镰形扇头蜱半胱氨酸蛋白酶基因的克隆与表达及表达产物免疫保护性分析

目的在大肠杆菌中高效表达镰形扇头蜱半胱氨酸蛋白酶(cysteinase)CysA和CysB,并对表达产物进行免疫保护效果测定。方法将cysA和cysB基因亚克隆到pET-32a载体,转化感受态大肠杆菌BL21,在IPTG诱导下进行表达;表达产物免疫家兔,首次免疫抗原剂量免为300μg/兔,二次免疫和三次免疫均为150μg/兔。三次免疫后进行攻击蜱试验,观察免疫保护效果。结果在IPTG诱导下,重组质粒pET32a-cysA和pET32a-cysB在大肠杆菌中获得高效表达,产生Trx-cysA和Trx-cysB融合蛋白,这两种融合蛋白经纯化后免疫家兔,分别使成蜱的吸附率降至17%和17%,饱血率降至42%和22%。结论重组质粒pET32a-cysA和pET32a-cysB在大肠杆菌中高效表达,表达产物能诱导家兔产生一定程度的抗蜱保护性免疫力。

RT-PCR检测犬粪便中的冠状病毒

根据犬冠状病毒(caninecoronavirus, CCV) 的S基因序列, 用计算机设计并合成了1对引物P1、P2, 以此引物及以从美国进口的CCV疫苗的反转录产物为模板, 初步建立了检测CCV的RT PCR。将纯化的PCR产物成功地克隆到pGEM T easy载体中, 鉴定、测序并进行同源性分析。结果表明, 与1 71和UCD 1株同源性分别为91 5%和94 3%。该RT PCR能对疫苗中CCV及CCV参考株USCV B1的S基因进行特异性地扩增,长度为575bp, 对犬的其他病毒及CRFK细胞未能扩增出任何片段, 该RT PCR能检测出0 5μLCCV培养液/2g粪便。用建立的RT PCR在上海对50条犬粪便进行检测, 结果表明CCV阳性6例。本研究建立了检测犬粪便中的CCV的RT PCR, 能用于犬冠状病毒流行病学调查。

中药抗球虫散剂TF-103中没食子酸含量的测定

目的 建立没食子酸含量测定方法以控制中药抗球虫散剂 TF- 10 3质量。方法 反相高压液相色谱法。色谱条件 :色谱柱 :Diam onsil钻石 C18(4 .6× 2 5 0 ,5 ì) ;流动相 :乙腈 - 0 .2 %磷酸水溶液 (5∶ 95 ) ,流速 :1m l/ min;检测波长 :2 70 nm。结果 线性范围 :0 .0 82～ 0 .82 μg,平均回收率为 93.73% ,RSD0 .5 5 %。结论 该方法简便 。