狂犬病病毒糖蛋白生物学功能研究进展

狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)感染中枢神经系统引起的致死性人畜共患传染病。RABV糖蛋白存在于病毒表面,它既是病毒的主要保护性抗原,诱导体液免疫产生中和抗体和刺激T细胞产生细胞免疫,又是病毒与细胞受体结合的结构,在病毒致病性和嗜神经性中发挥重要作用,与病毒毒力直接相关。作者归纳总结国内外RABV糖蛋白结构与功能研究进展,并对糖蛋白中和抗体的检测与评价进行阐述。将为进一步揭示RABV糖蛋白生物学功能奠定基础,为糖蛋白中和抗体的诊断提供理论参考,为控制和消灭狂犬病做出相应贡献。

哺乳动物卵泡发育调控分子机制研究进展

哺乳动物卵泡发育研究对于辅助生殖技术的发展具有重要意义。随着分子生物学技术的发展,哺乳动物卵泡发育研究主要放在对其调控的分子机制中。本文重点阐述了与卵泡发育相关的激活素/抑制素作用通路、BMP/Smad信号通路以及NPPC/NPR2信号通路,以期对哺乳动物不孕发生的原因及治疗提供参考。

NHE1生物学功能的研究进展

钠氢交换蛋白1(NHE1)是哺乳动物细胞中广泛表达的整合膜蛋白,主要通过交换细胞内的H^(+)与细胞外的Na^(+)进行电中性交换去除质子,调节细胞内的pH。在已知的10种亚型中,NHE1是表达最广泛的亚型,它定位于质膜,参与很多生理过程,如细胞内pH(pHi)、细胞体积稳态和维持细胞骨架结构,并且对细胞生长、增殖、分化、细胞迁移和凋亡等发挥关键作用。Na^(+)/H^(+)交换器NHE1和HCO_(3)^(-)/Cl^(-)交换器AE2偶联作用,共同调节哺乳动物细胞体积减少。在医学方面,对NHE1的研究主要是在癌症、肿瘤细胞、人的心肌梗死及心血管疾病中的调控作用。本文对NHE1调节细胞内pH、细胞体积及细胞骨架组装的分子机制和卵母细胞减数分裂过程相关研究进行综述,以期为NHE1蛋白相关调控机制研究奠定基础。

毛皮动物矿物质元素营养研究进展

随着经济的迅猛发展,人们生活水平的提高,毛皮行业也呈现出强劲的发展趋势,因此对毛皮动物养殖技术的研究越来越深入。文章总结了近年来在毛皮动物矿物质研究方面的成果,包括矿物质作用及相互影响相互制约的关系,同时提出了生产实践中的问题和未来的研究方向。

哺乳动物卵母细胞冷冻保存技术研究进展

哺乳动物卵母细胞冷冻保存在种质资源保存、胚胎工程技术和人类辅助生殖方面具有重要意义。冷冻保存过程所产生的渗透压差导致卵母细胞体积迅速变化,引起微结构损伤甚至死亡。卵母细胞冷冻保存过程中的体积调控成为近年来的研究热点。文章总结了卵母细胞冷冻方法、冷冻载体、抗冻保护剂的种类及卵母细胞体积调控在细胞冷冻保存过程中的作用等方面的研究进展。

哺乳动物生殖细胞冷冻保存对其DNA甲基化影响的研究进展

哺乳动物生殖细胞和胚胎冷冻保存在辅助生殖技术中得到了广泛的应用,同时在保存物种的多样性方面发挥着巨大的作用。但是,冷冻引起的DNA甲基化对其印记基因缺陷性疾病的发生和后代生理功能的差异会有很大的影响。作者就冷冻保存技术对配子(精子和卵子)和胚胎的DNA甲基化的影响以及冷冻引起的DNA甲基化对后代的影响进行了综述,以期对配子的冷冻保存和辅助生殖技术的发展提供参考。

鹿科动物染色体研究进展

在细胞遗传学中,染色体的研究是很重要的一部分。在通过查阅相关文献后,本文对近年来鹿科动物染色体的相关研究方法,包括核型、显带分析以及荧光原位杂交等其他技术进行了概述,并指出应该在此基础上拓展新的、更具意义的研究领域。

哺乳动物早期胚胎发育调控的研究进展

精子和卵子结合形成受精卵后,最初的胚胎分裂周期调控是由储存在卵母细胞内的因素调控的,随着母源因子的降解,合子基因组激活并进行转录,自此,胚胎发育的一系列事件均由合子因素调控,这一过程称为母源-合子转换期,包括母体成分(mRNA和蛋白质)的降解和胚胎基因组激活。在这一过程中,组蛋白修饰、染色质开放程度以及染色质结构变化等表观遗传信息在配子发生和早期胚胎发育过程中经历了广泛的构建、消除以及重建过程。组蛋白和染色质结构的改变以及转录因子的可用性都受细胞周期依赖机制的调控,这对正确控制基因组激活的时间和激活的基因序列至关重要。本文将重点讨论组蛋白修饰在控制基因组转录方面的作用,以及细胞周期在控制细胞核和细胞质事件中所起的作用和转录因子对早期胚胎调控的影响。

同时检测动物布鲁菌病和结核病胶体金抗体检测试纸条的研制

本研究分别以布鲁菌LPS和牛分枝杆菌MPB70蛋白作为检测抗原,建立了动物布鲁菌病和结核病双抗原夹心法胶体金抗体检测技术,并研制了同时检测动物布鲁菌病和结核病的快速抗体检测试纸条,用于动物布鲁菌病和结核病临床快速血清抗体检测。检测试纸条与其他病原无交叉反应,与牛、鹿口蹄疫血清、巴氏杆菌病血清、耶尔森氏菌病血清无交叉反应;敏感性高,临床采集的布鲁菌病和结核病阳性血清最大稀释倍数可以达到1:512;特异性好,准确率高。研制的检测试纸条与现有的检测方法具有较高符合率:与RBT检测布病结果阳性符合率为100%,阴性符合率为96%,总符合率为96%;与牛结核γ-干扰素ELISA检测结核病结果阳性符合率94%,阴性符合率为97%,总符合率为96%。试纸条检测卡在吉林省多个地区进行临床试验,具有快速、敏感、特异、操作简单、可以用于现场快速检测等优点,能够同时用于动物布鲁菌病和结核病的临床抗体检测。

基于代谢组学技术的鹿血与鹿茸血鉴别研究

旨在研究鹿血与鹿茸血之间的小分子代谢物组分差异,为鹿血、鹿茸血相关产品的深度开发提供理论基础。采用超高液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS)技术,结合多元统计分析方法(PCA、OPLSDA)对鹿血与鹿茸血的整体代谢物组分进行比较,并进行定量分析。多元统计分析显示,鹿血与鹿茸血在X变量上区分明显,表明两者在小分子代谢物层面上是有着明显的区别。根据代谢物的峰值共筛选出28种显著差异表达代谢物,其中脂类、核苷酸及天然抗氧化剂-麦角硫因在鹿茸血中含量较高。鹿血与鹿茸血的代谢组学分析能够为鹿血相关产品的开发提供理论基础。

吉林梅花鹿肌肉发育关联基因MyoG的鉴定及生物信息学分析

为探明吉林梅花鹿MyoG基因的分子结构特征与生理功能,本研究通过提取吉林梅花鹿血液基因组DNA,利用PCR技术分段扩增、Sanger测序并拼接获取MyoG基因,对MyoG基因核苷酸及编码氨基酸序列的分子结构特征进行了生物信息学分析。结果表明,吉林梅花鹿MyoG基因序列长3162 bp(GenBank登录号:HZ56689),含有3个外显子、2个内含子及部分5 UTR和3 UTR,编码区(CDS)为684 bp,共编码227个氨基酸,与NCBI中甘肃马鹿、水牛及山羊该基因相似性分别为99%、94%和92%;通过分析推导氨基酸序列结构发现,1~89位氨基酸为MYOD家族特有的碱性结构域,85~136位为螺旋-环-螺旋DNA结合结构域,含有21个激酶磷酸化的位点;吉林梅花鹿与甘肃马鹿该基因CDS区存在6个突变位点,导致3个氨基酸位点发生了变异;序列相似性及分子系统进化分析显示,吉林梅花鹿MyoG基因与反刍动物山羊、绵羊及水牛的亲缘关系较近。吉林梅花鹿MyoG基因的克隆及序列结构特征的生物信息学预测分析为解析鹿科动物肌肉生长发育的分子调控机制奠定了理论基础。

鹿角DNA提取方法研究

收集63支鹿角,利用酚-氯仿法、改良酚-氯仿法、DNeasy~? Blood&Tissue Kit (50)、QIAamp~? DNA Investigator Kit (50)提取鹿角DNA,通过观察琼脂糖凝胶电泳结果,确定提取鹿角DNA的取样部位和提取方法。结果表明,鹿角中部DNA含量高于基部,更适合用于鹿角DNA提取工作;酚-氯仿法优于改良酚-氯仿法,DNeasy~? Blood&Tissue Kit (50)提取效果优于其他方法。进行鹿角DNA提取时,建议在鹿角中部取样,用DNeasy~? Blood&Tissue Kit (50)提取DNA。

线粒体DNA和Y染色体主要基因的研究进展

线粒体和Y染色体作为重要的分子遗传标记,越来越多地被应用于哺乳动物起源进化的研究。基于线粒体DNA的研究,多数研究通过Cytb、D-Loop区、12SrRNA、16SrRNA等单基因分析,少数通过多基因联合分析和全序列分析展开,对哺乳动物母系起源进化进行探讨。基于Y染色体的研究主要通过SRY、AMELY、USP9Y、DBY等单基因分析和多基因联合分析。综述了近年来基于线粒体DNA和Y染色体几个主要基因的鹿科及其他哺乳动物的起源进化研究现状,为动物起源进化研究提供理论依据。

腺病毒载体转染水貂耳缘成纤维细胞的研究

试验旨在探究利用携带标记基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒载体转染入水貂耳缘成纤维细胞的可行性及感染效率。首先利用组织贴壁法分离培养水貂原代耳缘成纤维细胞并进行传代,然后包装病毒Ad-EGFP并使用TCID 50法进行滴度检测,设置两组不同浓度梯度的病毒液感染水貂耳缘成纤维细胞,感染复数(MOI)值分别为0/100/300/500/700/900和0/10/30/50/70/90,通过在显微镜下观察阳性细胞占总细胞数的比值估计转染效率(%)。结果表明,组织贴壁法培养水貂耳皮肤组织11 d可长满原代细胞,传代细胞在3~4 d融合度可达80%左右,包装Ad-EGFP病毒滴度为1.99×1011 PFU/mL,用其感染水貂成纤维细胞最佳MOI值为30,瞬时转染效率可达90%以上。综上,利用腺病毒载体转染水貂成纤维细胞具有可行性,是一种高效的转染方式,为后续水貂基因组编辑前期验证试验奠定基础。

副流感病毒对不同宿主致病性研究进展

副流感病毒(PIV)广泛地存在于自然界,其基因型较多,宿主范围广泛,不仅引起人的呼吸道疾病,而且使牛,羊,犬等动物感染发病,给畜牧业生产造成较大的经济损失。论文就副流感病毒的病毒学基础、致病机制、引起不同宿主动物特别是牛、羊、犬等的广泛感染流行情况进行综述,为副流感病毒致病机制的研究以及诊断和预防策略的提出提供理论依据。

梅花鹿蜡片茸与血片茸脂质组分比较研究

梅花鹿鹿茸是一种传统名贵中药材,在我国已沿用两千多年。本研究通过LC-MS-MS技术对梅花鹿鹿茸的脂质组分进行比较分析。结果表明,共获得752种梅花鹿鹿茸脂质成分,共分为15个类别,其中磷脂酰乙醇胺相对含量最高,其次为磷脂酰胆碱和甘油三酯;利用OPLS-DA多元统计方法与单因素方差检验筛选到133种显著差异表达脂质分子(VIP> 1,P<0.05,差异倍数> 2),包含58种甘油三脂,22种磷脂酰胆碱,7种磷脂酰丝氨酸,35种磷脂酰乙醇胺,2种溶血磷脂酰胆碱,5种溶血磷脂酰乙醇胺和4种神经酰胺;相对定量结果显示,甘油三脂与磷脂类化合物在蜡片茸中高表达,而能够维持皮肤水分、调节细胞凋亡的神经酰胺类化合物在血片茸中高表达;另外,筛选到5种甘油三脂在三杈蜡片茸相对含量显著高于二杠蜡片茸。本研究详细分析了蜡片茸与血片茸的脂质组分,为鹿茸有效活性成分的挖掘与鹿茸生长机制的探究奠定了理论基础。

貉早期胚胎发育内环境的研究

为研究貉早期胚胎发育体内微环境变化,试验选用年龄相同、体重相似的成年健康母貉23只,在繁殖季节自然交配,并受配1～2次,以第1次交配为零点开始计时,分别于初配后29～99h(n=7)、100～126h(n=7)、169～268h(n=9)随机处死貉,用免疫组化、透射及扫描电镜的方法研究貉早期胚胎发育过程中输卵管和子宫的形态学和超微结构变化;用X射线能谱技术对貉输卵管液和子宫液中的钾、钙、铁、锌等9种元素进行测定。结果显示:①随着貉早期胚胎的发育,其后期输卵管长度、黏膜厚度、皱襞高度和上皮高度均显著减小(P<0.05),输卵管直径有所降低,但差异不显著(P>0.05);子宫黏膜厚度、皱襞高度及子宫腺密度均显著增加(P<0.05),子宫的直径和长度有所增加,但差异不显著(P>0.05)。②随着貉早期胚胎的发育,貉子宫黏膜上皮微绒毛、脂滴和溶酶体含量增多。③随着貉早期胚胎的发育,其后期输卵管液中硫、钙、铁、铜和锌元素含量均显著升高(P<0.05),磷含量显著降低(P<0.05),而钾、氯和钠含量呈波动性变化;子宫液中硫、氯、钾的相对含量逐渐降低(P>0.05),锌的相对含量显著降低(P<0.05),磷、钙、铁和铜的含量呈波动性变化。本试验初步揭示了貉早期胚胎发育内环境的变化,为貉胚胎体外培养体系的建立提供参考。

基于单细胞转录组测序的鹿茸生长中心细胞异质性研究

为了从单细胞水平探究梅花鹿鹿茸生长中心中细胞类型和基因表达的差异,即细胞异质性,试验采用单细胞转录组测序的方法,对生长75 d的梅花鹿鹿茸生长中心进行单细胞转录组分析,鉴定细胞类型,并对不同类型细胞进行基因表达模式、基因功能富集分析。结果表明:鹿茸生长中心包含了内皮细胞、周细胞、间充质细胞、免疫细胞、软骨细胞和成骨细胞等6种细胞类型,其中内皮细胞特异性表达PECAM1和VWF基因;周细胞特异性表达ABCC9和KCNJ8基因;间充质细胞高表达PRRX1和POSTN基因;免疫细胞特异性表达PTPRC和LCP1基因;成骨细胞特异性表达PHEX基因;软骨细胞特异性表达IGF1R基因。说明鹿茸的生长中心有着丰富的细胞类型,鹿茸的生长发育需要这些细胞的协调作用。

不同生长时期梅花鹿鹿茸差异蛋白质组学分析

旨在从分子水平认识鹿茸生长机制,本研究以10、40、60与130d的梅花鹿鹿茸为试验材料,运用双向凝胶电泳(2-DE)、质谱鉴定技术与生物信息学方法对梅花鹿鹿茸生长过程中差异表达蛋白质进行研究。结果显示,有46种蛋白质差异性表达,且主要参与细胞骨架、转运过程、信号转导、细胞凋亡、骨发育、蛋白质合成、核酸代谢、免疫、能量代谢、细胞增殖、抗氧化、蛋白质折叠等生物学过程。结合鹿茸的快速生长与快速骨化的独特生长过程,对差异表达蛋白质中的骨发育相关蛋白、抗氧化蛋白、细胞凋亡相关蛋白做进一步分析,发现P4HB、SPARC、过氧化物还原酶2、过氧化物还原酶4、半乳糖凝集素1、视黄酸结合蛋白1等6种蛋白质在鹿茸快速生长与快速骨化过程中起着重要的作用,为鹿茸生长与骨化机制的进一步研究奠定基础。

不同锰水平对雄性水貂生产性能、血清生化指标及脏器指数的影响

本试验旨在探讨饲粮锰水平对雄性水貂生产性能、血清生化指标及脏器系数的影响。选取120日龄健康、体重相近的雄性水貂75只,随机分为5组,每组15个重复,每个重复1只水貂,分别饲喂基础饲粮中添加0mg·kg-1(I)、50mg·kg-1(Ⅱ)、100mg·kg-1(Ⅲ)、300mg·kg-1(IV)、600mg·kg-1(V)锰的试验饲粮。试验期75d,分别测定水貂生产性能指标,计算脏器系数,测定血清中蛋白质指标、氮代谢指标及相关酶活性。结果表明,试验结束时水貂体重、体长、皮长第Ⅲ组均最高,与IV组差异不显著(P>0.05),但显著高于I组、Ⅱ组和V组(P<0.05),毛皮品质各组间差异不显著(P>0.05);饲粮锰水平对水貂肾脏、肝脏和心脏指数无显著影响(P>0.05);V组和IV组脾脏指数显著高于I组、Ⅱ组和Ⅲ组(P<0.05)。Ⅲ组水貂血清中白蛋白(ALB)和总蛋白(TP)显著高于I组和Ⅱ组(P<0.05),血清中球蛋白(GLOB)含量IV组和V组显著高于I、Ⅱ和Ⅲ组(P<0.05),V组最高;Ⅱ组和Ⅲ组血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性显著高于I组(P<0.05),各组丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性差异不显著(P>0.05);Ⅱ组水貂血清乳酸脱氢酶(LDH)活性显著低于I组、IV组和V组(P<0.05),Ⅲ组水貂血清中ALP的活性显著高于其他各组(P<0.05),而肌酸激酶(CK)各组之间差异不显著(P>0.05)。由此可见,在本试验条件下饲粮中添加100mg·kg-1的锰能够提高雄性水貂生产性能,同时提高血清中蛋白含量,以及氮代谢相关酶活性,有利于动物的生长发育,同时对脾没有损害。