云南省两市区脊髓灰质炎灭活疫苗接种情况调查

目的:分析云南省昆明市五华区及丽江市脊髓灰质炎疫苗(PV)接种情况及脊髓灰质炎灭活疫苗(IPV)在每个剂次中所占的比率及普及情况。方法:从两地疾病预防控制中心儿童免疫规划信息管理系统中收集2016年5月～2017年7月儿童PV接种数据,应用描述性流行病学方法进行分析。结果:2016年5月～2017年7月,五华区共接种PV 65 349剂,每一剂接种率均为99%以上,第1、2、3及4次剂IPV所占比率分别为86. 02%、33. 62%、26. 30%及20. 33%;丽江市共接种脊髓灰质炎疫苗21 962剂,每一剂次接种率均为99%以上,第1、2、3及4次剂IPV所占比率分别为39. 75%、7. 55%、8. 20%及0. 07%,使用IPV种类多为Sabin-IPV、Salk-IPV、DTa P-IPV/Hib,DTa P-IPV/Hib所占比率最高(62. 63%,χ~2=9 597. 6,P <0. 001);丽江市IPV相对单一,95%为免费Sabin-IPV,五华区IPV接种率明显高于丽江市(χ~2=22 614. 9,P <0. 001)。结论:昆明市五华区IPV接种率明显高于丽江市。

云南省汉族人群TNF-α基因多态性与非小细胞肺癌发生、发展的相关性

背景与目的:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)不仅是一种重要的炎症因子,还与肿瘤的发生、发展密切相关。探讨TNF-α基因多态性与云南省汉族人群非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)发生、发展的相关性。方法:选取云南省425例汉族人群NSCLC病例和438名健康体检者,采用TaqMan探针基因分型法对TNF-α基因启动子区域5个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点rs1799964(-1031T>C)、rs1800630(-863C>A)、rs1799724(-857C>T)、rs1800629(-308G>A)和rs361525(-238G>A)进行基因分型并分析其等位基因、基因型及所构建的单倍型在NSCLC病例及健康对照者中的频率差异。结果:TNF-α基因启动子5个SNP位点的等位基因和基因型频率在NSCLC病例组和对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。病例分层分析发现,rs1799724(C>T)的T等位基因在腺癌组中的频率显著高于对照组(P=0.010,OR=1.56,95%CI:1.11~2.19),在显性模式下携带T等位基因的个体(TT+CT)患肺腺癌的风险显著升高(P=0.007,OR=1.66,95%CI:1.15~2.42)。rs1800630(C>A)的A等位基因在腺鳞癌及其他类型肺癌组中的频率显著高于对照组,差异有统计学意义(P=0.013,OR=2.15,95%CI:1.16~3.96)。单倍型分析结果显示,单倍型rs1799724T-rs1800629G在腺癌组中的频率显著高于对照组(P=0.048,OR=1.42,95%CI:1.00~2.01)。结论:位于TNF-α基因启动子区域的SNP位点rs1799724(C>T)等位基因T和基因型TT可能是云南省汉族人群NSCLC中腺癌发生的风险性因素。SNP位点rs1800630(C>A)等位基因A可能是云南省汉族人群NSCLC中腺鳞癌及其他类型肺癌发生的风险性因素。

流感病毒裂解疫苗儿童剂型在小鼠中的安全性及免疫原性研究

目的比较本研究所制备的流感病毒裂解疫苗儿童剂型(昆明疫苗)与赛诺菲巴斯德流感裂解疫苗儿童剂型(巴斯德疫苗)在动物中的安全性和免疫效果。方法用流感病毒裂解疫苗儿童剂型于0d和14d,腹腔内接种ICR小鼠。每天称取体质量,免疫后35d,眼眶采血分离血清,用微量血凝抑制(HI)法测定小鼠血清中特异性抗体滴度,计算抗体阳转率、保护率及几何平均滴度(GMT)增长倍数。结果免疫后小鼠体质量逐渐增加,组间无明显差异;两组间HI抗体阳转率、保护率及H1N1、H3N2型和B型HI抗体倍数差异无显著意义。结论两种疫苗均具有很好的安全性和免疫原性。

云南汉族人群CD80基因多态性与宫颈癌发生发展的相关性研究

目的探讨CD80基因多态性与云南汉族人群宫颈癌发生发展的相关性。方法本研究选取云南地区汉族人群癌前病变(CINⅢ期)患者126例,宫颈癌患者450例,健康体检人群500例,采用TaqMan探针基因分型方法对CD80基因中的4个SNP位点rs16829980(A>G)、rs16829984(G>C)、rs41271391(G>T)和rs41271393(C>T)进行基因分型,并研究其等位基因、基因型及所构建的单倍型在CINⅢ期患者、宫颈癌患者和健康对照人群中分布频率的差异。结果 rs16829984(G>C)等位基因C和G在CINⅢ期组和对照组、癌症组和对照组中分布频率的差异具有统计学意义(P=0.026和0.006)。rs16829980(A>G)中等位基因A和G在CINⅢ期组和癌症组中分布频率的差异具有统计学意义(P=0.038)。而rs41271391(G>T)和rs41271393(C>T)的等位基因和基因型在病例组(CINⅢ期组和癌症组)和对照组中的分布频率的差异无统计学意义(P>0.05)。单倍型分析结果显示AGGC单倍型可能是宫颈癌发生的危险因素(OR=1.449;95%CI:1.096-1.915)。结论位于CD80基因启动子区域的SNP位点rs16829984(G>C)等位基因C可能是云南汉族人群宫颈癌发生的保护性因素(OR=0.700;95%CI:0.510-0.960),rs16829980(A>G)等位基因A可能是云南汉族人群CINⅢ期向宫颈癌发展的保护性因素(OR=0.703;95%CI:0.503-0.982)。

利用恒河婴猴模型对肠道病毒71型传播感染特征的生物学分析

本文在前期工作基础上,进一步对肠道病毒71型（EV71）从恒河婴猴的感染个体向其他未感染个体传播的可能性及相关生物学特性做了初步分析。通过喷雾形式经呼吸道感染1~2月龄恒河婴猴（A组）;在观察临床症状同时,于感染后第7天,取该组动物粪便处理后,将上清液以喷雾形式经呼吸道感染新的婴猴个体（B组）,随后对该次代感染个体进行同样临床观察;并对哺乳B组婴猴的母猴（C组）也进行全面观察和分析。同时,将A组动物粪便处理后的上清液经血液感染的婴猴作为对照。分析临床症状,血液、粪便及咽拭子病毒载量,中和抗体效价,组织病理学改变。结果提示,恒河婴猴作为EV71感染动物模型,能反映病毒在个体间传播的基本生物学特征。依据实验结果,可以初步推断,EV71在易感人群中的主要传播途径是呼吸道;同时,病毒也可从低龄个体向成年个体传播。这些资料为进一步探讨EV71在儿童群体中的发病规律提供了一定的理论依据。

体外诱导树鼩骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的实验研究

目的探讨树鼩骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)向神经元样细胞分化的可行性。方法通过采用不同诱导物浓度的神经元样细胞诱导液对体外培养的树鼩BM-MSCs向神经元样细胞进行诱导分化,用PCR法检测细胞神经元烯醇化酶(NES)和α-突触核蛋白(α-SYN)表达情况,并用NES抗体进行细胞免疫荧光染色鉴定。结果使用浓度为10 ng/mL表皮生长因子(EGF)和20 ng/mL碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)诱导液在体外诱导培养树鼩BM-MSCs至12 d时可以得到良好诱导结果。结论优化的双细胞因子诱导培养液可以成功将树鼩BM-MSCs诱导分化为神经元样细胞,分化的细胞符合神经元样细胞的一般特征。

候选无细胞百白破-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗在大鼠上的免疫保护效果研究

目的观察候选无细胞百白破-Sabin株灭活脊髓灰质炎联合疫苗(DTaP-sIPV)在大鼠中的免疫保护效果,为疫苗临床前研究提供依据。方法将候选疫苗DTaP-sIPV、无细胞百白破-灭活脊髓灰质炎-b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP-IPV/Hib)、吸附无细胞百白破-b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTaP/Hib)、百日咳疫苗效力参考品(全细胞疫苗,wP)按0、30、60 d 3剂免疫程序免疫Wistar大鼠,检测各组大鼠每剂免疫后的血清中各组分抗体水平。在免疫完成后3周,用百日咳18323株通过气雾攻击的方式感染大鼠。在感染后的第3、7、14、21和28天检测各组白细胞数、肺部菌落克隆形成数以及百日咳疫苗组分抗体变化水平。结果候选疫苗组3剂次免疫完成后PT抗体几何平均滴度(GMT,log2)为16.74,FHA抗体GMT为18.44,PRN抗体GMT为10.75,DT抗体GMT为17.34,TT抗体GMT为17.84,针对3种Sabin脊髓灰质炎病毒株(Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型)的抗体的GMT分别为7.57、8.41和9.70,均达到100%阳转。候选疫苗抗原组分抗体除了PRN和I型IPV外,其他组分抗体水平均与疫苗对照组相比无显著性差异。在基础免疫完成后3周对大鼠进行百日咳杆菌气雾攻击,各疫苗组均表现较好的保护效果,白细胞水平都呈现平稳状态,虽然在肺部也检测到少量细菌定植,但各疫苗组间差异不明显,且在感染后第28天都清除至检测限;而空白对照组在肺部则检测到了大量细菌定植,且在感染后第28天都并未清除至检测限,百日咳特异性的FHA和PRN抗体在感染后的第14天也出现了相应的升高。结论候选疫苗在Wistar大鼠模型上具有较好的免疫保护效果。

单纯疱疹病毒疫苗的研究进展

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)属致病性人类α疱疹病毒,能引起龈口炎、角膜结膜、脑炎以及生殖系统感染和新生儿的感染等多种疾病。HSV包括2个血清型:Ⅰ型(HSV-1)和Ⅱ型(HSV-2),可以在三叉及骶尾神经节等组织内建立终身潜伏状态,并且周期性复活而引起疾病复发[1]。感染HSV-1主要引起口唇及颜面、腰部以上的部位感染;感染HSV-2者80%以上引起生殖系统感染,主要通过性传播。

流感病毒裂解疫苗病毒种子批的制备和培养条件的研究

目的制备流感病毒裂解疫苗的主代和工作种子批,优化病毒培养条件提高产量,制备高质量的流感病毒裂解疫苗。方法将H1N1、H3N2和B型3株流感病毒分别接种SPF鸡胚,收获尿囊液,制备流感病毒裂解疫苗主代及工作种子批。流感疫苗工作种子批按不同稀释倍数、pH值、收获时间和冷胚时间优化病毒培养条件,制成疫苗,进行产量、安全性和免疫原性研究。结果通过优化不同型别流感病毒的培养条件,提高了抗原的血凝滴度,血凝滴度达到1∶1 024及以上,制备的疫苗具有良好的安全性和免疫原性。结论制备出了高产量和高质量的流感病毒裂解疫苗。

云南地区恒河猴线粒体DNA控制区遗传多态性研究

目的从分子水平探讨云南地区恒河猴遗传多样性,为今后开展恒河猴遗传资源的保护及合理利用提供借鉴和背景资料。方法采用PCR直接测序法测定云南地区恒河猴96份样品的线粒体DNA控制区全序列,用Mege 4.0和DNA SP软件对变异位点数、简约信息位点数、单倍型、单倍型多样度、核苷酸多样度等遗传信息进行分析,基于邻接法(neighbor-joining,NJ)和最小进化法(minimum-evolution,ME)构建系统发生树。结果在96份样品中,共检测出了149个多态性位点,定义了46种单倍型,单倍型多样度(Hd)为0.968±0.007,核苷酸多样度(Pi)为0.020。结论云南地区恒河猴存在着较丰富的遗传多态性。

单纯疱疹病毒2型疫苗的研究进展

单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)是人类疱疹病毒家族中α家族成员,可引起多年龄段的人群生殖器疱疹及其他疱疹疾病。由于该病毒具有复杂的基因结构及感染病理,其感染至今尚无有效的治疗方法。该病毒可抑制机体免疫系统,在神经细胞潜伏感染,具有重激活特性,因此,其疫苗的研制亦需要复杂的技术,且面临重重的挑战。

云南省1株柯萨奇病毒A组8型分离株全基因组分析

目的分析柯萨奇病毒A组8型(Coxsackievirus A8,CVA8)云南分离株A8-1/YN/CHN/2019全基因组序列及其遗传特性,以期了解CVA8的流行和变异情况。方法设计针对CVA8的引物,提取病毒RNA,RT-PCR扩增VP1序列并测序,BioEdit 7.2.3拼接得到全基因组,使用MEGA 7.0软件进行系统进化分析,应用Simplot 3.5.1及RDP4软件进行重组分析。结果A8-1/YN/CHN/2019株长7396 nt,编码2188个氨基酸。其VP1与CVA8原型株AF081299/Donovan/USA/1998核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为81.04%和95.24%;A8-1/YN/CHN/2019株属于基因型E,其他中国分离株位于D和E型。重组分析发现A8-1/YN/CHN/2019株在非结构编码区的P2和P3段上发生重组。结论A8-1/YN/CHN/2019株为E基因型,并在P2、P3段的非结构区发生了重组事件。

2019年云南省昆明市柯萨奇病毒A组16型毒株的分离鉴定及其VP1基因遗传特征分析

目的对2019年云南省手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)患者粪便中分离获得的柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)毒株的全VP1基因遗传特征进行分析。方法使用人胚肺二倍体KMB-17细胞和非洲绿猴肾Vero细胞分离病毒,设计针对CVA16全VP1基因序列引物,采用RT-PCR扩增目的基因片段并测序;利用MEGA 7.0和Geneious 9.0.2等软件对全VP1序列进行分析。结果共分离获得26株CVA16毒株,其中有8株KMB-17分离株和18株Vero分离株。随机选取20株CVA16分离株进行分析,发现3株B1a和17株B1b基因亚型;其中17株CVA16 B1b分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别为93.8%~100%和98.3%~100%,与国内其他分离株的核苷酸和氨基酸同源性为91.1%~99.2%和97.3%~99.0%;3株B1a分离株的核苷酸和氨基酸同源性为98.0%~98.1%和99.3%,与国内其他B1a分离株的核苷酸和氨基酸同源性为88.7%~98.7%和98.3%~99.7%;17株B1b分离株与其他3株B1a的核苷酸和氨基酸同源性为87.4%~88.4%和97.3%~98.7%。结论2019年昆明地区流行的CVA16属于B1a和B1b基因亚型,以B1b为主,且均为中国内地流行株。

miRNAs在甲基苯丙胺成瘾中的作用研究进展

甲基苯丙胺(methamphetamine,METH)成瘾是机体长期接触METH后,中枢神经系统在分子、细胞、神经环路功能和脑结构等层次发生的代偿性适应,该过程有多种途径和多种机制共同参与。miRNAs作为一种新型基因转录后调控分子和突触的调节因子,大量存在于中枢神经系统,对中枢神经系统具有重要的调控作用。研究表明,miRNAs在METH成瘾中发挥着重要的调控作用。该文对miRNAs在METH成瘾机制中的表达特征及调控作用进行综述,并将与METH成瘾相关的miRNAs分子以及各miRNAs分子在不同组织器官中的差异性表达部位进行归纳整理,为进一步研究miRNAs分子在METH成瘾中的作用及发现新的药物作用靶点提供参考。

人类与部分实验动物RETN基因同源性分析

目的分析人类与部分实验动物的RETN基因同源性,为人类RETN基因相关疾病及基因功能研究对理想实验动物的选择提供依据。方法提取猕猴、大鼠、小鼠和树鼩的脂肪组织总RNA,用相应的RETN引物进行RT-PCR,对其产物进行双向测序;同时在GenBank中查询人类、猪、牛的RETN基因序列;再运用ORF Finder软件调取其ORF核苷酸序列和氨基酸序列,用DANMAN软件对所获得的序列进行比对,分析其同源性。结果人类RETN的核苷酸序列与猕猴、小鼠、树鼩、大鼠、猪、牛的同源性分别为95.4%、65.4%、65.4%、66.4%、81.0%、81.0%;氨基酸序列分别为91.7%、55.6%、55.6%、53.7%、75.9%、72.2%。;系统进化树结果表明,就RETN基因而言,人与猕猴的亲缘关系较近。结论基于同源性分析结果,在RETN的进化上猕猴与人类存在较近的亲缘关系,是研究人类RETN生物学功能及其相关疾病的最佳实验动物。

云南汉族人群NKG2D基因多态性与宫颈癌发生发展的相关性

目的:探讨云南汉族人群NKG2D(member D)基因中的单核苷酸多态性(SNP)位点rs2255336(T>C)及rs2617160(A>T)的多态性与宫颈癌的相关性。方法:选取云南地区汉族宫颈上皮内瘤变(CIN)患者136例作为CIN组、227例宫颈癌患者作为癌症组及483例健康体检人群作为对照组,采用Taqman基因分型法对3组受检者NKG2D基因中2个SNP位点rs2255336(T>C)、rs2617160(A>T)进行基因分型,研究rs2255336(T>C)、rs2617160(A>T)位点的等位基因、基因型及所构建的单倍型在各组中分布频率,用遗传模式分析软件SNPStats分析2个SNP位点的基因型与宫颈癌的相关性。结果:对照组与CIN组NKG2D基因中rs2617160(A>T)等位基因C和T分布频率比较,差异有统计学意义(P=0.049),该位点等位基因A可能是云南汉族人群CIN发生的风险因素(OR=1.31,95%CI为1.00~1.72),而该位点在对照组与癌症组、CIN组与癌症组中的分布频率比较差异无统计学意义(P>0.05);recessive模式为CIN组与对照组分析的最优遗传模式,该模式下TT-AT基因型相对于AA基因型是CIN发生的保护性因素(OR=0.58,95%CI为0.37~0.92);rs2255336(T>C)位点等位基因和基因型在对照组、CIN组、癌症组间的分布频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:NKG2D基因中多态性位点rs2617160(A>T)的等位基因A可能是云南汉族人群宫颈癌发生的风险因素。

新工艺制备Hib结合疫苗原液长期稳定性试验

目的在前期开发的b型流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖提取新工艺及利用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶·四氟化硼(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化的疫苗制备新方法的基础上,评价利用新方法生产的Hib结合疫苗原液的稳定性。方法将疫苗原液在2~8℃条件下放置36个月,根据实验设计,不同时间取样并按照《中国药典》中相应的检测指标、检测方法进行评价。结果新工艺制备的Hib结合疫苗原液在2~8℃储存条件下,大部分指标保持相对稳定,只有分子量大小、高分子结合物含量及效力结果下降,但保存30个月仍符合2010年《中国药典》的相关要求。结论新方法与传统方法生产的Hib结合疫苗原液稳定性基本相同,证明了利用新方法制备Hib结合疫苗的新工艺可以用于扩大生产规模。

LMP7、TAP2基因多态性与云南汉族非小细胞肺癌的相关性

目的:探讨低相对分子量蛋白酶体7基因(LMP 7)及抗原处理相关转运体2基因(TAP 2)中的单核苷酸多态性(SNP)与云南汉族人群非小细胞肺癌的相关性。方法:选取云南汉族非小细胞肺癌患者467例作为病例组、同期健康正常人群488例作为对照组,采用Taq Man探针基因分型方法对TAP2基因的SNP位点rs241447及LMP7基因的SNP位点rs2071543进行基因分型,分析rs241447和rs2071543等位基因和基因型在病例组和对照组间的分布差异,分析这两个SNP位点在肺癌不同临床分期的中分布差异。结果:rs241447在对照组和病例组中基因型的分布频率比较,差异有统计学意义(P=0.015);在超显性遗传模式下,rs241447基因型C/C-T/T可能是云南汉族人群非小细胞肺癌的风险因素(OR=1.38,95%CI为1.07~1.78,P=0.014),rs2071543的等位基因和基因型在对照组和病例组中的分布频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TAP2基因中的SNP位点rs241447可能与云南汉族人群非小细胞肺癌的易感性相关。

树鼩应用于丙型肝炎病毒相关领域的研究进展

丙型肝炎病毒慢性感染已成为世界范围的公共健康问题,由于缺少合适的丙型肝炎病毒研究模型,所以对丙肝病毒感染机制、生活周期和致病机制的研究进展较为缓慢。树鼩属于低等的灵长类动物,许多生物学特性近似于人类。近年来引起医学生物界和相关管理部门的重视和关注,国内外的学者在树鼩是否可作为丙型肝炎病毒感染的动物模型方面作过十分有益的尝试。本文介绍了国内外树鼩应用于丙型肝炎病毒模型研究的进展情况及应用前景。

宿主免疫系统IL-2、TNF-α基因启动子多态性与丙型肝炎病毒慢性感染的相关性研究

目的：探讨白细胞介素2（IL-2）以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）基因启动子SNP位点与丙型肝炎病毒（HCV）慢性感染的相关性。方法：选择云南地区汉族人群HCV慢性感染患者380例,健康体检人群367例,采用Taq Man探针基因分型方法对IL-2基因启动子SNPrs2069762、rs2069763和rs4833248,以及TNF-α基因启动子SNPrs1800629、rs3093668和rs3093726进行基因分型,并构建单倍型,统计IL-2和TNF-α多态性位点的等位基因频率与基因型频率、单倍型频率,分析SNPs及单倍型与HCV慢性感染的相关性。结果：IL-2基因启动子中,病例组和对照组相比,SNPrs2069762基因型差异有统计学意义（P〈0.05,OR=0.864,95%CI为0.700~1.066）,病例组CC基因型频率高于对照组（P〈0.05）,rs2069763等位基因差异具有统计学意义（P〈0.05,OR=1.234,95%CI为1.007~1.513）,病例组等位基因G频率高于对照组（P〈0.05）,rs4833248基因型和等位基因频率差异无统计学意义（P〉0.05）,rs2069762/rs2069763/rs4833248单倍型ATG差异有统计学意义（P〈0.05,OR=0.812,95%CI为0.662~0.996）,病例组单倍型ATG频率低于对照组（P〈0.05）;TNF-α基因启动子SNPrs1800629、rs3093668和rs3093726基因型、等位基因型和单倍型频率,在病例组和对照组中差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：在云南汉族群体中,IL-2基因启动子SNPrs2069762 CC基因型和rs2069763 G等位基因可能是HCV慢性感染的易感因素,rs2069762/rs2069763/rs4833248单倍型ATG可能是HCV慢性感染的保护性因素;TNF-α基因启动子SNPrs1800629、rs3093668和rs3093726与HCV慢性感染没有相关性。