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猪流行性腹泻病毒分子生物学研究进展 被引量:51
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作者 孙东波 冯力 +1 位作者 时洪艳 陈建飞 《动物医学进展》 CSCD 2006年第10期11-14,共4页
猪流行性腹泻病毒在Vero细胞上培养成功后,病毒全基因组的序列和分子结构特征,结构蛋白和非结构蛋白的生物学特性和功能,病原学、血清学和分子生物学的诊断技术,体液免疫、细胞免疫和局部黏膜免疫的机理,疫苗和病毒的细胞受体等方面得... 猪流行性腹泻病毒在Vero细胞上培养成功后,病毒全基因组的序列和分子结构特征,结构蛋白和非结构蛋白的生物学特性和功能,病原学、血清学和分子生物学的诊断技术,体液免疫、细胞免疫和局部黏膜免疫的机理,疫苗和病毒的细胞受体等方面得到了广泛的研究。但是,与其他冠状病毒相比,猪流行腹泻病毒的研究还比较滞后,许多研究还没有开展或不够深入,为了能加快对猪流行性腹泻病毒研究进程,对其最近的分子生物学研究进展做了综述,为猪流行性腹泻病毒的深入研究提供参考。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 分子生物学 分子结构特征 病原学 血清学 诊断技术 体液免疫
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现代生物技术在猪病诊断和防治中的应用 被引量:9
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作者 崔宇超 崔尚金 《猪业科学》 2011年第8期32-37,共6页
生物技术是指应用生命科学研究成果,以人们意志设计,对生物或生物的成分进行改造和利用的技术。现在,多种猪病混合感染严重威胁着我国的养猪业。本文简述了生物技术在猪病的诊断和防治中的部分应用。生物技术在猪病诊断中的应用主要包... 生物技术是指应用生命科学研究成果,以人们意志设计,对生物或生物的成分进行改造和利用的技术。现在,多种猪病混合感染严重威胁着我国的养猪业。本文简述了生物技术在猪病的诊断和防治中的部分应用。生物技术在猪病诊断中的应用主要包括蛋白的克隆表达与纯化技术,从而做成敏感性、特异性高的试剂盒;生物技术在猪病防治中的应用主要包括研单位疫苗、(非复制性及)活载体疫苗和干扰素等。生物技术在猪病的诊断和防治中还有很多其他应用,本文只是抛砖引玉。 展开更多
关键词 生物技术 猪病 诊断 防治
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TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒的研究 被引量:2
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作者 白兴华 原志伟 +3 位作者 李军民 王亚文 贺同欣 冯力 《检验检疫科学》 2009年第5期17-20,共4页
本研究根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,RT-PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体得到阳性质粒,即为质粒标准品。通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检... 本研究根据猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)N基因和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,RT-PCR扩增得到目的基因,并克隆到pMD18-T载体得到阳性质粒,即为质粒标准品。通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法。该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR
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猪圆环病毒2型引起相关肠炎疾病的研究进展 被引量:5
4
作者 袁婧 魏萍 刘长明 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第10期92-95,共4页
猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)已成为世界范围内影响养猪业发展的重要疾病。由猪圆环病毒2型(PCV-2)引发的肠炎是PCVAD的症状之一,临床表现为生长仔猪腹泻、生长发育迟缓或体重减轻;在淋巴组织和肠组织中可检测到大量的PCV-2病原,并出现特... 猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)已成为世界范围内影响养猪业发展的重要疾病。由猪圆环病毒2型(PCV-2)引发的肠炎是PCVAD的症状之一,临床表现为生长仔猪腹泻、生长发育迟缓或体重减轻;在淋巴组织和肠组织中可检测到大量的PCV-2病原,并出现特征性组织学病变。试验证实,PCV-2单独感染或与其他病原混合感染可引发肠炎,经口服途径攻毒感染是引发PCV-2相关肠炎疾病的一种重要感染途径。因此,PCV-2是生长仔猪肠道疾病的一种致病因子,应予以足够重视。论文对PCV-2相关肠炎在临床表现、组织病理学特征、多病原混合感染对其影响、临床诊断以及防控措施等方面的研究进展进行综述,以期对PCV-2相关肠炎疾病的深入研究提供参考。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 肠炎 诊断
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猪传染性胃肠炎病毒Taq Man荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:11
5
作者 白兴华 冯力 +4 位作者 陈建飞 时洪艳 孙东波 吴波平 高秀春 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期476-481,共6页
根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法。同时对37份现地病料进行检测并与常规RT-PCR方法、TGEV抗原快速检测试剂盒比较。... 根据猪传染性胃肠炎病毒和猪肌动蛋白的基因序列设计合成了引物和探针,通过对荧光定量RT-PCR反应条件的优化,建立了TaqMan荧光定量RT-PCR检测TGEV的方法。同时对37份现地病料进行检测并与常规RT-PCR方法、TGEV抗原快速检测试剂盒比较。结果,该方法的检测敏感性达到15.3拷贝/μL,且具有很好的特异性和重复性,而常规RT-PCR方法只能检测到1.53×103拷贝/μL。对37份现地病料的检测结果也表明该法(检出17份)比常规RT-PCR方法(检出12份)和TGEV抗原快速检测试剂盒(免疫层析法,检出10份)的敏感性高。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 TAQMAN探针 荧光定量RT-PCR
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反向遗传操作研究进展 被引量:4
6
作者 吴波平 时洪艳 +1 位作者 陈建飞 冯力 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第1期134-138,共5页
反向遗传操作(又称感染性克隆)为在DNA水平上研究RNA病毒的基因组结构及功能和病毒宿主相互作用提供了重要手段。文章综述了反向遗传操作的研究策略,包括全长克隆的获得、体外转录和病毒的挽救,概括了反向遗传操作在病毒分子生物学研究... 反向遗传操作(又称感染性克隆)为在DNA水平上研究RNA病毒的基因组结构及功能和病毒宿主相互作用提供了重要手段。文章综述了反向遗传操作的研究策略,包括全长克隆的获得、体外转录和病毒的挽救,概括了反向遗传操作在病毒分子生物学研究、疫苗的研制、基因治疗和重组载体中的应用,分析了当前反向遗传操作研究中存在的问题。 展开更多
关键词 反向遗传操作 感染性克隆 全长克隆 体外转录 病毒挽救
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胶体金免疫层析技术及其在猪病诊断上的应用 被引量:3
7
作者 周盛华 崔尚金 +1 位作者 戚亭 岳丰雄 《养猪》 2010年第4期65-69,共5页
胶体金免疫层析技术是一种新的免疫检测技术,因其快速简便最近几年在猪病诊断方面得到广泛应用。《胶体金免疫层析技术及其在猪病诊断上的应用》一文详细介绍了胶体金免疫层析技术的基本原理、胶体金及胶体金免疫层析快速诊断试纸条的... 胶体金免疫层析技术是一种新的免疫检测技术,因其快速简便最近几年在猪病诊断方面得到广泛应用。《胶体金免疫层析技术及其在猪病诊断上的应用》一文详细介绍了胶体金免疫层析技术的基本原理、胶体金及胶体金免疫层析快速诊断试纸条的制备方法,并以猪繁殖与呼吸综合征为例说明胶体金免疫层析快速诊断试纸条在猪病诊断上的应用,可操作性强,值得认真研读。 展开更多
关键词 免疫胶体金技术 层析技术 应用 葡萄球菌A蛋白 诊断 猪病 免疫球蛋白 标记技术
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新型动物疫苗的研究现状及进展 被引量:5
8
作者 姚贵哲 祝超 +2 位作者 张振梅 崔尚金 钱爱东 《畜禽业》 2009年第12期16-18,共3页
近年来,免疫学、分子生物学、微生物学、生物化学和其它一些基础学科的飞速发展,为动物疫苗的研究指明了新的方向,并且提供了相关的技术条件保证,特别是基因工程学和蛋白质组学以及其它一些新的技术为主体的现代生物技术的发展更是大大... 近年来,免疫学、分子生物学、微生物学、生物化学和其它一些基础学科的飞速发展,为动物疫苗的研究指明了新的方向,并且提供了相关的技术条件保证,特别是基因工程学和蛋白质组学以及其它一些新的技术为主体的现代生物技术的发展更是大大促进了新型的疫苗研究的步伐,并使新型疫苗的应用朝着实用化迈了一大步。目前,亚单位疫苗、基因缺失疫苗以及载体疫苗被公众认为是可以考虑作为替代传统疫苗的新型疫苗,该文对这些新型动物疫苗的研究现状和进展进行了综述,以期能够进一步促进大家对其了解,并加快其发展,以便早日应用。 展开更多
关键词 疫苗学 动物疫苗 疫苗的研究进展
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猪传染性胃肠炎的综合防制
9
作者 陈建飞 冯力 时洪艳 《兽医导刊》 2011年第3期27-28,共2页
猪传染性胃肠炎(TGE)是由尼多目、冠状病毒科的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的猪的一种高度接触传染性的肠道疾病,以引起14日龄以内仔猪呕吐、严重腹泻和高死亡率(可高达100%)为特征。虽然不同年龄的猪对该病毒均易感,但5周... 猪传染性胃肠炎(TGE)是由尼多目、冠状病毒科的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的猪的一种高度接触传染性的肠道疾病,以引起14日龄以内仔猪呕吐、严重腹泻和高死亡率(可高达100%)为特征。虽然不同年龄的猪对该病毒均易感,但5周龄以上猪的死亡率则很低。1945年Doyle和Hutchings首次报道美国发生了本病, 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 综合防制 接触传染性 冠状病毒科 肠道疾病 死亡率 呕吐 仔猪
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聚焦猪传染性萎缩性鼻炎
10
作者 杨汉春 《猪业科学》 2009年第6期22-28,共7页
猪传染性萎缩性鼻炎是规模化猪场主要的呼吸系统疫病之一,也是对呼吸系统第1道防线最重要的影响因素。猪传染性萎缩性鼻炎是由支气管败血波氏杆菌和巴错杆菌2种病原及其产生的毒素共同作用引发的猪上呼吸道的慢性、渐进性的传染病。
关键词 猪传染性萎缩性鼻炎 流行特点 危害状况 支气管败血波氏杆菌 聚焦 净化 防治 诊断
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猪瘟病毒石门强毒株和兔化弱毒疫苗株E2蛋白糖基化位点差异分析 被引量:18
11
作者 彭伍平 夏照和 +4 位作者 侯强 李娜 孙元 童光志 仇华吉 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期389-393,共5页
猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株E2糖蛋白分别含有5个和6个潜在的糖基化位点,其中986N是兔化弱毒疫苗株所特有的。为了分析二者糖基化位点差异及其影响,将去掉信号肽和跨膜区的猪瘟病毒石门强毒株(Shi-men)和兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2基... 猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株E2糖蛋白分别含有5个和6个潜在的糖基化位点,其中986N是兔化弱毒疫苗株所特有的。为了分析二者糖基化位点差异及其影响,将去掉信号肽和跨膜区的猪瘟病毒石门强毒株(Shi-men)和兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2基因置于蜂素信号肽序列下游,使其在Sf9细胞内表达重组Shimen-E2和HCLV-E2蛋白。结果显示,重组E2蛋白以二聚体的形式分泌表达于细胞培养液中,但二者分子量存在差异。用endo H和PNGase F对纯化后的重组E2蛋白进行去糖基化处理后,二者分子量大小变成一致,证实石门强毒株和兔化弱毒株E2蛋白分子量大小的差异可能是由于糖基化程度的差异所致。对986N糖基化位点进行定点突变后发现,突变后的Shimen-E2与野生型HCLV-E2分子量大小一致,而突变后的HCLV-E2与野生型Shimen-E2分子量大小一致,表明Shimen-E2和HCLV-E2分子量大小的差异的确是由于986N糖基化位点的差异引起的。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2囊膜糖蛋白 糖基化位点 杆状病毒表达系统 蜂素信号肽
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猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株S基因的克隆、序列分析及线性抗原表位区的鉴定 被引量:21
12
作者 孙东波 冯力 +4 位作者 陈建飞 时洪艳 佟有恩 刘胜旺 陈洪岩 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期224-229,共6页
以猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得的3个相互重叠的cDNA克隆覆盖了S基因,序列比对结果表明:PEDV CH/JL株S基因与CV777、Brl/87、JS、KPEDV和Chinju99毒株S基因核苷酸序列的同源性分别为96.97%、96.87%、96.41... 以猪流行性腹泻病毒CH/JL毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得的3个相互重叠的cDNA克隆覆盖了S基因,序列比对结果表明:PEDV CH/JL株S基因与CV777、Brl/87、JS、KPEDV和Chinju99毒株S基因核苷酸序列的同源性分别为96.97%、96.87%、96.41%、94.02%和93.93%,氨基酸序列的同源性分别为96.17%、95.88%、96.10%、92.36%和92.05%;分子进化树分析结果显示,PEDV CH/JL株S基因与JS毒株S基因亲缘关系最近,处于同一群。利用DNAstar Protean程序预测了PEDV CH/JL株S蛋白一个抗原表位区(83-276aa),将其克隆到原核表达载体pGEX-6p-1后转化E.coliBL21(DE3)感受态细胞,在终浓度1.0mmol/L的IPTG诱导下获得了表达,Western blot结果显示,预测的抗原表位区GST融合蛋白能与猪流行性腹泻病毒多克隆抗血清反应,提示该抗原表位区含有线性抗原表位。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 S基因 序列分析 线性抗原表位区
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表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒的构建及其在兔体内的免疫原性分析 被引量:13
13
作者 孙元 祁巧芬 +7 位作者 梁冰冰 成丹 李娜 于墨洋 王宇飞 刘霓虹 朱庆虎 仇华吉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1734-1739,共6页
为了构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗,通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2。测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blotting检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用猪瘟兔化弱... 为了构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗,通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2。测定其一步生长曲线,同时用间接免疫荧光试验和Western blotting检测外源基因表达,然后用rAdV-E2免疫家兔,免疫后6周用猪瘟兔化弱毒疫苗株(C株)进行攻击,攻毒后3 d取其脾脏,用实时荧光定量RT-PCR检测C株病毒RNA。结果表明,该重组腺病毒传至第10代时,毒价可达1.0×1010 TCID50/mL;外源基因可在其中得到稳定表达;rAdV-E2接种兔免疫后2周产生猪瘟特异性抗体,免疫后5 w抗体达到峰值,攻毒后rAdV-E2接种兔和C株接种兔均未出现定型热反应,从其脾脏也未检测到C株病毒RNA,而野生型腺病毒接种兔均出现了定型热反应,并且从其脾脏检测大量C株病毒RNA,其含量达到了103拷贝/μL以上。由此表明,rAdV-E2可望开发为猪瘟候选疫苗。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 重组腺病毒 免疫原性 家兔
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猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA检测方法的建立及应用 被引量:15
14
作者 黄立平 刘长明 +2 位作者 危艳武 陆月华 郭龙军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期779-785,共7页
利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法。用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%... 利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法。用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%,且与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应。该阻断ELISA与血清中和试验的检测结果呈显著正相关(r=0.997 0),其敏感性还优于血清中和试验。用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品进行检测,结果显示,疫苗接种后第2周就能检测到PCV2中和抗体,4周后阳转率达100%。另外,用该方法对东北三省不同地区送检的703份血清样品进行检测,结果阳性检出率为73.0%。表明,东北三省猪场中的PCV2感染率较高,危害严重。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 中和抗体 单克隆抗体 阻断ELISA
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猪圆环病毒1型抗体IPMA检测方法的建立及应用 被引量:14
15
作者 黄立平 刘长明 +2 位作者 危艳武 张朝霞 陆月华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期738-742,共5页
建立了一种用于检测猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法。对该方法的反应条件、特异性、敏感性及重复性等进行了系统试验,并与用昆虫杆状病毒表达的PCV1-Cap重组蛋白抗原建立的间接ELISA的检测结果进... 建立了一种用于检测猪圆环病毒1型(PCV1)血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法。对该方法的反应条件、特异性、敏感性及重复性等进行了系统试验,并与用昆虫杆状病毒表达的PCV1-Cap重组蛋白抗原建立的间接ELISA的检测结果进行了比较。结果显示,用IPMA法对已知PCV1和猪圆环病毒2型(PCV2)参考阳性血清进行检测,血清稀释度≥1∶100即可消除2种病毒间的低水平交叉反应,与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应;与用昆虫杆状病毒表达的PCV1-Cap重组蛋白抗原建立的间接ELISA的检测符合率为88.9%。用该方法对黑龙江省、吉林省、河北省、上海市、辽宁省等地猪场送检的257份血清样品进行检测,PCV1和PCV2血清抗体阳性检出率分别为19.1%和80.5%,PCV1抗体阳性猪中有95.9%为PCV2阳性,表明我国猪群已存在PCV1感染,在临床上PCV1与PCV2多以混合感染形式存在。建立的PCV1-IPMA方法具有操作简便、特异和敏感等特点,不失为PCV1流行病学调查及血清抗体检测的有效技术手段。 展开更多
关键词 猪圆环病毒1型 免疫过氧化物酶单层细胞试验 抗体检测
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基于重组E2蛋白的猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立 被引量:8
16
作者 孙元 夏照和 +2 位作者 梁冰冰 彭伍平 仇华吉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期315-319,共5页
根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍。将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法... 根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍。将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法的反应条件进行了优化。确定的ELISA最佳条件为:抗原包被浓度为2μg/mL,封闭液为10 g/L聚乙烯醇PBS溶液,被检血清1∶160稀释,辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG(二抗)1∶5 000稀释。确定的阴性血清临界D450 nm值为0.30,阳性血清临界D450 nm值为0.35。将该ELISA方法与IDEXX公司生产的猪瘟病毒抗体检测试剂盒做相关比较,结果符合率为82.3%。表明,该方法可以用于猪瘟病毒抗体的检测。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 密码子优化 杆状病毒表达系统 间接ELISA
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猪瘟病毒实时荧光定量RT-PCR的建立及其对人工感染猪体内猪瘟病毒的检测 被引量:11
17
作者 赵建军 成丹 +6 位作者 李娜 史子学 孙元 赵和平 朱庆虎 涂长春 仇华吉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期685-693,共9页
本研究应用猪瘟病毒通用引物和野毒特异性TaqMan探针,并以质粒作为阳性标准品,结合Corbett公司的RotorGene3000荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测猪瘟病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。该方法在10^8-10^... 本研究应用猪瘟病毒通用引物和野毒特异性TaqMan探针,并以质粒作为阳性标准品,结合Corbett公司的RotorGene3000荧光定量PCR仪,建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测猪瘟病毒核酸载量的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。该方法在10^8-10^1范围内具有良好的线性关系,可检测到初始模板中10拷贝/μL的病毒核酸,与本实验室建立的RT-套式PCR(RT-nPCR)具有相近的敏感性,二者对152份不同样品检测符合率达94.7%。应用本方法对人工感染10^6TCID50猪瘟石门强毒的猪只感染后0-14 d全血中猪瘟病毒RNA进行了定量检测,揭示了猪瘟病毒在猪体内复制的动态变化,证实了感染猪临床表现与病毒滴度存在明显的时间相关性。此外发现,在同居感染猪出现猪瘟临床症状前3-4 d可从其全血中检出病毒RNA。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 荧光定量RT-PCR TaqMan荧光探针 RT-nPCR
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猪圆环病毒2型感染昆明小鼠模型的建立 被引量:9
18
作者 苗岚飞 崔尚金 +3 位作者 张超范 胡守萍 陈长木 张垚 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期475-478,共4页
将SPF级昆明小鼠随机分为3组,即一次攻毒组(S组)12只、连续攻毒组(M组)3只和对照组(C组)12只。S组和C组小鼠于第1d分别接种RPMI1640培养液和猪圆环病毒2型(PCV2)细胞培养毒,M组小鼠于第1、7、14、28、35d连续进行PCV2接种。S组和C组小... 将SPF级昆明小鼠随机分为3组,即一次攻毒组(S组)12只、连续攻毒组(M组)3只和对照组(C组)12只。S组和C组小鼠于第1d分别接种RPMI1640培养液和猪圆环病毒2型(PCV2)细胞培养毒,M组小鼠于第1、7、14、28、35d连续进行PCV2接种。S组和C组小鼠分别在接种后第7、14、28和42d各处死3只,M组小鼠在接种后第42d全部处死,分析其增重、病毒组织分布、抗体水平、病理组织学变化。结果,C组小鼠体重增长速率大于S组和M组,S组又明显高于M组;S组和M组小鼠体内存在病毒复制,而C组小鼠体内无病毒复制;S组和M组小鼠均产生PCV2抗体,但M组小鼠抗体水平明显高于S组,C组小鼠未检测到PCV2抗体;S组和M组小鼠有明显的病理损伤,其中淋巴结损伤最严重,C组未发现病理损伤。结果表明PCV2可以成功感染SPF昆明小鼠。 展开更多
关键词 SPF昆明小鼠 猪圆环病毒2型 病理损伤 动物模型
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猪瘟病毒野毒株RT-LAMP可视化检测方法的建立 被引量:16
19
作者 张兴娟 孙元 +1 位作者 刘大飞 仇华吉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期864-868,共5页
本研究旨在建立一种可视化检测猪瘟病毒(CSFV)野毒株的反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。根据CSFV的NS5B基因序列设计一套RT-LAMP引物,以样品的cDNA为模板,利用BstDNA聚合酶,在62℃恒温条件下进行扩增,扩增产物中加入SYBR GreenⅠ... 本研究旨在建立一种可视化检测猪瘟病毒(CSFV)野毒株的反转录-环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。根据CSFV的NS5B基因序列设计一套RT-LAMP引物,以样品的cDNA为模板,利用BstDNA聚合酶,在62℃恒温条件下进行扩增,扩增产物中加入SYBR GreenⅠ染料直接或在紫外光下观察判定扩增结果。该方法可检测出不同基因型的CSFV野毒株,其检出极限为2.5TCID50的CSFV,与实时荧光定量RT-PCR方法的敏感性相当;特异性试验表明,该方法对猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)、牛病毒性腹泻病毒以及其它常见猪源病毒均无扩增反应;通过对126份不同样品进行检测比较,该方法与实时荧光定量RT-PCR检测方法的符合率达100%,与引物-探针能量转移PCR方法的符合率为98.4%。该方法无需特殊仪器,是一种适用于基层的快速、简便的CSFV野毒鉴别检测方法。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 野毒株 RT-LAMP 鉴别诊断
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猪瘟病毒中和抗体竞争抑制ELISA检测方法的建立 被引量:12
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作者 梁冰冰 孙元 +2 位作者 彭伍平 夏照和 仇华吉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期957-961,共5页
利用杆状病毒表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的E2蛋白中和性单克隆抗体作为竞争抗体,建立了一种用于检测CSFV中和抗体的重组E2蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经筛选确定,CI-ELISA的抗原最佳包被浓... 利用杆状病毒表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的E2蛋白中和性单克隆抗体作为竞争抗体,建立了一种用于检测CSFV中和抗体的重组E2蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经筛选确定,CI-ELISA的抗原最佳包被浓度为3μg/mL,酶标竞争抗体的最佳稀释度为1∶4 000,阴性血清临界值为33%,阳性血清临界值为40%。CI-ELISA的检出下限为1∶44(中和抗体效价),与进口阻断ELISA试剂盒的符合率为85.00%,高于间接ELISA与进口阻断ELISA试剂盒的符合率(81.25%),CI-ELISA与其他主要病毒的阳性血清均无交叉反应。对采自我国4个省份的290份现地血清进行CI-ELISA检测,结果273份(94.1%)为CSFV抗体阳性。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 竞争抑制ELISA 中和抗体
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