该分离株的全基因序列进行测定,并对其进行小鼠致病性实验。基因组序列分析表明:该病毒的8个基因节段均来自A型H1N1流感病毒。HA蛋白裂解位点为^(325)PSIQSRG^(331),属于低致病性流感病毒的分子特征,其HA基因与A/Xia Men/SWL1280/2013(H1N1)的相似性达到98.9%。对动物致病性试验结果显示:该病毒可以感染哺乳动物模型BALB/c小鼠,但仅能够在鼠的肺脏和鼻甲骨粘膜上皮细胞中复制,病毒滴度分别为5.5 log_(10)EID_(50)/m L和3.3 log_(10)EID_(50)/mL,该病毒株对小鼠的生长具有抑制作用,可以导致感染后7 d内小鼠体质量下降15.2%,随后逐渐恢复,但始终低于正常对照小鼠,呈现一定的致病性。本研究为该病毒已在我国动物群体内流行提供了新的证据。

禽流感病毒H5N1变异株灭活疫苗(Re-4株)对鸡、鸭和鹅的免疫效果研究

为系统评估禽流感病毒(AIV)H5N1变异株灭活疫苗(Re-4株)对家禽的免疫效果,本研究将Re-4株油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡和商品蛋鸡、商品鸭及商品鹅。免疫后每周采集血清测定HI抗体,绘制抗体消长曲线,免疫SPF鸡在免疫后2周、3周和50周时以105EID50剂量的强毒株(CK/SX/2/06)进行攻毒。研究结果显示,该疫苗对蛋鸡、鸭、鹅均具有良好的免疫效果,而且SPF免疫鸡血清HI抗体在4log2以上时能够完全抵抗CK/SX/2/06强毒的攻击。因此,根据实验结果推荐该油乳剂灭活疫苗的对上述禽类的免疫程序:商品蛋鸡10日龄颈部皮下注射0.3mL,60日龄和110日龄(开产前)时依次胸肌注射0.5mL和1.0mL进行免疫;商品鸭、鹅在2周龄均以0.5mL首免,5周龄和4月龄左右时以1mL的剂量肌肉注射方式进行加强免疫。

H3N2亚型犬流感病毒HA1基因的原核表达及抗原性分析

为原核表达H3N2亚型犬流感病毒(CIV)HA1蛋白,本研究利用特异性引物扩增CIV H3分离株的HA1基因,将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。再将其亚克隆于pET-32a(+)中构建重组表达质粒pET-HA1。将该质粒转化于大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳分析,表达的重组蛋白约为58 ku。纯化的HA1蛋白经western blot和Dot-ELISA鉴定表明,表达的重组HA1蛋白可以与H3N2亚型CIV阳性血清发生特异性反应。

山羊关节炎-脑炎病毒P28蛋白的表达与间接ELISA方法的建立

为建立检测山羊关节炎-脑炎病毒(CAEV)血清抗体的间接ELISA方法,本研究将原核表达并纯化的CAEV P28蛋白作为检测抗原,采用方阵法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度,经过对反应条件的优化建立了CAEV间接ELISA抗体检测方法。该方法仅对CAEV血清检测为阳性,对口蹄疫、山羊痘和蓝舌病病毒的阳性血清检测结果均为阴性;敏感性试验表明标准阳性血清1∶3 200倍稀释时,检测结果仍为阳性。该方法的批内和批间重复试验的变异系数分别小于7%和10%。对人工感染山羊血清进行检测,该ELISA方法最早可以在第2周检出抗体,琼脂凝集免疫扩散试验(AGID)最早可以在第4周检出抗体;与AGID试验方法相比,ELISA检出率提高27.2%。结果表明,本研究所建立的间接ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和可重复性,为该病的诊断和监测提供了有效的技术手段。

禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原国家参考品的研制

按照国家一级标准物质要求,研制了一批禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原国家参考品,批号为200901。对其物理性状、无菌、效价、特异性、水分、真空度、均一性、稳定性等进行了测定,各项指标均符合要求。经过8家单位对其协作标定,并经统计学分析,该批抗原血凝效价为1∶(460±80),最终定值为1∶400。该禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原可以作为国家参考品。

鸡产蛋下降综合征血凝抑制试验抗原符合率比较

用哈尔滨维科生物技术开发公司生产的批号为200901的鸡减蛋综合征京911株油乳剂灭活疫苗，以0．5mL／只剂量接种120日龄SPF鸡10只，7d后采血分离血清，以后每隔一定时间进行采血、分离血清。同时又采集了发病鸡场的15份发病鸡血清。分别用血凝抑制试验和琼脂扩散（AGP）试验对自制的阳性血清和发病鸡血清样品进行血清学检查。结果表明：当血清HI效价等于或大于28时，两种方法的符合率可达100％；当血清的HI效价为26-27时，AGP与HI的符合率为73．33％~86．67％；当血清的HI效价为24-25时AGP的检出率很低或完全呈阴性。从两种方法的符合率比较还可得出HI试验检测的灵敏度要高于AGP，而且HI法简单、特异、快速、实用、方便，不但能定性还可以定量。

新城疫病毒分离株F基因的克隆与序列分析

应用RT-PCR分别扩增出新城疫病毒(NDV)青海株(QH3)、黑龙江株(HLJ)和甘肃株(A4)的融合蛋白(F)基因的全长核苷酸,再克隆到pMD18-T载体中。经酶切和质粒PCR鉴定,获得阳性重组质粒后,进行序列测定并推导出其氨基酸序列,同时进行分析和比较。序列分析结果表明,所获得的3个分离株F基因完整的开放阅读框长度为1662bp,共编码F蛋白的553个氨基酸;3个毒株之间的核苷酸序列同源性为88.0%～90.6%;与常用疫苗株之间核苷酸序列同源性只有85.3%～91.6%。三者F基因的裂解位点均为112R-R-Q-K/R-R-F117,符合强毒株裂解区氨基酸组成的特征。以1bp～374bp的核苷酸序列绘制系统发育树分析表明,QH3株NDV为基因Ⅷ型,A4株NDV为基因Ⅵ型,HLJ株NDV为基因Ⅸ型。

犬布氏杆菌Cu/Zn-SOD基因的原核表达及多克隆抗体的制备

为检测犬布氏杆菌(Brucella canis)重组Cu/Zn-SOD蛋白的抗原性,本研究通过PCR方法扩增B.canis的Cu/Zn-SOD基因,将其克隆于表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-SOD。将该质粒转化受体菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳分析,表达的重组蛋白约20 ku,以可溶性形式存在。经western blot分析表明,表达的重组蛋白可以与B.canis阳性血清发生特异性反应。表达的重组蛋白经纯化后,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,western blot分析表明制备的多克隆抗体可以与重组Cu/Zn-SOD蛋白发生特异性反应,表明Cu/Zn-SOD蛋白具有良好的抗原性。

浅谈狂犬病的防制

狂犬病是由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）引起的一种全球分布的人兽共患传染病，是迄今为止人类病死率最高的传染病，病死率达100％，无有效治疗药物和方法。我国1980～2007上半年的28年半间，国内共报告狂犬病78，469例，且近几年来狂犬病人数呈持续上升之势，已居世界第二位，仅次于印度。

奶牛霉玉米中毒继发蹄叶炎诊治

玉米在保存不当的情况下会发霉，产生黄曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和赫曲霉毒素等真菌毒素。这些毒素能抑制机体淋巴细胞活性，损伤免疫系统，故机体抵抗力降低，易引起继发症的发生。奶牛的蹄病是危害奶牛养殖业的主要疾病之一，降低奶牛的生产性能，提高了奶牛的淘汰率。在各种蹄病中，蹄叶炎的发病率较高。下面就一例奶牛霉玉米中毒继发蹄叶炎的病例进行报告。

一株鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及其N基因进化分析

鸡传染性支气管炎病毒（Infectious bronchitis virus，IBV）是Nido病毒目、冠状病毒科的1-冠状病毒。鸡感染后引起的疾病称为传染性支气管炎（infectious bronchitis，IB），表现为呼吸道、消化道和泌尿生殖道的病变，是规模化鸡场普遍存在的一种病毒性疾病。