以大肠埃希氏菌肽脱甲酰基酶为靶点的高通量筛选模型的建立(英文)

本文用 PCR法从大肠埃希氏菌 K-12中克隆出肽脱甲酰基酶 (peptide deformylase,PDF)基因 ,通过测序确证与文献报道的 pdf基因序列完全一致。将 p df连接到原核蛋白表达载体 p ET-3 0 -a(+ )上 ,并转化到大肠埃希氏菌 BL 2 1(DE3 )菌株中 ,IPTG诱导表达。过量表达的 PDF酶用 Q Sepharose HP离子交换柱和 Superdex 75纯化得到高纯度 Ni-PDF。应用荧光测试仪Polar Fluostar检测 PDF对底物 For-Met-Ala-Ser的水解活性 ,PDF酶的已知抑制剂放线酰胺素 (actinonin)为阳性对照 ,通过优化酶反应条件 ,建立了以