Rheb的功能及其在血液肿瘤中的作用研究进展

Rheb为GTP结合蛋白,可调控细胞的生长、增殖、凋亡、存活以及自噬等细胞的基本生命活动,其与结节性硬化症和某些肿瘤相关。Rheb可调控造血干祖细胞的功能,其过表达可促进淋巴瘤生成,在白血病中可检测到Rheb的过表达。法尼基转移酶抑制剂是Rheb的抑制剂,可通过促进白血病细胞凋亡,抑制白血病进展。此外,法尼基转移酶抑制剂已在血液恶性疾病中进行了Ⅱ/Ⅲ期临床试验,有可能作为药物用于临床。

单克隆抗体治疗成年人急性淋巴细胞白血病研究进展：第55届美国血液学会年会报道

据第55届美国血液学会年会关于单克隆抗体治疗成年人急性淋巴细胞白血病（ALL）最新进展的报道,人源化单克隆抗体和抗原嵌合型受体正成为该领域的热点内容.化疗联合单克隆抗体的应用可有效改善复发难治ALL的疗效和生存.新型免疫治疗药物也逐渐进入临床试验阶段.

阿糖胞苷上调白血病细胞CD86分子及细胞因子表达的研究

目的:观察阿糖胞苷(Ara-C)对急性白血病细胞CD86分子表达的影响,并探讨其作用机制。方法:流式细胞术(FCM)检测U937、HL60、NB4细胞经Ara-C处理前后CD86分子表达变化,RT-PCR检测Ara-C对各组细胞CD86mRNA、NF-κB以及细胞因子IFN-γ的表达变化。结果:经Ara-C处理的急性白血病细胞CD86分子表达与对照组相比均明显升高(P<0.05);CD86mRNA表达水平也明显增强;Ara-C处理后细胞核内NF-κB表达明显上调;并且IFN-γmRNA在T细胞活化72h可检测到。结论:Ara-C能使U937、HL60、NB4急性白血病细胞CD86表达增加,有利于NF-κB等转录因子活化,促进CD86转录增强、表达增加并可有效地增强肿瘤细胞的免疫原性,激活T细胞,B7-2在T细胞活化中起着更重要的作用。

Rheb在人急性髓系白血病中的作用研究

目的:通过检测Rheb在成人急性髓系白血病患者(AML)骨髓细胞中的表达,探讨Rheb在AML发生发展中的作用。方法:选择27例AML患者和29例特发性血小板减少性紫癜(ITP)初诊患者的骨髓单个核细胞(BMMNC),用实时定量PCR(RT-PCR)方法检测Rheb的表达水平;分析Rheb表达水平与AML患者年龄、分型、融合基因、脾脏肿大、肝脏肿大相关性。比较Rheb高表达组与Rheb低表达组患者生存时间的差异。构建过表达Rheb的HL-60细胞,应用不同浓度阿糖胞苷处理HL-60细胞和过表达Rheb的HL-60细胞,用CCK-8法检测细胞增殖情况并计算IC_(50)。结果:Rheb在AML患者骨髓单核细胞中表达与ITP患者骨髓单核细胞的表达相比较没有明显差异。Rheb高表达患者相对预后较好,对阿糖胞苷治疗敏感。Rheb表达量与患者年龄、分型、融合基因和肝肿大不相关,与脾脏肿大相关(P<0.05)。体外实验表明,在AML细胞系HL-60中过表达Rheb,可以提高细胞对阿糖胞苷敏感性(IC50=0.54μmol/L)。结论:Rheb低表达可以预示不良预后,且与AML患者脾脏肿大相关,对阿糖胞苷治疗不敏感。

嵌合式进化及其医学意义

进化医学形成于20世纪90年代初，研究现代人类疾病的病因和生活方式对健康和疾病的影响，即用生态学和进化论的观点、方法研究疾病，近年进化生物学的重要进展——嵌合式进化假设的提出对临床医学有深远的影响和重要意义。

多发性骨髓瘤耐药机制相关研究进展：第55届美国血液学会年会报道

多发性骨髓瘤是第二大血液系统恶性肿瘤,尽管新型药物层出不穷,但仍不可治愈.耐药是骨髓瘤复发和不可治愈的根源之一.文章就第55届美国血液学会（ASH）年会上有关多发性骨髓瘤耐药机制相关研究进展进行概述.

儿童急性淋巴细胞白血病中期因子表达的临床研究

目的:检测儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中期因子(MK)的表达,探讨MK在儿童ALL发病中的意义。方法:应用实时定量PCR(real-timePCR),对124例进展期和缓解期ALL患者、15例正常儿童骨髓标本进行MKmRNA的检测。根据患者初治时外周血白细胞数、年龄、免疫分型及皮质激素预治疗反应等因素把进展期患者分为标危组、中危组和高危组。结果:进展期、缓解期及正常对照组之间MK水平比较差异有统计学意义(P<0.01)。MKmRNA在B-ALL亚型中表达显著高于T-ALL亚型及正常对照(均P<0.01),而T-ALL与正常对照之间MKmRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05)。在ALL危险度各分层中,标危组和中危组的MK表达水平明显高于高危组(P<0.01或P<0.05),标危组与中危组之间差异无统计学意义(P=0.32)。MK表达水平与患儿年龄、性别、血浆乳酸脱氢酶等未显示出相关性(均P>0.05)。高白细胞组(WBC≥25×109/L)MK的表达较白细胞不增高组(WBC<25×109/L)明显降低(P<0.05)。结论:MK表达增高在儿童ALL中可能为预后良好的指标。

多发性骨髓瘤分子细胞遗传学异常及发病机制：第55届美国血液学会年会报道

分子细胞遗传学异常在多发性骨髓瘤（MM）发病中发挥着重要作用,基于分子细胞遗传学异常的危险因素分层已经被大家所接受并逐渐应用于临床,它已经成为MM最重要的分子标志.并且分子细胞遗传学异常与克隆异质性和克隆进化关系密切,高危细胞遗传学异常患者更容易出现克隆异质性和克隆进化现象.以分子细胞遗传学异常为基础的克隆进化和克隆异质性研究可为进一步认识MM生物学特性及实施个体化治疗奠定基础.

FHL2基因及其相关疾病的研究进展

FHL2属于FHL家族,含有4个半LIM结构域,其可以通过LIM结构域与其他蛋白质结合,作为支架蛋白调控细胞信号转导和基因转录,在细胞存活、增殖、分化、黏附以及运动等过程中发挥重要作用。在不同类型的肿瘤中,FHL2的表达水平和功能不尽相同,提示其在不同肿瘤的发生、发展中,既可作为癌基因又可作为抑癌基因,这可能与其在不同细胞类型中结合的相互作用蛋白不同有关。另外,FHL2还参与动脉粥样硬化、阿尔茨海默病等非肿瘤性疾病的发生、发展。

骨髓增殖性肿瘤发病分子机制研究进展

经典的BCR/ABL阴性的骨髓增殖性肿瘤(MPN),包括真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、原发性骨髓纤维化(PMF),是一组起源于多能造血干细胞的恶性骨髓增殖性疾病。单一的JAK2基因V617F突变并不能解释3种疾病临床表现的差异。最近的研究表明,JAK2V617F突变负荷、其他MPN相关基因突变,如TET2、ASXL1等,以及遗传易感性可能参与了MPN复杂的发病机制。本文就这3方面研究进展作一综述。

复发、难治多发性骨髓瘤诊治进展：第19届欧洲血液学会年会报道

复发、难治多发性骨髓瘤（MM）始终是MM治疗领域的一大难题.2014年第19届欧洲血液学会（EHA）年会围绕复发、难治MM,从定义、预后、治疗策略到新的药物进行了详细完整的阐述.兼顾有效性及安全性的新药在这一领域显示了良好的前景.

依据骨髓增生异常综合征患者预后分组和疗效预测模式选择合适治疗：第52届美国血液学年会报道

骨髓增生异常综合征（MDS）是一组异质性极大的疾病，随着治疗手段的改进，特别是一些新药的不断上市，如何进行“个体化”治疗选择是近年不断探究的主要问题。2010年第52届美国血液学年会（ASH）继续教育、口头发言和墙报集中反映了近年在该研究领域的主要进展。

慢性淋巴细胞白血病合并血液系统自身免疫疾病的研究进展

慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞既是肿瘤细胞又是免疫细胞，这种病态细胞免疫功能紊乱，可诱发各种自身免疫疾病，且以血液系统自身免疫疾病为主，表现为红细胞、血小板或白细胞的减少。其发病机制尚不清楚，临床上容易误诊、漏诊。总体上的治疗策略与治疗原发性自身免疫疾病类似，主要问题是如何在治疗自身免疫疾病的同时也兼顾到CLL。

利妥昔单抗联合化疗治疗慢性淋巴细胞白血病的疗效分析

目的探讨利妥昔单抗在慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者中的疗效。方法回顾性分析本院一线应用氟达拉滨+环磷酰胺±利妥昔单抗方案或环磷酰胺+长春新碱+泼尼松±蒽环类药物±利妥昔单抗方案治疗的CLL患者病例资料,比较利妥昔单抗及不同化疗方案的疗效。结果一线采用含利妥昔单抗方案治疗的患者为72例(43.6%);不含利妥昔单抗方案治疗的患者为93例(56.4%)。利妥昔单抗治疗组完全缓解(CR)率和总体反应率(ORR)均显著高于未应用利妥昔单抗治疗组(38.9%比21.5%,P=0.015;83.3%比60.2%,P=0.001)。利妥昔单抗治疗组中位无进展生存期(PFS)为53.0(27.0~79.0)个月,中位总生存时间(OS)为112.0(81.1~142.9)个月,而未应用利妥昔单抗治疗组中位PFS为28.0(18.3~37.7)个月(P=0.094),中位OS为89.0(72.0~106.0)个月(P=0.109),两组比较差异无统计学意义。按是否伴有高危遗传学因素(伴17p缺失或11q缺失)将患者分成高危组和非高危组,高危组联合利妥昔单抗治疗患者可显著提高ORR(86.4%比53.3%,P=0.012),但PFS[14.5(7.9~21.1)个月比20.5(10.7~30.3)个月,P=0.699]及OS[96.0(55.3~136.7)个月比74.0(48.0~100.0)个月,P=0.366]无优势;而在非高危组中,应用利妥昔单抗后患者PFS有延长趋势[71.0(55.3~86.7)个月比38.5(17.7~59.3)个月],但差异无统计学意义(P=0.050)。结论 CLL患者应用利妥昔单抗联合化疗可获得更高的CR率、ORR,并对不伴染色体17p缺失或11q缺失患者的PFS有改善趋势。

新型血友病B基因治疗的腺病毒-整合酶嵌合系统的构建及其体外表达鉴定

本研究构建一种既可高效感染靶细胞又能实现安全定点整合入宿主基因组的腺病毒嵌合载体。通过一系列DNA操作构建腺病毒-整合酶嵌合系统,该系统包含两个腺病毒载体:一个携带转基因表达框,表达框内有hFⅨ,红色荧光蛋白编码序列以及attB(phiC31识别位点),表达框两侧各有1个loxP(Cre识别位点);另一个腺病毒载体携带Cre和phiC31基因。同时构建只表达Cre和只表达phiC31的载体作为对照载体。在体外分别用脂质体转染293A细胞,用荧光显微镜观察荧光蛋白的表达,用RT-PCR鉴定各个基因的表达。结果表明,该腺病毒-整合酶嵌合系统构建成功。体外分别用脂质体转染293A细胞后,可见绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白表达。RT-PCR鉴定表明,该系统能够成功表达各种目的蛋白。结论:成功构建了腺病毒-整合酶嵌合系统,为进一步研究其治疗作用提供良好基础。

人mda-7/IL-24对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑制作用

目的:探索人黑素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation associated gene-7,mda-7;又称IL-24)对慢性粒细胞白血病K562细胞的抑制作用。方法:用RT-PCR法检测11个造血系统恶性肿瘤细胞系mda-7受体的转录情况。用脂质体转染法将构建的重组真核表达载体pTarget-IL-24转染K562细胞。以RT-PCR和Western blotting方法检测转染的K562细胞mda-7的表达情况;通过MTT法、集落形成实验、流式细胞术、Annexin-Ⅴ/PI检测mda-7/IL-24对K562细胞增殖、集落形成、细胞周期和凋亡的影响;以裸鼠移植瘤模型观察mda-7对K562细胞移植瘤的治疗作用。结果:在11个造血系统恶性肿瘤细胞系(NB4、HL60、CEM、Namalwa、Jurkat、KG1a、U937、K562、Ramos、J6-1、HEL细胞)中没有检测到完整mda-7受体的表达。转染mda-7的K562细胞能显著表达mda-7mRNA及其蛋白;其与转染空载体和未转染的K562细胞相比,细胞增殖活力以及集落形成能力明显下降(P<0.05),细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.05),但细胞凋亡率没有明显变化。裸鼠体内实验证实了mda-7/IL-24明显抑制K562细胞移植瘤生长(P<0.01)。结论:mda-7/IL-24对白血病细胞系K562具有明显的体内外抑制作用,该作用与mda-7/IL-24引起细胞周期G0/G1期阻滞有关。

含笑内酯对类风湿关节炎小鼠模型治疗作用研究

目的探讨含笑内酯对类风湿关节炎DBA/1小鼠模型的治疗作用。方法将40只6周龄雄性DBA/1小鼠随机分为4组:未处理的空白对照组(Nor组)、诱导发病并注射甲氨蝶呤药物的甲氨蝶呤治疗组(MTX组)、诱导发病并注射含笑内酯的实验组(MCL组)和诱导发病并注射DMSO的模型对照组(Con组),用牛Ⅱ型胶原法诱导MTX、Con和MCL组小鼠发病建立类风湿关节炎模型;在二次免疫注射24 h后开始隔天腹腔注射给药并对小鼠体重和关节炎发病情况进行隔天观察,给药28次后停止用药,眼球取血、蛋白芯片测血清中细胞因子,处死小鼠取爪子及膝盖做组织病理学检查。结果成功构建了DBA/1小鼠类风湿关节炎模型;各组小鼠之间体重差异无统计学意义(P>0.05);关节炎评价显示MCL组低于Con组(P<0.01),高于MTX组(P<0.01);病理结果显示Nor组小鼠组织正常,Con组受累关节出现炎症细胞浸润、滑膜增生、炎性肉芽组织形成、坏死组织等症状,MCL组与MTX组受累关节仅出现轻于Con组的炎症细胞侵润、滑膜增生等症状;小鼠血清细胞因子检测结果共显示出6种细胞因子:C5/C5a、TIMP-1、M-CSF、sICAM-1、IFN-γ和BLC;Con组的类风湿关节炎小鼠中C5/C5a、TIMP-1和M-CSF表达量降低,经含笑内酯治疗的MCL组中这些因子均有不同程度的恢复(P<0.01),仅仅在MCL组中检测到BLC表达。结论含笑内酯对小鼠DBA/1类风湿关节炎具有治疗作用,C5/C5a、TIMP-1、M-CSF和BLC等因子在这一过程发挥不同的作用。

阿糖胞苷增强白血病细胞B7分子表达及促进双功能抗体对靶细胞的杀伤

目的:研究阿糖胞苷(cytarabine,Ara-C)对白血病细胞共刺激分子B7表达的影响,以及联合双功能抗体anti-CD3/anti-Pgp介导T细胞对耐药白血病细胞的杀伤作用。方法:应用流式细胞术检测白血病细胞株K562和多药耐药白血病细胞株K562/A02细胞经Ara-C刺激不同时间后B7-1、B7-2分子的表达,RT-PCR方法检测B7-1mRNA、B7-2mRNA的表达,MTT法检测经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞对T淋巴细胞增殖的影响。CytoTox96非放射性细胞毒性分析检测Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp微型双功能抗体对人外周血淋巴细胞杀伤K562和K562/A02靶细胞的影响。结果:经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞B7-1、B7-2分子的表达较对照组明显升高;MTT结果显示,经Ara-C刺激的K562和K562/A02细胞能促进T淋巴细胞增殖;Ara-C联合anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体在0.39:1～25:1效靶比范围内,随着效靶比的升高,介导T淋巴细胞对K562和K562/A02细胞的杀伤率随之提高,对高表达Pgp的耐药K562/A02细胞尤为明显。结论:Ara-C可上调白血病细胞B7分子的表达,从而增强anti-CD3/anti-Pgp双功能抗体介导的T细胞对靶细胞的体外杀伤作用。

慢性淋巴细胞白血病503例临床及实验室特征回顾性分析

目的 探讨慢性淋巴细胞白血病（CLL）患者的临床及主要实验室特征.方法 回顾性分析1998年10月至2015年2月收治的503例CLL患者的临床及实验室检查资料,应用χ2检验进行差异性检验,并利用Log-rank法检验各组患者生存率的差异.结果 503例CLL患者中位年龄58岁（26~86岁）,男性335例,女性168例.初诊时临床分期以Binet A期为主,为204例（40.5%）,其次为Binet B期和C期,分别为148例（30.1%）和151例（29.3%）.初诊时108例（21.1%）患者存在贫血（血红蛋白〈100 g/L）;427例进行血清乳酸脱氢酶检测的患者中,有113例（26.5%）升高;344例进行CD38检测的患者中有100例（29.1%）表达阳性.330例具有完整荧光原位杂交（FISH）资料的患者中,156例（47.3%）伴13q缺失（13q-）,为检出率最高的细胞遗传学异常;其次为IgH易位（22.4%）,12号染色体三体（＋12,21.2%）和17p缺失（17p-,14.5%）.在230例进行免疫球蛋白重链可变区（IGHV）突变状态检测的患者中,165例（71.7%）IGHV为突变状态,表达V4-34基因的患者比例最高,占12.4%（28例）.中位无进展生存（PFS）时间为89.0个月（95%CI 75.0~103.0个月）,中位总生存（OS）时间为129.0个月（95%CI 106.9~151.1个月）.结论与欧美国家的CLL患者相比,本组CLL患者发病年龄偏低,总体生存期较长,一定程度上反映了我国CLL患者的特点.