荷斯坦奶牛瘤胃微生物元基因组BAC文库的构建与分析

采用未培养技术和脉冲场电泳技术直接从瘤胃微生物提取到大小在2Mb左右混合微生物DNA,经HindⅢ不完全酶切获得50～100kbDNA片段,将其连接在pCC1BAC载体上,转化E.coliEPI300,得到瘤胃微生物BAC文库,经对文库的鉴定分析,该文库的平均插入片段54.5kb,空载体率小于2%,库容837Mb,共保存15360个克隆。通过对该文库进行部分酶活性筛选,获得具有淀粉酶活性的克隆16个;纤维素酶活性的克隆26个,而且能降解纤维素的克隆中25个呈现多酶活性。这些结果表明该文库具有重要研究价值。

利用实时定量PCR对瘤胃甲酸甲烷杆菌定量方法的建立与应用

目的解决传统微生物评价方法存在的弊端,寻找快速、准确、灵敏的瘤胃微生物评价的新方法。方法利用实时定量PCR技术,以16SrDNA为靶序列,建立了瘤胃甲酸甲烷杆菌(Methanobacteriumformicicum)的分子定量方法。结果采用本文所设计的引物、探针以及相应的PCR反应体系,检测极限可达到30拷贝(15个甲酸甲烷杆菌),与传统检测方法相比要更为迅速、灵敏。采用实时定量PCR技术所测得的细菌数量与采用传统的最大或然数记数法所测的细菌数量具有很高的相关性(r=0.957,P<0.01),表明采用实时定量PCR方法能够准确反映瘤胃微生物数量的变化。利用所建立的方法对利鲁杂交肉牛和荷斯坦奶牛瘤胃液中甲酸甲烷杆菌进行了定量检测。结果表明,利鲁杂交肉牛瘤胃液中的甲酸甲烷杆菌浓度是荷斯坦奶牛的5.6倍。结论利用实时定量PCR技术建立的瘤胃甲酸甲烷杆菌的分子定量方法能够准确反映瘤胃微生物数量的变化。

不同饲养方式对荷斯坦犊牛的影响

试验对1～8周龄的犊牛在不同饲养方式下的体重、体高、体斜长、胸围、腹围增长和疾病发生率进行研究,旨在发现一种良好的、经济的饲养方式。试验结果表明:犊牛在单圈饲养时生长性能和健康状况明显好于双犊一圈饲养和散养;而双犊一圈饲养的犊牛在某些方面性状好于散养犊牛。

添喂淀粉对饲喂玉米秸秆绵羊瘤胃消化代谢的影响

将5只2.5岁龄装置了永久性瘤胃瘘管和十二指肠瘘管的新疆美利奴羯羊,采用5×5拉丁方设计,分别按0、2、4、6或8 g/d·kg体重添喂纯玉米淀粉,以研究添喂淀粉对饲喂玉米秸秆绵羊瘤胃消化代谢的影响.结果表明,给饲喂玉米秸秆为主的绵羊添喂淀粉,可使瘤胃液氨态氮浓度降低、挥发性脂肪酸浓度升高.玉米秸秆型日粮中含有适量的淀粉(8.5%～16.9%)可提高纤维素、半纤维素的消化率,增加到达小肠的瘤胃微生物蛋白量.但如果淀粉含量过高,则造成纤维素、半纤维素的消化率降低,到达小肠的瘤胃微生物蛋白、饲料蛋白质和总粗蛋白质量减少.