ARHI在胰腺癌组织中mRNA水平及蛋白表达

目的 研究胰腺癌组织中ARHI的mRNA水平与蛋白表达情况。方法 用单克隆抗体免疫组化及地高辛标记cDNA探针原位杂交的方法，对57例胰腺癌手术切除组织进行ARHI蛋白及mRNA检测，并以正常胰腺组织作对照。结果 ARHI在正常胰腺组织中的免疫组化及原位杂交阳性率分别为84．2%及82．5%；在胰腺癌中两者阳性率均为52．6%，阳性率显著下降（P＜0．01）；ARHI的mRNA与蛋白表达有较好的一致性；此外，在纤维母细胞、平滑肌细胞、血管壁及肠粘膜上皮均可见阳性着色；ARHI的阳性率与癌分化程度及临床分期无关。结论 ARHI在胰腺癌中呈下调性表达，可能是一个抑癌基因；ARHI广泛存在于腺上皮及纤维、平滑肌等细胞中。

阻断TGF α-EGFR自泌环对胰腺癌细胞体外生长的影响

目的研究阻断ＴＧＦα－ＥＧＦＲ自泌环对胰腺癌细胞生长的影响。方法构建了反义ＥＧＦＲ的表达载体ｐＣＭＶ－ＡＳ－ＥＧＦＲ，转染已经反义ＴＧＦα转化的胰腺癌ＰＣ－７细胞，经Ｇ４１８筛选，获得稳定的双重转化细胞系ＰＣ－７／ＡＳ－ＴＧＦα／ＡＳ－ＥＧＦＲ。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、１２５Ｉ－ＥＧＦ结合试验分析双重转染细胞系基因的整合及表达。ＤＮＡ凝胶电泳、流式细胞术、原位凋亡检测细胞凋亡。结果双重转染细胞系有外源ＴＧＦα基因的整合及表达，内源性ＥＧＦＲ及ｃｙｃｌｉｎＤ１ｍＲＮＡ表达下调、细胞表面ＥＧＦＲ受体表达下降，与反义ＴＧＦα单独作用比较，反义ＥＧＦＲ与反义ＴＧＦα的联合作用更强。３Ｈ－ＴｄＲ掺入率由２５％降至１４．５％。生长抑制率由７８．８％提高到８６．０％、软琼脂集落形成能力完全丧失。双重抑制后，细胞更容易发生凋亡。结论对胰腺癌中异常信号传导途径的阻断，能明显地抑制肿瘤恶性生物学行为，使肿瘤细胞恶性表型部分逆转。

Survivin——一个新的肿瘤特异性的抑制凋亡因子

Survivin(SVV)是IAP(inhibitorofapoptosis)家族的一个新成员。具有抑制细胞凋亡的作用,并在细胞的有丝分裂和胞质分裂中起重要的作用。研究表明SVV是一个肿瘤特异性的抑制凋亡因子它在成熟的终末分化组织中基本无表达,而在胚胎发育过程中和人的肿瘤组织中表达,SVV的过度表达是提示肿瘤预后不良的一个因素,并可能是导致肿瘤细胞耐药性的因素。SVV是肿瘤靶向治疗的一个很好的靶基因蛋白。

人胰腺腺癌细胞系中p16基因、cyclin D1基因和pRb蛋白的改变

目的研究胰腺腺癌细胞系 pRb- p16细胞调节途径相关因子的异常情况。方法用 PCR及单链构象多态性 (SSCP)的方法检测 5株人胰腺腺癌细胞系 p16基因的缺失和突变；用 Southern印迹分析 cyclin D1基因的扩增；用 Western印迹分析检测 pRb基因的表达。结果 2株胰腺腺癌细胞系存在 p16基因第 1外显子纯合性缺失，未发现第 1、 2外显子的基因突变； 1株细胞系有 cyclin D1基因的扩增； pRb基因在 5株细胞系中均呈高磷酸化的表达。结论胰腺腺癌细胞系中存在 pRb- p16细胞调节途径的异常，主要表现为 p16和 cyclin D1基因的改变。

反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y生长和凋亡的作用

目的 研究反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤（NB）细胞株SH-SY5Y的生长和凋亡的作用。方法采用定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体PBabe-puro/Asbcl-2；应用脂质体Lipofectamine转染SH-SY5Y，经嘌呤霉素筛选，应用RT-PCR证实外源性反义bcl-2 mRNA的表达，建立细胞株SH-SY5Y/Asbcl-2；应用免疫组化和Western印迹分析Bcl-2蛋白的表达变化；MTT法做细胞的生长曲线观察细胞的生长情况；通过提取基因组DNA检测顺式氯铂（CP）诱导的细胞凋亡所形成的DNA 梯带。结果RT-PCR证实转染细胞SH-SY5Y/Asbcl-2中有外源性反义bcl-2 mRNA的表达；免疫组化及Western印迹分析显示SH-SY5Y/Asbcl-2细胞的Bcl-2蛋白表达明显降低；生长曲线显示SH-SY5Y/Asbcl-2细胞生长缓慢;加入CP相同时间后，SH-SY5Y/Asbcl-2细胞凋亡形成的DNA 梯带更明显。结论脂质体方法转染携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体能够获得稳定转染和表达反义bcl-2 mRNA的细胞；反义bcl-2 mRNA可抑制内源性Bcl-2蛋白的表达，抑制SH-SY5Y细胞的生长，增加SH-SY5Y细胞对CP的敏感性，促进细胞凋亡。

女性下生殖道癌与人乳头瘤病毒类型相关性分析

为进一步探讨不同类型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与下生殖道癌的不同组织学类型的相关性，本研究采用病理检查和多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术，对５４例宫颈癌和３３例外阴鳞癌标本的ＨＰＶ感染情况与临床病理特征之间的关系进行研究。方法（１）ＤＮＡ提取：取１０μｍ石蜡组...

表达反义N-myc逆转录病毒载体对神经生长因子诱导神经母细胞瘤细胞分化的影响

目的研究反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染后人神经母细胞瘤细胞在神经生长因子处理后的诱导分化情况，探讨Ｎ－ｍｙｃ在神经生长因子诱导分化中的意义。方法用基因重组技术构建表达反义Ｎ－ｍｙｃ的逆转录病毒载体。用ＴｒａｎｓｆｅｃｔａｍＲｅａｇｅｎｔ等多种基因转染方法，转染已经基因转染恢复了神经生长因子受体表达的人神经母细胞瘤系，建成表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系。用神经生长因子处理转化细胞系，观察ＮＧＦ是否能诱导分化。同时用ＴＵＮＥＬ原位凋亡检测技术及超微结构技术研究表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系凋亡的情况。结果表达反义Ｎ－ｍｙｃ的转化细胞系经单链ＲＮＡ探针杂交，证实其Ｎ－ｍｙｃ的表达明显降低。用神经生长因子处理这些转化细胞系，细胞出现明显的形态学分化。ＴＵＮＥＬ技术及超微结构研究表明，经反义Ｎ－ｍｙｃ转染的细胞系细胞凋亡增多。结论反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染能有效抑制Ｎ－ｍｙｃ的表达，进而促进神经生长因子诱导人神经母细胞瘤细胞的分化。反义Ｎ－ｍｙｃ基因转染能使神经母细胞瘤细胞凋亡增多。

嗜铬素A和突触素在肾上腺肿瘤中的表达及其临床意义

目的探讨嗜铬素A(CgA)和突触素(Syn)在各型肾上腺肿瘤中的表达及其临床意义。方法对69例肾上腺肿瘤和4例正常肾上腺组织运用免疫组化方法进行组织染色,研究CgA和Syn的表达,并采用χ2检验进行统计学分析。结果在正常肾上腺组织,CgA和Syn主要表达于髓质。CgA在全部25例嗜铬细胞瘤中均呈阳性表达,而在肾上腺皮质肿瘤中极少表达;Syn在肾上腺皮质腺瘤、皮质癌、嗜铬细胞瘤及肾上腺转移癌的阳性表达率分别为96.4%(27/28)、87.5%(7/8)、96.0%(24/25)和75.0%(6/8)。结论CgA在肾上腺皮质与髓质肿瘤间、嗜铬细胞瘤与恶性嗜铬细胞瘤间的表达率差异有统计学意义。CgA、Syn可作为标志物对各型肾上腺肿瘤进行鉴别诊断。