心血管疾病的分子生物学简介（2）──3 载脂蛋白基因异常表达引起的高脂血症和动脉粥样硬化及转基因技术在研究心血管疾病中的意义

心血管疾病的分子生物学简介（２）──３载脂蛋白基因异常表达引起的高脂血症和动脉粥样硬化及转基因技术在研究心血管疾病中的意义动脉粥样硬化（ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ，ＡＳ）的形成因素涉及血管内膜的损伤、平滑肌细胞的增殖，也涉及血液组成成分的异常变化...

基于阴火理论的中西医结合免疫调节治疗展望

免疫治疗已成为当今医学解决重大疑难疾病的突破口之一,但其面临的挑战仍然不少。当前,中医学的阴火理论受到广泛关注,被应用于多种疾病的治疗中,其机制与调节机体的免疫状态密切相关。本文在系统回顾中医药免疫调节研究进展的基础上,以挖掘阴火理论的科学内涵为切入点,讨论阴火理论下指导中西医结合免疫治疗的可能性和新思路。多种中药单体、有效部位或者复方免疫促进、免疫抑制或者双向调节作用,在免疫调节中展现了巨大的潜力。阴火理论与免疫调节的关联密切,阴火的产生与免疫异常、慢性炎症、代谢异常、应激等密切相关,临床运用阴火理论治疗相关疾病能够有效调节免疫功能,降低炎症水平。阴火理论是深入传承中医药原创理论精华,有效对接西医免疫相关理论的范例,但仍需开展相关系统生物学研究,进一步升华中医药理论和实践经验,从而发挥中医药的特色优势,解决重大疑难疾病防治中的免疫失调难题,赋予生命科学新内涵,推动临床应用、验证和创新发展。

真核生物中锌指蛋白的结构与功能

真核生物中的许多蛋白质分子包含锌指结构区,这类蛋白称为锌指蛋白.锌指蛋白因其包含特殊的指状结构,在对DNA、蛋白质和RNA的识别和结合中起重要作用.许多锌指蛋白的锌指结构域包含能与DNA特异结合的区域,并与某些效应结构域(如KRAB、SCAN、BTB/POZ、SNAG、SANT和PLAG等)相连,这类锌指蛋白常作为转录因子起作用,可调控靶基因的转录.一些锌指蛋白包含蛋白质识别结构域(如LIM锌指、MYND锌指、PHD锌指和RING锌指等),它们能够特异地介导蛋白质之间的相互作用,因此被称作蛋白适配器.此外,某些锌指蛋白还可以结合RNA,起转录后调控作用.本文就锌指蛋白与DNA、RNA以及蛋白质分子间的相互作用作一综述.

解偶联蛋白2基因多态性与维吾尔族自然长寿的关联研究

目的探讨解偶联蛋白2(UCP2)基因-866 G/A、A55V和3′非翻译区(UTR)插入/缺失(I/D)多态性与维吾尔族自然长寿的关联。方法以新疆和田地区191名维吾尔族自然长寿个体为研究对象,以53名75岁前自然死亡的同地区、同民族个体作为对照。采用PCR-限制长度片段多态性(PCR-RFLP)和PCR-直接测序法对UCP2基因-866 G/A、A55V和3′-UTR I/D多态性进行分型。结果启动子-866G/A变异AA基因型与长寿相关,A55V多态性和3′-UTR I/D多态性基因型、等位基因分布在长寿组和对照组之间无差异。结论 UCP2基因启动子-866G/A多态性与长寿相关。

MiR-146a调节TRAIL不敏感的乳腺癌细胞迁移及其分子机制

目的研究miR-146a及其靶基因EGFR对乳腺癌细胞迁移的影响。方法用终浓度为50、100、200和500μg/L的重组可溶性TRAIL(rsTRAIL)持续刺激对TRAIL敏感的MDA-MB-231细胞4周,筛选得到TRAIL不敏感的乳腺癌细胞MDA-MB-231/TR。RT-PCR检测miR-146a的表达;Transwell实验以及划痕实验检测乳腺癌细胞的迁移能力;双荧光素酶报告基因分析以及Western blot鉴定MDA-MB-231/TR细胞中miR-146a与EGFR基因的靶向调控关系;Western blot检测DR4、DR5、IRAK1、CXCR4、p-IκBα、IκBα、caspase 8和caspase 3的蛋白表达水平;染色质免疫共沉淀技术(ChIP)分析MDA-MB-231和MDA-MB-231/TR细胞中NF-κB P65亚基与miR-146a启动子区的结合情况。结果 TRAIL细胞毒作用不敏感的人乳腺癌细胞系MDA-MB-231/TR中miR-146a的表达降低,并引起其靶基因EGFR的表达增加,最终导致TRAIL不敏感的乳腺癌细胞迁移能力增强。同时发现NF-κB参与miR-146a低表达的调控。结论 miR-146a对TRAIL不敏感的乳腺癌细胞迁移起重要的调节作用。

小鼠肝脏胰岛素受体的特异性敲除降低极低密度脂蛋白中三酰甘油分泌的研究

目的:建立肝组织特异性胰岛素受体急性缺失的动物模型,分析胰岛素信号缺失对三酰甘油代谢的影响。方法:在构建腺病毒时,利用Cre-LoxP系统机制,在Cre重组酶基因的上游插入肝组织特异性表达的白蛋白基因启动子。扩增纯化病毒,经小鼠尾静脉注射病毒14 d后,收集小鼠血浆,测定极低密度脂蛋白三酰甘油分泌速率,抽提肝脏脂质并用酶法检测脂质含量,用免疫印迹法分析胰岛素受体和脂代谢相关基因在肝脏内的表达。结果:成功构建了肝脏特异性胰岛素受体急性缺失动物模型。胰岛素信号缺失显著降低了小鼠肝脏的极低密度脂蛋白三酰甘油的分泌速度,同时也下调了肝脏脂肪酸合成相关基因和极低密度脂蛋白形成相关基因的表达。结论:肝脏胰岛素信号急性缺失降低极低密度脂蛋白中三酰甘油的分泌速度,这种变化可能和肝脏内脂肪酸的合成速度下降有关。

癌基因组学研究进展

癌是一种基因组疾病,其主要的特征是基因组不稳定性。癌基因组不稳定性表现为单核苷酸突变、微卫星不稳定性、基因结构和拷贝数改变、染色体杂合性和纯合性丢失以及表基因组效应等。癌基因组不稳定性来源于胚系突变和体细胞突变。搞清基因组不稳定性与癌发生发展的关系对于癌的诊断、治疗、预防和药物研制具有重要意义。本文介绍癌基因组学的几个主要研究领域,包括癌基因组不稳定性、癌易感基因的筛查与鉴定以及基因表达谱与临床表型的关系等。

5-氟尿嘧啶诱导细胞凋亡的分子机制

5-氟尿嘧啶(5-FU)是嘧啶类抗代谢药物,临床作为肿瘤的化疗药物已有30多年的历史,目前是大多数肿瘤治疗的常用药物之一,并为乳腺癌、头颈部肿瘤和大肠癌治疗的首选药。研究表明5-FU的抗肿瘤作用与其参与代谢相关。5-FU与内源性核酸前体尿嘧啶结构上差别只在于嘧啶环上第5位的碳被氟原子置换,生物学特性与天然嘧啶相似,决定5-FU能以多种形式参与细胞的生命活动。

前进中的动态突变研究

不稳定三核苷酸重复序列的动态突变为我们揭示了导致人类遗传疾病的一种新突变类型。迄今已发现ＦＲＡＸＡ，ＳＢＭＡ，ＤＭ，ＨＤ，ＳＣＡ１．ＦＲＡＸＥ和ＤＲＰＬＡ等７种重要的遗传疾病写动态突变有关，这一新突变机制的发现阐明了早现和不完全外显的分子机制；提供了简便有效的ＤＮＡ直接诊断方法；同时也提出了许多新的问题，成为当前遗传学，生物化学，分子生物学和神经生物学研究的一个新的热点。

酵母双杂交体系(Yeast Two-Hybrid System):一种研究蛋白一蛋白相互作用的强有力方法

双杂交体系是研究蛋白一蛋白相互作用的一种有效方法。将相互作用的两个蛋白分别与转录因子的DNA结合结构域和转录激活结构域融合成两个杂交体，在酵母细胞内，通过报告基因的表达情况反映两蛋白之间的相互作用。其主要特点是操作简单，可以研究蛋白间弱相互作用，通过筛库可直接得到与目的蛋白相互作用蛋白的DNA序列。用双杂交体系筛库时最值得注意的是假阳性问题。

免疫系统中编程性细胞死亡的分子机制

免疫系统中编程性细胞死亡的分子机制郑德先（中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室，血液学研究所实验血液学国家重点实验室）免疫细胞从其前体细胞发育成熟到抗原应答反应过程中，始终伴随着编程性细胞死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｌｌｄｅａｔ...

应用改良体细胞基因敲入技术内源标记跨膜丝氨酸蛋白酶RHBDD1的研究

目的应用改良的体细胞基因敲入技术将标签序列靶向敲入目的基因。方法设计引物并构建RHBDD1的打靶载体,经过腺相关病毒包装、感染、新霉素筛选和鉴定等步骤获得含有新霉素抗性的阳性单克隆细胞株,最后通过cre病毒感染和筛选获得RHBDD1内源敲入FLAG和SBP双标签的HCT116结直肠癌细胞株。结果经过包装病毒感染与筛选验证后得到6个打靶阳性克隆;进一步经cre病毒感染与筛选后得到2株去除新霉素抗性标记的阳性细胞克隆;通过Western blotting实验证明RHBDD1-FLAG-SBP融合蛋白的表达。结论通过改良的体细胞基因敲入技术成功构建跨膜丝氨酸蛋白酶RHBDD1内源敲入FLAG和SBP双标签的HCT116结直肠癌细胞株。

两个多发性内分泌腺瘤病2A型家系RET基因突变研究

目的总结2个多发性内分泌腺瘤病2A(MEN2A)型家系的临床特点,及MEN2A家系RET基因突变类型。方法对2个MEN2A家系进行临床调查,分析其临床特点。提取2个家系成员外周血基因组DNA,扩增先证者RET原癌基因的外显子10、11,13-16,并行Sanger测序,测得突变所在的外显子后,将其亲属相应外显子的扩增产物进行测序。结果家系1的先证者及其哥哥的10q 11.2外显子11(密码子634)RET原癌基因发生点突变:Cys643Trp。家系2的先证者其兄长存在10q 11.2外显子11(密码子634)RET原癌基因发生点突变:Cys643Arg,筛查出1个家系成员为基因突变携带者。结论 RET原癌基因第11外显子Cys643Trp杂合突变及Cys634Arg杂合突变,均为MEN2A的致病基因,此2个家系患者虽然突变类型不同,但两家系患者在起病方式、发病年龄及临床表现均相似。基因检测是诊断MEN2A的有效方法。

Apo(a)结构基因5′调控区多个基因多态性与颅内动脉瘤的相关性研究

目的探讨Apo(a)结构基因(APOA)5′调控区多个基因多态性与颅内动脉瘤发病的关系。方法选择经全脑动脉造影证实为颅内动脉瘤的患者90例和健康对照者96例为研究对象,采集其血浆,提取白细胞基因组DNA,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)结合琼脂糖凝胶电泳(AGE)和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)等方法,检测Apo(a)的结构基因5′调控区-1500位点五核苷酸重复序列的多态性(PNR) [(TTTTA)n]、-914位点G／A、-49位点C／T、-21位点G／A等多态性的基因型和等位基因在中国人群中的分布。结果两组研究对象Apo(a)结构基因的PNR共检测出8种基因型和5种等位基因,两组间差别无显著性意义;两组研究对象的-914位点G／A多态性分布间差别无显著性意义,但组内分析显示-914位点G／A多态性与动脉瘤大小相关;两组研究对象均未发现存在-49位点C／T、-21位点G／A多态性。结论未发现Apo(a)结构基因5′调控区多个基因多态性与颅内动脉瘤发病有相关性;Apo(a)结构基因5′调控区-914G／A等位基因可能与动脉瘤的发展相关,具体机制有待进一步研究;Apo(a)结构基因5′调控区-49C／T、-21G／A的多态性在中国人群中可能并不存在。

转基因小鼠在脂质代谢研究中的应用

转基因小鼠在脂质代谢研究中的应用汝昆综述琦祖和校（中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室，北京）动脉粥样硬化是一种严重危害人类身体健康的多发性疾病，该病与脂质代谢紊乱有非常密切的关系。本文综述了近年来转基因小鼠技术在脂质代谢研究中的...

肿瘤靶向药物研究进展与展望

肿瘤靶向药物是指与肿瘤发生、生长、转移和凋亡密切相关的分子或基因为靶点而设计的药物，应用肿瘤靶向药物治疗肿瘤是肿瘤治疗的首选策略。

建立α与β珠蛋白基因簇转基因鼠模型及β基因族反式因子研究

随着人类功能基因组研究的广泛开展,理解基因组中的遗传信息如何协调、有序地调控细胞分化与个体发育的时空过程成为研究的基本问题,阐明这一机制是真核基因表达调控研究的根本任务.

白细胞介素2受体α链基因的体外转录研究

白细胞介素2受体(IL2R)由α,β和γ链所组成,其中γ链不直接与IL2结合,它与组成性表达的β链一起主要参与信号的内传,因此α链的表达成为高亲合力受体是否存在的关键。IL2Rα基因的启动子区包含-58bp和+1bp两个主要转录起始点及它们的上游-90bp和-30bp处的两个TATA盒;

固相DNaseⅠ足迹法研究DNA-蛋白质相互作用

传统的DNaseⅠ足迹法程序繁杂 ,并且要求目的蛋白经过一定程度的纯化 .而固相DNaseⅠ足迹法通过结合有模板的磁珠 ,先富集序列特异的DNA结合蛋白 ,进行DNaseⅠ酶切 ,然后用测序胶分离并分析结果 .此方法简便易行 ,重复性好 ,并减少了对操作者的放射性损害 。