应用Taqman实时PCR法检测禽肉中沙门菌的研究

目的 建立敏感快速的检测禽肉中沙门菌的实时PCR法.方法 以invA基因为基础,建立RT-PCR法并验证其特异性.选用肠炎沙门菌CMCC 50041,制备不同浓度的纯菌液,用RT-PCR进行检测,制作标准曲线并计算扩增效率.进行人工染菌实验,染菌量分别为每25 g鸡肉样本1、10、102、103、104、105和106 CFU.分别在增菌0、4、8、12、18 h取1 ml培养液,提取DNA进行RT-PCR检测,并同时用PCR和传统方法进行检测,比较3种方法检测的敏感性和特异性.采集16份市售整鸡样本,用这3种方法进行检测,进一步比较三者的阳性检出情况.结果 建立的RT-PCR法特异性好,对纯菌液的最低检测限为5.2×103 CFU/ml,在5.2×103～ 5.2×1010 CFU/ml范围内,菌浓度的对数值和检测结果的Ct值线性关系良好,R2=0.999.人工染菌样本在增菌12 h后,RT-PCR法检出限可达l CFU/25 g,与PCR检测的敏感性一致,比传统方法的检出限敏感10倍.根据增菌12 h的检测结果,建立了RT-PCR样本标准曲线.采用RT-PCR检测16份禽肉样本,检出7份阳性,与PCR一致,高于传统方法（5份阳性）.根据样本标准曲线,对检测样本进行定量分析,确定了阳性样本中初始含量菌.结论 所建立的RT-PCR具有快速简便、敏感特异等优点,适用于禽肉中沙门菌的快速定量检测.