AsiaⅠ型口蹄疫病毒VP1基因在昆虫细胞/杆状病毒中的表达

利用杆状病毒表达系统对AsiaⅠ型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1基因在Sf9昆虫细胞中进行表达,为研究AsiaⅠ型FMDVVP1蛋白功能及建立AsiaⅠ型FMDV血清学诊断方法奠定基础。采用PCR方法从pGEM-T-Easy-AsiaⅠ型VP1质粒中扩增VP1基因,将其插入杆状病毒转座载体pFastBacHTA,构建的重组质粒pFast-BacHTA-VP1再转入DH10Bac感受态细胞,经三重抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,然后转染Sf9昆虫细胞。PCR鉴定证实VP1基因正确地插入到Bacmid中,成功构建了杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1,SDS-PAGE和Western-blotting检测结果表明,VP1基因在Sf9昆虫细胞中表达出约26.5ku的VP1蛋白。将可溶性表达的融合蛋白用Ni-NTA亲和层析方法进行纯化,通过ELISA分析,能特异性地检测出AsiaⅠ型口蹄疫病毒阳性血清。AsiaⅠ型FMDV VP1基因在杆状病毒表达系统中的成功表达为AsiaⅠ型FMDV VP1蛋白的抗原性及血清学抗体水平检测研究奠定了基础。

猪繁殖与呼吸综合征诊断技术研究进展

1991年，荷兰中央兽医研究所Wensvoort博士用原代猪肺泡巨噬细胞（PAM）首次分离到猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV），并命名为Lelystad病毒（PRRSV欧洲型代表株）。次年，美国科学家Collins和Benfield等用CL2621细胞也分离到一株PRRSV并命名为VR-2332（PRRSV美洲型代表株）。PRRSV属于尼多病毒目（Nidovirales）、动脉炎病毒科（Arteriviridae）、动脉炎病毒属（Arterivims）成员。

种禽场疫病监测与净化

为掌握种禽场主要垂直传播性动物疫病流行状况,为制定种禽疫病净化政策提供科学依据,农业部自2011年起对全国祖代及以上种鸡场和4个国家级家禽基因库开展禽白血病、网状内皮组织增殖症、鸡白痢等主要垂直传播性疫病监测。迄今为止,种禽场疫病监测已持续5年,充分了解了种禽场垂直传播疫病的感染情况。自此基础上,中国动物疫病预防控制中心对祖代以上种鸡场疫病净化现状持续跟踪,深入了解种禽场疫病净化存在的问题和面临的困境,促进疫病净化工作深入开展。

荧光偏振技术在布鲁氏菌病检测中的应用

布鲁氏菌病是重要的人兽共患病,早期感染的检测结果对治疗和康复具有重要意义。本文总结目前常用的布鲁氏菌病检测技术,阐述荧光偏振技术的基本原理及应用,并重点介绍荧光偏振技术在布鲁氏菌病检测中的运用,以期为布鲁氏菌病的临床检测和流行病学调查研究提供参考。

犬瘟热病毒捕获ELISA试剂盒的研究

建立犬瘟热病毒捕获ELISA，用于该病的快速诊断。方法采用犬抗CDV抗体包被96孔反应板，用以捕获样品中的CDV，再用CDV单克隆抗体和酶标羊抗鼠IgG检测被捕获的CDV抗原，经方阵试验，确立了抗原捕获ELISA的反应条件，并组装ELISA试剂盒。结果用建立的ELISA方法，检测REOV、CPV2、USCCV、CAV-1、CAV-2病毒，均不发生交叉反应；检测犬的临床样本110份。

猪繁殖与呼吸综合征病毒强毒株HUB2株全基因组序列分析

从湖北省暴发猪“高热病”的猪场分离出1株猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV），并命名为HUB2株。根据GenBank上已发表的PRRSV全基因序列设计引物进行RT—PCR扩增，获得PRRSV HUB2株全基因组cDNA序列。测序结果表明PRRSV HUB2株基因组全长15320bp（不包括PolyA尾）。分析结果显示该毒株与PRRSV美洲型标准株（VR-2332）和欧洲型标准株（LV）全基因核苷酸同源性分别为89．6％和50．3％，说明HUB2属于美洲型毒株。与VR-2332相比，HUB2株非结构蛋白（Nsp2）存在2处不连续的缺失（共缺失30个氨基酸），其缺失位点位于推定氨基酸序列的第481位和532～560位。此次新出现的强毒株全基因组序列特性的揭示为科学防治猪高致病性蓝耳病奠定了理论基础。

猪繁殖与呼吸综合征病毒Myanmar株全基因序列的测定与遗传变异分析

2010年首次从缅甸某发病猪场采集的疑似猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and re-spiratory syndrome,PRRS)病料中分离到一株PRRSV,命名为PRRSV Myanmar株。应用RT-PCR方法分段扩增出Myanmar株的各基因片段,并将扩增产物分别连接到pEASY-T3载体并进行测序。序列测定结果表明,Myanmar株基因组全长15 411bp(不包括PolyA尾),包含10个开放阅读框,5′UTR长189nt,3′UTR长151nt。全基因序列与经典PRRSV VR2332株核苷酸序列的一致性为99.3%,与高致病性PRRSV NVDC-JXA1株核苷酸序列的一致性为89.5%。在非结构蛋白Nsp2区域并未出现特征性的30个氨基酸的缺失,而与欧洲型标准毒株(LV)核苷酸序列的一致性为54.6%。上述结果说明Myanmar株在基因型上属于经典美洲型。同时,遗传进化树分析显示,Myanmar株与PRRSV 01NP1.2株、RespMLV株、BJ-4株及PL97-1株的亲缘关系最近。