棉花GhDMT3的功能验证及生物信息学分析

通过构建棉花GhDMT3的VIGS沉默载体并侵染棉花,探究该基因在棉花和高等植物中的功能。采用生物信息学方法对棉花DNA甲基转移酶基因GhDMT3(CotAD_46796)的DNA序列结构特性、该基因编码的蛋白质的理化性质、疏水性和蛋白二级结构等方面进行分析。克隆该基因,并构建pYL156:GhDMT3沉默载体。蛋白质相对分子质量为71 107.02 kD,等电点为4.85,不稳定系数为36.33。不同胁迫处理(冷、干旱)VIGS沉默GhDMT3的棉花幼苗表现出明显的表型差异。qRT-PCR的表达模式分析发现,不同胁迫下p YL156侵染的棉花中不同部位表达量没有变化,用pYL156:GhDMT3侵染过的棉花中GhDMT3转录水平与对照相比明显下降。与未沉默GhDMT3的棉花幼苗相比,沉默GhDMT3的棉花幼苗抗逆性显著增强。

陆地棉GhVP1基因干扰载体的构建及拟南芥的遗传转化

为进一步探索陆地棉GhVP1基因的功能,本研究以本实验室克隆得到的陆地棉GhVP1基因为模板,经Blast比对,选择长度为347 bp片段作为干涉载体正义、反义序列。利用In-fusion方法构建干涉载体,挑选阳性克隆测序验证,成功构建pBI121-PH::VP1干涉载体。利用农杆菌介导法转化拟南芥,并进行PCR检测,成功获得9株转基因苗,并对获得的T3代转基因拟南芥进行耐盐性分析。结果显示,盐胁迫下,转干涉载体拟南芥的发芽率降低,根长变短,整个生育期的生长受到抑制。研究表明VP基因与植物的耐盐性相关,为进一步研究GhVP1基因及其作用机理提供了参考依据。