鹅和番鸭细小病毒全基因克隆与序列分析

本研究采用PCR技术扩增了鹅和番鸭全长细小病毒基因;其中鹅和番鸭细小病毒非结构蛋白基因(NS)全长为1884bp,编码627个氨基酸;结构基因(VP)全长为2199bp,编码732个氨基酸;序列分析表明:鹅和番鸭细小病毒NS之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为80.9%～82.9%和89.5%～91.2%,而相应的鹅细小病毒之间的同源性为93.7%～99.8%和96.8%～99.7%,番鸭细小病毒之间的同源性为98.8%～99.8%和98.6%～99.5%;在核苷酸和氨基酸水平上,鹅和番鸭细小病毒VP1之间的同源性分别为79.7%～88.7%和85.5%～93.3%,而相应的鹅细小病毒之间的同源性为88.8%～99.6%和91.5%～99.2%,番鸭细小病毒之间的同源性为98.1%～99.6%和97.1%～98.8%;番鸭和鹅细小病毒NS和vp1基因的系统进化树分析表明:番鸭和鹅呼细小病毒来自共同的祖先,但随着宿主的不同而演化为不同的分支。

O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及生物学特性分析

以纯化的O型口蹄疫泛亚毒株O／YS／CHA／05抗原免疫BALB／c小鼠，在加强免疫3d后，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞进行融合，经间接ELISA法和间接免疫荧光法（IFA）筛选，获得2株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为4A8和1F6，同时确定二者均为O型口蹄疫病毒特异性单克隆抗体。中和试验和Western—blot分析结果表明，4A8和1F6均识别线性表位，无中和活性。亚类鉴定结果显示：4A8和1F6重链类型分别为IgG1和IgG2b；轻链类型均为κ。相加ELISA分析结果表明，两者针对的抗原位点相同或相近。

马属动物cyclinT1基因的扩增与真核表达载体的构建

在慢病毒复制过程中cyclinT1(CycT1)是重要的辅助因子。为了揭示慢病毒的复制机理,试验使用RT-PCR方法扩增马和驴的cyclinT1基因,并进行克隆和序列分析,然后用DNASTAR(MegAlign)软件将测得的序列和国外发表的马属动物CycT1序列(GenBank中登录号为AF137509和AF190905)进行同源性比较。结果表明:马属动物CycT1大小为2184bp,编码727个氨基酸;4种CycT1基因氨基酸同源性在98%以上;将扩增出的马CycT1基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经酶切及测序鉴定证实成功构建了pcDNA3.1(+)/eCycT1重组质粒。

羊口疮病毒干预宿主细胞泛素-蛋白酶体系统的分子机制

羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)感染细胞过程中为了对抗宿主细胞的抗病毒作用,依靠种群长期培育的一系列功能性基因,如干扰素抗性基因、Bcl-2样基因和细胞周期蛋白抑制物基因等,遏制宿主细胞免疫清除和免疫调节作用。同时,ORFV也利用某种机制干预细胞泛素-蛋白酶体系统(Ubiquitin-proteasome system,UPS)的信号调控途径,有效抑制胞内信号传导和CD8+T细胞活化,以庇护病毒粒子成熟和释放。本文综述了细胞UPS功能与病毒干预机制的内在联系及其相关元件的关键作用,探讨ORFV在选择压力下,主动采取的抑制宿主细胞免疫应答和设计胞内免疫逃逸的进化趋势。